一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法及其指纹图谱

本发明属于中药分析，具体涉及一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法及其指纹图谱。

背景技术：

1、经典名方苏葶丸出自清朝吴谦所著的《医宗金鉴》，该方由紫苏子和葶苈子两味药材组成，处方及制法为：南苏子(炒)、苦葶苈子(微炒)各等分。右为细末，蒸枣肉为丸，如麻子大。功效为肺降逆，利水化饮。主治小儿饮停上焦证饮停上集攻肺，喘满不得卧，面身水肿，舌淡红，苔薄，脉沉，小便不利者。

2、经典名方是指“至今仍广泛运用、疗效确切、具有明显特色与优势的古代中医典籍所记载的方剂”。古代医籍中有较多记载及医案证据，现代文献中有较多临床及实验研究报道，从而得到中医临床进一步凝练、达成专家共识。经典名方若采用现代制备工艺，制成符合现代应用制剂，会与古代医籍记载原方有所不同，因此需要建立特征图谱与指纹图谱标准，从而最大程度保证经典名方与原方疗效和质量的一致性。中药指纹图谱作为一种中药质量控制技术及方法，具有多组分分析、综合性和标准化特点，能较为全面地反应中药的整体质量，全面反映中药所含内在化学成分的种类与数量，进而反映中药的质量。目前，对苏葶丸成分分析的研究较少，多数为方中单味药的成分研究，缺少有关苏葶丸更为综合、全面的质量控制研究，不能反应中医药多成分共同作用的药效特点，亦无法为其质量提供控制与评价依据。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法及其指纹图谱，用以解决现有方法无法综合、全面控制苏葶丸质量的技术问题。

2、为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

3、本发明的第一个方面，公开了一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

4、s1、分别称取不同批次的苏葶丸物质基准，采用甲醇溶液进行提取，过滤，得到供试品溶液；

5、s2、精密称取槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、迷迭香酸、木犀草素和芹菜素对照品，溶解，得到单一对照品溶液；

6、s3、取s1中的供试品溶液和s2中的对照品溶液进行色谱分析，得到各色谱图，从供试品溶液的图谱中选择共有峰，构建苏葶丸物质基准指纹图谱；

7、s4、将s3中获得的不同批次供试品溶液色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行相似度分析，确认结果的可靠性；

8、s5、对供试品溶液进行高分辨质谱分析，得到总离子流图以及化学成分的质谱结果图，根据化学成分出峰情况进行数据分析，根据总离子流图以及化学成分的质谱结果图结合对照品色谱图确定供试品色谱图中各峰的化学成分。

9、优选地，s1中，所述甲醇溶液为80％甲醇溶液。

10、进一步优选地，s1中，超声提取30min。

11、优选地，s2中，以纯甲醇溶液作为溶解溶剂。

12、优选地，s2中，每1ml单一对照品溶液中含槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷标准品30μg，槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷标准品30μg，迷迭香酸标准品80μg，木犀草素标准品80μg，芹菜素标准品70μg。

13、优选地，s3中的液相色谱条件为：色谱柱：shim-pack vp-ods，250mm×4.6mm，5μm；检测器：紫外可见吸收检测器，检测波长为254nm。

14、进一步优选地，流速为0.8ml/min。

15、优选地，洗脱程序如下：

16、

17、优选地，s4具体为：将s3中获得的不同批次供试品溶液色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，选择不同批次苏葶丸物质基准的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；经过数据导入、多点矫正和数据匹配，进行相似度分析；获得不同批次苏葶丸物质基准色谱图与共有峰模式之间的相似度结果表并导出；根据相似度结果表及苏葶丸物质基准色谱图，确认结果的可靠性。

18、优选地，s5中的高分辨质谱检测条件为：电喷雾电离，喷雾电压3500v，鞘气流速40arb，辅助气流速10arb，毛细管温度300℃，辅助气温度300℃，扫描模式为全扫描模式，质荷比扫描范围m/z为200-1500。

19、优选地，s5中，确定指纹图谱中各峰的化学成分，分别为：9号峰为槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷，22号峰为槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷，27号峰为迷迭香酸，29号峰为木犀草素，30号峰为芹菜素。

20、本发明的第二方面，公开了上述方法得到苏葶丸物质基准指纹图谱，9号峰为槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷，22号峰为槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷，27号峰为迷迭香酸，29号峰为木犀草素，30号峰为芹菜素。

