新型冠状病毒防护鼻喷剂及其制备和使用的制作方法

本公开内容在一些方面涉及用于预防冠状病毒感染的新型冠状病毒防护鼻喷剂，其具有包含血管紧张素转化酶2(ace2)的融合蛋白，例如人ace2与人igg1 fc融合形成的融合蛋白。

背景技术：

1、冠状病毒感染广泛范围的鸟类和哺乳动物，包括人类。冠状病毒可能每年在人群内传播，通常会引起轻微的呼吸系统疾病，尽管在婴幼儿、老年人和免疫功能低下的人群中严重程度更高。但是，某些冠状病毒，包括中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(sars-cov-1)和严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)，具有高致病性。而且新冠病毒变异速度快，从2020年末开始，携带有突变的可能导致免疫逃逸的多重变异sars-cov-2毒株(voc)开始出现，可是常规疫苗研发上市周期较长，远不足以应对新冠病毒给工作、生命健康和全球的防疫工作带来的威胁。因此，具有广谱防护作用的应急技术装备对于降低感染大众风险，减轻防疫工作压力，提高社会生活活力有重要作用。本发明提供了满足上述和其它需要的方法、用途和制品(article of manufacture)。

技术实现思路

1、在全球covid-19病例激增的同时，从2020年底开始出现多种新的sars-cov-2变异株(voc)。这些voc似乎与刺突(s)蛋白的突变有关，突变可能会增加病毒传播率和/或基于sars-cov-2 hu-1毒株的第一波covid-19疫苗接种引起的免疫逃逸。b.1.1.7变种在英国(uk)、b.1.351变种在南非和p.1变种在巴西的出现和传播导致其被归类为voc。这些voc都包括s蛋白的受体结合结构域(rbd)中的n501y突变，据报道，该突变可使传播增加40％至70％。b.1.351和p.1变种还有两个另外的rbd突变——e484k和k417——这可能允许从hu-1疫苗和自然感染诱导的抗体中免疫逃逸。

2、covid-19疫苗的随机对照临床试验表明，与sars-cov-2 hu-1毒株相比，疫苗对voc的有效性降低。基于佐剂蛋白的covid-19疫苗nvx-cov2373在英国(b.1.1.7占主导地位)的有效性为89％，但在南非(b.1.351占主导地位)的有效性仅为49％。腺病毒载体covid-19疫苗chadox1对b.1.351变种的有效性仅为10％。辉瑞疫苗接种者对b.1.351变种的有效性为75％，而对hu-1的有效性为95％。coronavac是基于hu-1毒株的灭活疫苗，接种该疫苗的受试者未检测到针对p.1的中和抗体滴度。

3、虽然有一些令人鼓舞的证据表明，hu-1covid-19疫苗可能会预防由voc引起的严重疾病和死亡，但对任何传播率上升的covid-19疾病的疫苗有效性较低，可能会使实现群体免疫特别困难。如果不能得到有效控制，sars-cov-2 voc在全球的迅速传播可能会导致新的目标变种或可能包含新的逃逸突变的voc的继续出现，例如印度变种(b.1.617)，它与2021年春季covid-19病例的大规模激增同时出现，现已被世卫组织宣布为新的voc。该谱系的b.1.617.2变种被命名为德尔塔(delta)。还有，在南非首次发现的b.1.1.529变种被重新命名为奥密克戎(omicron)。

4、在这些情况下，必须迅速评估其它可以广泛应对vocs的防疫方法。在一些实施方案中，本文公开了包含多种重组多肽的蛋白质。该多种重组多肽是包含ace2和fc(fragmentcrystallizable)融合蛋白、多肽。

5、用全人源抗体fc融合蛋白技术，可大幅度提高可溶性蛋白的体外无血清表达水平，便于亲和纯化、提高ace2-fc蛋白体内外稳定性。由于ace2-fc为全人源融合蛋白，并且给药途径为鼻喷被动免疫方式，因此预期安全性好.

