一种抗KL-6抗体混合胶乳颗粒、KL-6检测试剂盒及其制备方法

本发明属于免疫学测定领域，尤其涉及一种抗kl-6抗体混合胶乳颗粒、kl-6检测试剂盒及其制备方法。

背景技术：

1、涎液化糖链抗原(krebs von den lungen-6，kl-6)可作为诊断和监测covid-19阳性患者的血清学生物标志物。kl-6是一种高分子量粘液糖蛋白，分子量约5000kda，是黏蛋白-1(muc1)n端结构域上的唾液酸化碳水化合物抗原之一，位于细胞表面，因蛋白酶溶解其胞外区域而释放入血，以可溶性形式存在血液中，抗kl-6单克隆抗体可以识别特定的muc1糖肽序列。

2、免疫微球纯化是胶乳增强免疫比浊法试剂盒制备的关键步骤，目前的纯化工艺需要反复高速离心、清洗、超声等操作步骤，操作时间长，而且单克隆抗体等原材料消耗大等缺陷。胶乳增强免疫比浊测定方法容易受非特异性反应的干扰导致测定结果偏高。不同试剂系统抑制非特异性反应程度不同，可导致测定结果有较大差异。另外，不同试剂系统的抗原抗体结合位点有所不同，反应度亦不同。故不同试剂的测定结果偏倚可能较大，直接导致试剂测定结果可比性较差。因此，如何提供准确度、精密度更高，抗干扰能力更强，可适用于大批量标本检测分析的抗kl-6抗体混合胶乳颗粒及其对应试剂盒是本领域的关键。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗kl-6抗体混合胶乳颗粒的制备方法，工艺简单，成本较低。

2、本发明的目的还在于提供一种kl-6检测试剂盒，具备较高的准确度和精密度，较强的抗干扰能力，可做大批量标本检测分析。

3、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

4、本发明提供了一种抗kl-6抗体混合胶乳颗粒的制备方法，包括以下步骤：

5、(1)将胶乳微球溶液与含0.05mol/lol/l 4-吗啉乙磺酸的清洗缓冲溶液混合，离心，再加入含10％对苯二甲酸二甲酯的活化缓冲溶液，活化羧基微球；所述胶乳微球溶液固含量为10％，胶乳微球的粒径为240nm；

6、(2)活化后的羧基微球溶液中加入终浓度为150mg/l的抗体溶液，交联形成抗体-羧基微球复合物溶液；所述抗体为鼠抗人涎液化糖链抗原抗体；

7、(3)抗体-羧基微球复合物溶液依次进行封闭处理和熟化处理，熟化后加入终浓度为10mmol/l的磷酸氢二钠，搅拌；

8、(4)离心去上清，加入保存缓冲液。

9、优选的，所述步骤(1)中，胶乳微球溶液、含0.05mol/l 4-吗啉乙磺酸的清洗缓冲溶液、含10％对苯二甲酸二甲酯的活化缓冲溶液的体积比为1:6:6。

10、优选的，所述步骤(1)中，活化时间为0.5h。

11、优选的，所述步骤(1)和步骤(4)中，离心条件为20000r/min，30mi n。

12、优选的，所述步骤(2)中，交联时间为3h。

13、优选的，所述步骤(3)中，封闭处理方法为：抗体-羧基微球复合物溶液中加入1％的牛血清白蛋白，封闭2h；熟化处理方法为：封闭处理后的抗体-羧基微球复合物溶液于26℃放置18h。

14、优选的，所述步骤(3)中，搅拌条件为37℃、170r/min，3h。

15、本发明还提供了上述制备方法制备得到的抗kl-6抗体混合胶乳颗粒。

16、本发明还提供了一种kl-6检测试剂盒，包括样本预处理试剂和胶乳试剂，所述胶乳试剂包括上述抗kl-6抗体混合胶乳颗粒。

17、优选的，所述样本预处理试剂为：含有甘氨酸2g/l、氯化钠0.1mol/l、聚乙二醇800015g/l、bsa 2g/l、proclin 3000.5ml/l的tris缓冲液；所述胶乳试剂为：含有甘氨酸2g/l、氯化钠0.1mol/l、聚乙二醇600015g/l、bsa 2g/l、proclin 3000.5ml/l、triton x-100triton x-1000.5ml/l、抗kl-6抗体混合胶乳颗粒10g/l的tris缓冲液。

18、现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

19、本发明采用一步法创新生产工艺，研制得到抗kl-6抗体混合胶乳颗粒的制备方法，与目前常规的胶乳增强免疫比浊法试剂生产工艺相比，不需要复杂过滤、反复高速离心、清洗、超声等繁琐的操作步骤，节省人力物力，同等条件下，生产能力提高5倍以上，同时可以节省主要原材料(单克隆抗体)的用量。

20、本发明提供该混合胶乳颗粒制备得到的胶乳增强免疫比浊法kl-6检测试剂盒，对患者血清kl-6的检测操作更加简便、快速，并具备更高的准确度和精密度，更强的抗干扰能力，同时不仅适合单个标本检测，还可做大批量标本检测分析，具有较高的创新性和应用推广价值。

技术特征：

1.一种抗kl-6抗体混合胶乳颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，胶乳微球溶液、含0.05mol/l 4-吗啉乙磺酸的清洗缓冲溶液、含10％对苯二甲酸二甲酯的活化缓冲溶液的体积比为1:6:6。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，活化时间为0.5h。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(4)中，离心条件为20000r/min，30min。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，交联时间为3h。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，封闭处理方法为：抗体-羧基微球复合物溶液中加入1％的牛血清白蛋白，封闭2h；熟化处理方法为：封闭处理后的抗体-羧基微球复合物溶液于26℃放置18h。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，搅拌条件为37℃、170r/min，3h。

8.权利要求1～7任意一项所述的制备方法制备得到的抗kl-6抗体混合胶乳颗粒。

9.一种kl-6检测试剂盒，其特征在于，包括样本预处理试剂和胶乳试剂，所述胶乳试剂包括权利要求8所述的抗kl-6抗体混合胶乳颗粒。

10.根据权利要求9所述的检测试剂盒，其特征在于，所述样本预处理试剂为：含有甘氨酸2g/l、氯化钠0.1mol/l、聚乙二醇800015g/l、bsa 2g/l、proclin3000.5ml/l的tris缓冲液；所述胶乳试剂为：含有甘氨酸2g/l、氯化钠0.1mol/l、聚乙二醇600015g/l、bsa2g/l、proclin3000.5ml/l、tritonx-1000.5ml/l、抗kl-6抗体混合胶乳颗粒10g/l的tris缓冲液。

技术总结本发明提供了一种抗KL‑6抗体混合胶乳颗粒、KL‑6检测试剂盒及其制备方法，属于免疫学测定领域。本发明提供的抗KL‑6抗体混合胶乳颗粒的制备方法，工艺简单，成本较低，制备得到的抗KL‑6抗体混合胶乳颗粒可用于KL‑6检测试剂盒的制备，制备得到的KL‑6检测试剂盒具备更高的准确度和精密度，更强的抗干扰能力，可做大批量标本检测分析，具有较高的创新性和应用推广价值。技术研发人员：楼宏强,黄信用,徐礼友,陈浩浩,傅昌悦受保护的技术使用者：金华职业技术学院技术研发日：技术公布日：2024/9/29