水性啤酒花提取物及其作为抗微生物剂的用途的制作方法

背景技术：

1、抗微生物耐药性是对全球公共卫生日益严重的威胁，需要政府和社会所有部门立即采取行动。虽然药物处方抗生素的库很大，但是细菌继续演化并逃避商业抗生素的抗微生物活性。这导致了抗生素耐药性的发展。

2、细菌耐药菌株的发展是自然现象，当微生物错误地复制自己或当它们之间的耐药性状发生交换时就会发生所述自然现象。抗微生物耐药性可能是基于基因的。例如，耐药性可以通过获得含有赋予对某些抗生素耐药性的基因的染色体外遗传元件来介导。此类元件的示例包括质粒、转座遗传元件和基因组岛，其可以通过水平基因转移在细菌之间转移。

3、抗微生物药物的使用和误用加速了耐药菌株的出现。不良的感染防治措施、不充分的卫生条件和不适当的食品处理鼓励了抗微生物耐药性的进一步传播。

4、导致常见感染(例如，尿路感染、肺炎和血液感染)的细菌中的高比例抗生素耐药性引起了关注，因为目前批准的抗生素剂在治疗此类感染时不那么有效。例如，当今抗生素r&d的重要目的是找到有效治疗例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)(mrsa)的化学剂，所述化学剂是医院、老年人、婴儿和免疫力低下的人的大部分细菌感染的原因。

5、狄斯瓦螨(varroa destructor)和雅氏瓦螨(v.jacobsoni)是攻击和取食蜜蜂(中华蜜蜂(apis cerana))和(西方蜜蜂(apis mellifera))的外部寄生螨。这种由螨引起的疾病称为瓦螨病。瓦螨可以仅在蜜蜂群中繁殖。其附着到蜜蜂的身体，并且通过吮吸脂肪体来削弱蜜蜂。所述物种是至少五种使人虚弱的蜜蜂病毒的载体，包括rna病毒，诸如残翅病毒(dwv)。

6、西方蜜蜂(西方蜜蜂(apis mellifera))是多面手传粉者，并且在全球农业中，管理的西方蜜蜂群被广泛用于许多农作物和生长在开阔田地的水果的传粉。此外，西方蜜蜂还为许多野花授粉，从而有助于自然生态系统的生物多样性。

7、美洲幼虫腐臭病是西方蜜蜂幼虫的世界性分布的致命疾病。该致命性育雏病的致病因子是革兰氏阳性的孢子形成细菌幼虫类芽孢杆菌(paenibacillus larvae)，其可以分为四种不同的基因型(eric i-iv)，其中eric i和ii是从当代afb疫情中分离的基因型。因此，对蜜蜂构成最严重威胁的病原体是幼虫类芽孢杆菌。幼虫类芽孢杆菌(p.larvae)仅感染蜜蜂幼虫，因此，afb仅影响蜜蜂幼虫，但如果未经治疗，所述疾病仍能够杀死整个群。afb具有高度感染性，并且在蜜蜂群和养蜂场内部和之间传播速度很快。具体地，在正常的养蜂条件下，afb具有高度感染性，因为通过在蜂群之间交换蜂巢和蜜蜂材料、在有限的区域内管理大量蜂巢以及交易蜂王、蜂群(“笼蜂”)和蜂蜜，促进了疾病的传播。燃烧蜂群和被污染的蜂巢材料被广泛认为是对患病群的唯一可行的防治措施，而振群法(将蜜蜂振荡到新的雏巢基础上并破坏被感染的雏巢)有时被施加至净化被感染的、尽管尚未临床患病的蜂群。

8、afb仅影响蜜蜂的幼虫阶段。极其坚韧的内孢子是这种生物体唯一的感染性形式。孢子仅对幼虫有感染性；成年蜜蜂在摄入幼虫类芽孢杆菌孢子后不会被感染。在早期幼虫阶段，即卵孵化后12小时至36小时，幼虫最易受感染。在该时间窗内，如果孢子在感染后进入营养生长阶段，经由受污染的幼虫食物口服摄入约十个孢子或更少的剂量就足以成功引发致命感染。

