一株木霉菌及其在抑制葡萄霜霉病中的用途的制作方法

本发明属于微生物，公开了一株木霉菌及其在抑制葡萄霜霉病中的用途。

背景技术：

1、葡萄作为一种低热量、高营养的浆果，在全球范围内广泛种植，因其丰富的品种和高经济价值而备受青睐。然而，葡萄生产中常面临霜霉病的严重威胁，这是一种危害较重的常见病害，对葡萄的产量和品质造成显著影响。目前，化学防治是控制葡萄霜霉病的主要手段，但该方法带来了一系列次生危害。它不仅增加了生产成本，还导致了环境污染和果实残留毒性问题。这些化学农药的残留可能在食物链中积累，最终危害人类健康。此外，它们还可能降低葡萄及其加工产品，如葡萄酒的质量。因此，研发绿色、环保的防治方法变得尤为重要，以适应当前农业结构性调整的需求，并切实解决农药残留污染等问题。

2、生物防治作为一种低成本、绿色无残留的植物病害防治策略，符合公众对健康生活的追求，并成为未来植物病害防治的重要方向之一。目前，用于防治植物病害的生防菌种类主要包括细菌、真菌和放线菌。其中，木霉属真菌因其广泛存在于土壤及其他基物中，生存能力强，适应性广，且作为一种广谱性拮抗菌真菌，能够减弱植物病原菌的致病性，而备受关注。木霉菌广泛存在于土壤及植物表面，易于从植物病残体、种子和球茎表面分离得到。这些特性为控制真菌病害提供了潜在的生物防治策略。实际上，木霉菌已被广泛应用于植物病害防治，并展现出广阔的发展前景。

技术实现思路

1、为克服上述现有技术问题，本发明提供了一株木霉菌及其在抑制葡萄霜霉病中的用途。相比于现有技术，本发明提供了一种木霉菌，能有效抑制单轴霉属真菌葡萄生单轴霉菌的生长，为防治葡萄生单轴霉引起的植物病害提供微生物资源。

2、一方面，本发明涉及一株木霉菌，保藏信息如下：

3、菌株名称：qhsh-16；

4、分类命名：桔绿木霉 trichoderma citrinoviride；

5、保藏中心收到时间：2024年06月14日；

6、保藏证明发放时间：2024年07月11日；

7、保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc）；

8、保藏编号：cgmcc no.41365；

9、地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

10、进一步地，在本发明提供的木霉菌中，所述木霉菌的its的核苷酸序列如seq idno：1所示。

11、另一方面，本发明涉及一种生防菌剂，所述生防菌剂包括所述木霉菌和/或其培养物的上清液、发酵产物、滤液或提取物。

12、本文提供的木霉菌qhsh-16或其任何活性变体中任何一种的孢子或前孢子或者菌丝、前孢子和/或孢子的组合可以配制成菌丝糊剂、可润湿的粉末、菌丝团块、粉尘、颗粒、浆液、干燥粉末、水性或油性基液体产物等。此类配制物将包含本文提供的木霉菌qhsh-16或其活性变体和/或由其衍生的组合物，还有载体和其他试剂。配制物可以用于本文其他处公开的多种方法中。

13、本文公开的多种组合物和配制物可以包含木霉菌qhsh-16或者其活性变体的一定量的菌丝，或者孢子或前孢子或者菌丝、前孢子和/或孢子的组合；和/或可以包含衍生自木霉菌qhsh-16或其任何活性变体中的任何一种的一定量的组合物。这样的量可以包括至少大约104cfu/ml至大约1011cfu/ml、至少大约105cfu/ml至大约1011cfu/ml、大约105cfu/ml至大约1010cfu/ml、大约105cfu/ml至大约1012cfu/ml、大约105cfu/ml至大约106cfu/ml、大约106cfu/ml至大约107cfu/ml、大约107cfu/ml至大约108cfu/ml、大约108cfu/ml至大约109cfu/ml、大约109cfu/ml至大约1010cfu/ml、大约1010cfu/ml至大约1011cfu/ml或大约1011cfu/ml至大约1012cfu/ml的菌株浓度。在其他实施方案中，菌株浓度包括至少大约104cfu/ml、至少大约105cfu/ml、至少大约106cfu/ml、至少大约107cfu/ml、至少大约108cfu/ml、至少大约109cfu/ml、至少大约1010cfu/ml、至少大约1011cfu/ml、至少大约1012cfu/ml。菌株在上述浓度可以在任何目的配制物类型中形成，包括例如在液体配制物、可润湿的粉末、喷洒的干燥配制物、菌丝糊剂、可润湿的颗粒或冷冻干燥的配制物中。