6、在一些实施方案中，本文公开了一种用于鼻喷剂的包含多个重组多肽的可溶的融合蛋白质，所述融合蛋白质包含人类ace2蛋白质或片段和人类fc蛋白质或片段，所述融合蛋白质通过一个或多个结合位点特异性地结合至野生型，变体型或突变型人类ace2受体。

7、在前述实施方案中，所述人类ace2蛋白质片段包含人类ace2胞外域或片段。

8、在前述任一实施方案中，所述人类ace2蛋白质或片段包含与自由选自seq id no：5，7，11，12，13或14中记载的氨基酸序列为至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性的氨基酸序列。

9、在前述任一实施方案中，所述人类ace2蛋白质或片段包含与seq id no：5记载的氨基酸序列为至少85％、90％、95％或100％同一性的氨基酸序列。

10、在前述任一实施方案中，在前述任一实施方案中，所述人类fc蛋白质或片段包含自由选自人类igg1 fc，igg2 fc，igg3 fc，igg4 fc的任一或几种分子或片段。

11、在前述任一实施方案中，所述人类fc蛋白质或片段选自人类igg1 fc分子或片段。

12、在前述任一实施方案中，所述人类fc蛋白质或片段包含与seq id no：6或8中记载的氨基酸序列为至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性的氨基酸序列。

13、在前述任一实施方案中，所述的包含多个重组多肽的融合蛋白质包含自由选自包含于seq id no：1-14的任一序列或其组合。

14、在前述任一实施方案中，任一项所述的包含多个重组多肽融合蛋白质，还包含可检测标签。

技术特征：

1.一种用于鼻喷剂的包含多个重组多肽的可溶的融合蛋白质，所述融合蛋白质人类ace2蛋白质或片段和人类fc蛋白质或片段，所述融合蛋白质通过一个或多个结合位点特异性地结合至野生型，变体型或突变型人类ace2受体。

2.根据权利要求1所述的包含多个重组多肽的融合蛋白质，所述人类ace2蛋白片段包含人类ace2胞外域或片段。

3.根据权利要求1或2所述的包含多个重组多肽的融合蛋白质，所述人类ace2白质或片段包含与自由选自seq id no：5，7，11，12，13或14中记载的氨基酸序列为至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求1至3中的任一项所述的包含多个重组多肽融合蛋白质，所述人类ace2蛋白质或片段包含与seq id no：5记载的氨基酸序列为至少85％、90％、95％或100％同一性的氨基酸序列。

5.根据权利要求1至4中的任一项所述的包含多个重组多肽融合蛋白质，所述人类fc蛋白质或片段包含自由选自人类igg1 fc，igg2 fc，igg3 fc，igg4 fc的任一或几种分子或片段。

6.根据权利要求1至5中的任一项所述的包含多个重组多肽的融合蛋白质，所述人类fc蛋白质或片段选自人类igg1 fc分子或片段。

7.根据权利要求6所述的包含多个重组多肽的融合蛋白质，所述人类fc蛋白质或片段包含与seq id no：6或8中记载的氨基酸序列为至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性的氨基酸序列。

8.根据权利要求6至7中的任一项所述的包含多个重组多肽融合蛋白质，所述人类fc蛋白质或其片段包含与seq id no：6中记载的氨基酸序列为至少85％、90％、95％或100％同一性的氨基酸序列。

9.根据权利要求1所述的包含多个重组多肽的融合蛋白质包含自由选自包含于seq idno：1-14的任一序列或其组合。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的包含多个重组多肽融合蛋白质用于对象的预防或治疗冠状病毒sars-cov-2及其变体和/或突变体感染的用途。

技术总结本发明在一些方面涉及全人源ACE2‑Fc融合蛋白及其组合物与制剂，例如包含ACE2‑Fc融合蛋白组合物的鼻喷剂。在一些方面，所述全人源ACE2‑Fc融合蛋白为水溶性。在一些方面，所述融合蛋白可用于预防冠状病毒感染，例如SARS‑CoV‑2 Hu‑1、阿尔法、贝塔、伽马、德尔塔、缪、奥密克戎和/或其它毒株的感染。本文还提供了用于产生所述融合蛋白的方法、及其使用该融合蛋白进行预防病毒感染的方法以及相关试剂盒。在另外一些方面，本发明的全人源ACE2‑Fc融合蛋白及其组合物与制剂可以防止已感染对象的冠状病毒SARS‑CoV‑2及其变体和突变体的传播，也可以用于对已感染冠状病毒SARS‑CoV‑2及其变体和突变体的对象的治疗。技术研发人员：梁朋受保护的技术使用者：四川三叶草生物制药有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/17