21、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

22、本发明提供的一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，采用液质联用技术构建苏葶丸物质基准指纹图谱，并分析确认所含化学成分的种类与数量，能够对其中的关键药效成分进行快速、准确、全面、科学地分析，充分反映苏葶丸的整体性和特征性，为其复方制剂质量标准的制定和提升奠定扎实的前期基础，对苏葶丸的成分鉴别、质量评价以及质量标准的制定具有重要的意义。该方法操作简便、稳定性好、精密度高且重现性好，构建的指纹图谱信息丰富，最终指认出5个共有峰和标准指纹图谱，可从总体上反映苏葶丸中所含化学成分的信息，为其质量控制及药效物质基础提供依据，有助于从整体上评价苏葶丸的质量。

23、进一步地，选用80％甲醇溶液进行提取，能够保证色谱图信息丰富，成分含量最高且具有良好的分离度。

24、进一步地，采用超声提取30min的方法，能够保证色谱图的成分全面，分离度良好。

25、进一步地，选用254nm的检测波长，能够保证检测基线平稳，各个物质的分离效果较好，色谱峰信息丰富。

26、进一步地，选择流速为0.8ml/min，能够保证良好的色谱图出峰情况和分离度。

27、进一步地，选定以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相和所述的洗脱程序，能够保证苏葶丸中各成分分离效果好，峰高，基线平稳，色谱信息完整。

技术特征：

1.一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，其特征在于，s1中，所述甲醇溶液为80％甲醇溶液。

3.根据权利要求2所述的一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，其特征在于，s1中，超声提取30min。

4.根据权利要求2所述的一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，其特征在于，s3中的色谱条件为：色谱柱：shim-pack vp-ods，250mm×4.6mm，5μm；检测器：紫外可见吸收检测器，检测波长为254nm。

5.根据权利要求4所述的一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，其特征在于，流速为0.8ml/min。

6.根据权利要求4所述的一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，其特征在于，洗脱程序如下：

7.根据权利要求1所述的一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，其特征在于，s4具体为：将s3中获得的不同批次供试品溶液色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，选择不同批次苏葶丸物质基准的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；经过数据导入、多点矫正和数据匹配，进行相似度分析；获得不同批次苏葶丸物质基准色谱图与共有峰模式之间的相似度结果表并导出；根据相似度结果表及苏葶丸物质基准色谱图，确认结果的可靠性。

8.根据权利要求1所述的一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，其特征在于，s5中的高分辨质谱检测条件为：电喷雾电离，喷雾电压3500v，鞘气流速40arb，辅助气流速10arb，毛细管温度300℃，辅助气温度300℃，扫描模式为全扫描模式，质荷比扫描范围m/z为200-1500。

9.根据权利要求1所述的一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法，其特征在于，s5中，确定指纹图谱中各峰的化学成分，分别为：9号峰为槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷，22号峰为槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷，27号峰为迷迭香酸，29号峰为木犀草素，30号峰为芹菜素。

10.采用权利要求1～9任意一项所述的方法得到苏葶丸物质基准指纹图谱，其特征在于，9号峰为槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷，22号峰为槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷，27号峰为迷迭香酸，29号峰为木犀草素，30号峰为芹菜素。

技术总结本发明公开了一种苏葶丸物质基准指纹图谱的构建方法及其指纹图谱，属于中药分析技术领域。首先制备供试品溶液和单一对照品溶液；然后采用Shim‑pack VP‑ODS(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱进行色谱分析，流动相为乙腈(A)‑0.1％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，构建苏葶丸物质基准指纹图谱；最后通过相似度分析和高分辨质谱分析，获取供试品色谱图中各峰的化学成分。通过液质联用，操作简便、稳定性好、精密度高且重现性好，构建的指纹图谱化学信息丰富，能良好分离多种有效成分，结合对照品溶液色谱图，最终指认出5个化学成分，可有效且全面地对苏葶丸及其药物制剂进行检测，填补苏葶丸质量控制中指纹图谱的空白，为苏葶丸及其相关制剂研究提供参考和依据。技术研发人员：梁承远,胡津荣,白秀丽,张博鑫,孟建国,路琦,刘玉婷,王燕子,李菡,赵倩倩,杨岫锭,张德柱,高鸿受保护的技术使用者：陕西科技大学技术研发日：技术公布日：2024/9/12