14、如本文所用，“上清液”是指当木霉菌qhsh-16在液体培养基中生长或从固体培养基中收获到另一种液体中并通过离心、过滤、沉降或本领域公知的其他手段除去时，残留的液体。在一些实施方案中，上清液可以用另一种物质稀释，例如水、缓冲剂、新鲜培养基和/或制剂。稀释的上清液仍被认为是本发明的上清液。

15、如本文所用，“滤液”是指来自木霉菌qhsh-16经过液体培养基的发酵培养物通过膜的液体。与发酵培养物或上清液中有效化合物或代谢产物的浓度相比，滤液可包含浓缩量的有效化合物或代谢产物。

16、如本文所用，“提取物”是指通过溶剂（例如水、去污剂、缓冲剂和/或有机溶剂）从木霉菌qhsh-16发酵培养物中取出并通过离心、过滤或本领域已知的其他方法与木霉菌qhsh-16分离的液体物质。与提取前木霉菌qhsh-16发酵培养物中有效化合物或代谢物的浓度相比，提取物可包含浓缩量的所述有效化合物或代谢物。可替代地，滤液或提取物然后可以用另一种组合物稀释，例如水、缓冲剂、新鲜培养基和/或制剂。这种稀释的滤液或提取物仍被认为是本发明的滤液和提取物。

17、如本文所用，“代谢物”或“代谢产物”是指木霉菌qhsh-16经过发酵产生的化合物、物质或副产物。有效化合物或代谢物是存在于上清液、包含木霉菌qhsh-16的发酵培养物或木霉菌qhsh-16中的化合物，当将其以有效量应用于目标植物或目标植物所处的空间时，可以改善植物的任何目标农艺性状，或控制引起植物真菌性病害或植物细菌性病害的致病菌。

18、另一方面，本发明涉及所述木霉菌或所述生防菌剂在植物真菌性病害防治中的应用。

19、进一步地，在本发明提供的应用中，所述植物真菌性病害为葡萄霜霉病。

20、进一步地，在本发明提供的应用中，所述植物真菌性病害的寄主植物为葡萄。

21、进一步地，在本发明提供的应用中，所述植物真菌性病害的致病菌为葡萄生单轴霉菌。

22、另一方面，本发明涉及一种用于防治植物真菌性病害的方法，其包括：使得所述木霉菌或所述生防菌剂作用于所述植物真菌性病害的致病菌和/或它们的栖息地。

23、进一步地，在本发明提供的方法中，向具有植物真菌性病害的致病菌，或者处于发展植物真菌性病害风险的植物施用所述木霉菌或所述生防菌剂。

24、进一步地，在本发明提供的方法中，所述木霉菌或所述生防菌剂用于葡萄霜霉病的防治。

25、进一步地，在本发明提供的方法中，所述木霉菌或所述生防菌剂破坏葡萄生单轴霉菌孢子内部结构、抑制葡萄生单轴霉菌孢子生长繁殖、抑制葡萄生单轴霉菌生长繁殖中的至少一项。

26、与现有技术相比，本发明提供的技术方案至少具备下述的有益效果或优点。

27、本发明通过深入研究和实验验证，成功揭示了木霉菌qhsh-16在植物病害防治领域的显著效果，特别是在抑制葡萄生单轴霉菌及葡萄霜霉病方面展现出了卓越的性能。具体而言，针对葡萄生单轴霉菌的离体防效测定实验表明，木霉菌qhsh-16的无菌发酵液能够有效降低该病原菌的发病率，其防治效果高达39.6%，显著抑制了葡萄生单轴霉菌的生长和扩散。进一步地，使用木霉菌qhsh-16的发酵原液进行田间防效实验，结果显示其对葡萄霜霉病的防治效果尤为突出，田间防效达到了62.39%，充分证明了该菌株在实际应用中的高效性和稳定性。值得注意的是，本发明还发现了木霉菌qhsh-16的无菌发酵液对葡萄生单轴霉菌具有更高的防治效果，达到了73.27%，这一发现为该菌株在植物病害生物防治领域的应用提供了更为广阔的前景。本发明提供的木霉菌qhsh-16不仅在抑制葡萄生单轴霉菌和葡萄霜霉病方面表现出色，而且为防治由葡萄生单轴霉菌引起的植物病害提供了新的微生物资源，具有显著的技术效果和广泛的应用潜力。