一种黄瓜感蚜调控基因CsAGO5a及其应用

本发明属于植物基因工程，具体涉及到一种黄瓜感蚜调控基因csago5a及其应用。

背景技术：

1、黄瓜(cucumis sativus l.)，是一种葫芦科甜瓜属一年生草本作物，是我国主要栽培的蔬菜作物之一，在饮食、药用等方面发挥重要作用。

2、蚜虫以多种方式危害黄瓜植株，包括吸食植株汁液、分泌蜜露、传播病毒和导致叶片损伤。受蚜虫侵害的植物通常会表现出叶片黄化、卷曲、生长受限、产量显著减少，以及可能的提前枯萎和死亡。在园艺业中，防治蚜虫最常用的方法是使用农药。然而，农药的使用大幅不仅增加了生产成本还存在许多潜在危害，长时间使用农药容易培养蚜虫对农药的抗性并造成环境污染土壤退化。此外，它还可能对蚜虫的天敌和捕食者以及传粉昆虫造成危害。因此，培育高质量的抗蚜虫品种至关重要，因为这为减轻蚜虫对农作物造成的威胁和损害提供了根本性的解决方案。

3、agos是生物体中普遍存在的一类比较保守的蛋白,并且在不同物种的rna沉默及相关的途径中具有十分重要的功能,也调控模式植物拟南芥的生长发育过程。rna沉默是生物抵御外来核酸的基本抗性机制，ago、dcl和rdr是该机制的构成成分，agos参与小rna(srna)结合，在rna干扰(rnai)通路中充当rna诱导的沉默复合物的组成部分，在转录和转录后水平上调节基因表达，从而在各种生物过程中安装各种微调功能。研究表明，csago5a对冷、热胁迫处理以及有反应，并在植株茎和花中高表达。西瓜中的ago5通过在病毒感染期间上调，与病毒衍生的sirna相互作用，再转录后促进病毒rna降解，从而在抗黄瓜绿斑驳花叶病毒中发挥作用。目前，黄瓜中ago5的rna沉默途径与蚜虫胁迫的关系还未被鉴定和揭示。

技术实现思路

1、本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

2、鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。

3、因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种培育转基因植物的方法。

4、为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：包含沉默目的植物的基因csago5a以获得转基因植物，从而调控所述转基因植物的抗蚜性和/或在黄瓜叶片上的适应性。

5、所述csago5a基因的核苷酸序列为seq id no.1所示；氨基酸序列如seq id no.2所示。

6、包含所述转基因植物的种子。

7、所述转基因植物为黄瓜。

8、本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种重组载体。

9、本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种宿主细胞。

10、本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种调控黄瓜抗蚜性的方法。

11、为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：所述所述的重组载体转入至农杆菌后，注射黄瓜苗子叶进行沉默csago5a基因。

12、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：所述转入载体为pv190，使用bamh i将pv190酶切进行线性化处理再进行重组，得到重组载体。

13、作为本发明所述方法的一种优选方案，其中：向受体植物中导入表达csago5a蛋白的核酸分子是通过向所述受体植物中导入含有能够表达csago5a蛋白的核酸分子的重组表达载体实现的。

14、所述重组载体的核苷酸序列如seq id no.3所示。

15、本发明有益效果：

16、本发明以黄瓜主栽品种“superina”为材料，通过race技术克隆了csago5a基因，同时通过酶切、基于agos与植物抗胁迫有关作用重组反应，农杆菌转化法，对黄瓜叶片进行注射，并进行蚜虫生物量统计、非选择性定居实验，证明其为感蚜性的调控因子，本发明对于提供增强植物抗性、改良抗蚜性筛选的方法和创制种质资源等黄瓜育种领域有重要应用价值。

技术特征：

1.一种培育转基因植物的方法，其特征在于：包含沉默目的植物的基因csago5a以获得转基因植物，从而调控所述转基因植物的抗蚜性和/或在黄瓜叶片上的适应性。

2.如权利要求1所述的培育转基因植物的方法，其特征在于：所述csago5a基因的核苷酸序列为seq id no.1所示；氨基酸序列如seq id no.2所示。

3.如权利要求1所述的培育转基因植物的方法，其特征在于：包含所述转基因植物的种子。

4.如权利要求3所述的培育转基因植物的方法，其特征在于：所述转基因植物为黄瓜。

5.一种重组载体，其特征在于：包含如权利要求2所述的基因。

6.一种宿主细胞，其特征在于：包含如权利要求5所述的重组载体。

7.一种调控黄瓜抗蚜性的方法，其特征在于：所述将如权利要求5所述的重组载体转入至农杆菌后，注射黄瓜苗子叶进行沉默csago5a基因。

8.如权利要求7所述的调控黄瓜抗蚜性的方法，其特征在于：所述转入载体为pv190，使用bamhi将pv190酶切进行线性化处理再进行重组，得到重组载体。

9.如权利要求8所述的调控黄瓜抗蚜性的方法，其特征在于：所述方法为向受体植物中导入表达csago5a蛋白的核酸分子是通过向所述受体植物中导入含有能够表达csago5a蛋白的核酸分子的重组表达载体实现的。

10.如权利要求8所述的调控黄瓜抗蚜性的方法，其特征在于：所述重组载体的核苷酸序列如seq id no.3所示。

技术总结本发明公开了一种黄瓜感蚜调控基因CsAGO5a及其应用，包括，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。黄瓜感蚜调控基因CsAGO5a的表达蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。含有所述的黄瓜感蚜调控基因CsAGO5a的植物病毒载体pV190。所述载体沉默CsAGO5a基因，在植株中低表达。所述转入载体为pV190，使用BamH I将pV190酶切进行线性化处理再进行重组，得到重组载体。本发明以黄瓜主栽品种“Superina”为材料，通过VIGS技术沉默了CsAGO5a基因，并进行非选择性定居实验等，证明其与植株抗蚜相关，在增强植物抗性、改良抗蚜性筛选方法和创制种质资源等黄瓜育种领域有重要应用价值。技术研发人员：李紫怡,杨晓东,张丽丽,邱磊,岳昊宇,骆红群,陆毅君,陈学好受保护的技术使用者：扬州大学技术研发日：技术公布日：2024/11/4