9、许多细菌物种能够在浮游生长和生物膜形成之间切换。生物膜最广泛的定义是，其代表协同作用的微生物形成细胞簇，所述细胞簇保持在一起，并被由生物膜成员分泌的细胞外基质保护免受不利的外部影响。该基质是细菌生物膜的特性，并且由胞外多糖、分泌蛋白、淀粉样纤维和有时核酸组成。生物膜具有巨大的相关性，因为其不仅保护细菌免受宿主免疫系统的侵害，而且使其难以抵抗抗微生物治疗。细菌产生的细胞外基质是生物膜的标志和先决条件，并且编码胞外多糖生物合成蛋白的基因已经在幼虫类芽孢杆菌的基因组中得到注释(eric i:genbank etk30098.1；eric ii:genbank ahd06625.1)。此外，在幼虫尸体完全降解后残留的细菌团的粘糊糊的稠度表明至少在其生命周期结束时由幼虫类芽孢杆菌形成生物膜。

10、具体地，当新发芽的幼虫类芽孢杆菌细胞在一龄或二龄幼虫中增殖时，发生美洲幼虫病。一旦发芽，幼虫类芽孢杆菌细胞能够在进入的幼虫食物和幼虫血淋巴中增殖。此外，幼虫类芽孢杆菌产生毒素和细胞溶解素，类似于有助于杀死宿主的其他病原菌。afb疾病发展的重要步骤是幼虫类芽孢杆菌细胞破坏中肠。蛋白酶、胶原酶、几丁质酶和毒素被认为允许幼虫类芽孢杆菌经由降解结缔组织来破坏中肠。极端菌血症导致幼虫在幼虫类芽孢杆菌孢子感染若干天后死亡。在蜜蜂幼虫中的营养耗尽后，幼虫类芽孢杆菌细胞形成孢子，形成数十亿孢子，所述孢子分布在菌落中，使疾病得以继续。

11、欧洲幼虫腐臭病(缩写为efb)是细菌性疾病，在封端阶段之前影响蜜蜂幼虫。欧洲幼虫病的特征在于死亡和濒死的幼虫，其看起来似乎向上卷曲，呈褐色或黄色，融化，和/或变干，并且呈橡胶状。蜜蜂幼虫摄入致病细菌(蜂房蜜蜂球菌(melissococcus plutonius))后，所述细菌在幼虫体内争夺食物。如果细菌超过了幼虫，则幼虫将在细胞被封端之前死亡。受污染的雏巢和设备每年都可以复发efb。导致efb的细菌不会产生孢子，但是被细菌污染的雏巢仍可以在随后的几年里再感染蜜蜂。

技术实现思路

1、根据本发明的一个方面，提供了一种制备抗微生物组合物的方法，其包括研磨一定量的来自啤酒花植物的啤酒花球果，将所研磨的啤酒花球果悬浮在水中，将悬浮液煮沸至少约15分钟、20分钟或30分钟，以及回收上清液。

2、根据本发明的一个方面，提供了一种制备抗幼虫类芽孢杆菌和/或抗蜂房蜜蜂球菌和/或抗瓦螨组合物的方法，其包括从啤酒花植物中研磨一定量的啤酒花球果，将所研磨的啤酒花球果悬浮在水中，将悬浮液煮沸至少约15分钟、20分钟或30分钟，以及回收上清液。

3、根据本发明的一个方面，提供了一种用于治疗、预防或减轻蜂巢的美洲幼虫腐臭病或欧洲幼虫腐臭病、蜂房蜜蜂球菌感染、幼虫类芽孢杆菌感染和/或瓦螨感染的方法，其包括：研磨一定量的来自啤酒花植物的啤酒花球果，将所研磨的啤酒花球果悬浮在水中，将悬浮液煮沸至少约15分钟、20分钟或30分钟，以及回收上清液，从而提供啤酒花水提取物或开水啤酒花提取物，将所述啤酒花水提取物或所述开水啤酒花提取物施加至蜜蜂蜂巢。

4、根据本发明的另一方面，提供了一种用于治疗、预防或减轻蜂巢的幼虫类芽孢杆菌感染和/或瓦螨感染的严重性的方法，其包括：研磨一定量的来自啤酒花植物的啤酒花球果，将所研磨的啤酒花球果悬浮在水中，将悬浮液煮沸至少约15分钟、20分钟或30分钟，以及回收上清液，从而提供啤酒花水提取物或开水啤酒花提取物，将所述啤酒花水提取物或所述开水啤酒花提取物施加至蜜蜂蜂巢。

5、根据本发明的另一方面，提供了一种用作抗微生物的水性啤酒花提取物，其包含有效量的由以下组成的组中的一种或多种、两种或更多种、三种或更多种或四种或更多种：葎草烯、石竹烯、月桂烯、法呢烯、芳樟醇、橙花叔醇和柠檬烯，和/或有效量的由以下组成的组中的一种或多种、两种或更多种或三种：异类葎草酮、异葎草酮和异近葎草酮。