一种电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型及其应用

本发明涉及动物模型，具体是一种电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型及其应用 。

背景技术：

1、近年人们越来越关注辐射的影响，辐射损伤与防护的相关基础研究也日益受到关注；海洋环境中电离辐射（ir）对水生态系统的危害性和潜在的健康风险一直备受重视，但ir对水生物的发育毒性仍缺乏有利的研究数据支撑，暂无有效的评价生物标志物，给ir诱导的发育危害机制的研究和相关防护药品的研发带来了困难，因此本申请人尝试构建一种ir诱导胚胎损伤的动物模型，使其能够为ir发育危害及科学干预的研究提供模型支持。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型及其应用，本发明所采取的技术方案如下：

2、第一方面，提供一种电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型，其构建步骤包括：

3、s1. 将性成熟的雌、雄斑马按照1:1的比例配对放入孵化器，自发进行交配，得到所需胚胎；

4、s2.斑马鱼胚胎置于胚胎培养液中，对受精后5小时的斑马鱼胚胎采用生物辐照仪器进行辐照，并设置不同辐照剂量的辐照组；

5、s3.将辐照处理的胚胎放置于光照培养中继续培养，定时更换新鲜的培养液，并持续观察对胚胎发育情况的影响。

6、进一步的，所述胚胎发育情况包括胚胎发育指标，所述胚胎发育指标包括孵化率、畸形率、胚胎心率、主要畸形表型。

7、进一步的，所述主要畸形表型包括心包水肿、卵黄未吸收、游囊不长、脊柱弯曲和尾部弯曲、头部畸形和眼发育异常。

8、进一步的，所述胚胎发育情况还包括幼鱼神经行为，幼鱼神经行为包括光暗刺激下的运动行为、镜面攻击、社会交往和集群行为。

9、进一步的，所述胚胎发育情况还包括斑马鱼胚胎的细胞凋亡情况，斑马鱼胚胎的细胞凋亡情况观测方法为：在斑马鱼胚胎各发育期使用针灸针对胚胎绒毛膜进行脱膜处理，随后使用胚胎培养液将吖啶橙（ao）母液稀释成工作液，将已脱膜或孵化后的斑马鱼胚胎于ao工作液中染色处理，置于37℃恒温箱中避光孵育1h，然后用胚胎培养液清洗，利用ms-222将胚胎麻醉，于倒置荧光显微镜下观察拍照记录，统计斑马鱼身体上的凋亡细胞数量。

10、第二方面，提供上述的ir诱导胚胎损伤的动物模型的应用，包括：

11、采用上述的动物模型评价抗坏血酸（vc）对斑马鱼ir损伤的干预作用；

12、采用所述动物模型评价芍药苷、阿魏酸、盐酸川芎嗪和β-谷甾醇对斑马鱼ir损伤引起的胚胎心率下降的恢复作用；

13、采用所述动物模型评价阿魏酸、盐酸川芎嗪和β-谷甾醇对斑马鱼ir损伤引起的胚胎发育毒性、神经毒性、细胞凋亡和免疫应激反应的恢复作用；

14、以及采用所述动物模型筛选或制备缓解或修复ir诱导的胚胎损伤的其它药物。

15、作为优选，采用ao活体染色所述动物模型的凋亡细胞，用于ir损伤后的修复干预研究。

16、本发明的有益效果如下：本发明发现在斑马鱼胚胎期单次ir处理可导致斑马鱼剂量依赖的胚胎发育毒性并诱发异常的神经行为发生；并且发现ao活体染色凋亡细胞可以捕获ir后机体的损伤和修复过程，是一个敏感的ir生物学检测指标，且可以灵敏的用于ir损伤后修复干预研究中；此外，发明人应用本动物模型，发现多种中药单体成分可以挽救ir引起的胚胎损伤；这一模型可以为ir发育危害及科学干预的研究提供模型支持。

技术特征：

1.一种电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型，其特征在于，其构建步骤包括：

2.根据权利要求1所述的一种电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型，其特征在于：所述胚胎发育情况包括胚胎发育指标，所述胚胎发育指标包括孵化率、畸形率、胚胎心率、主要畸形表型。

3.根据权利要求2所述的一种电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型，其特征在于：所述主要畸形表型包括心包水肿、卵黄未吸收、游囊不长、脊柱弯曲和尾部弯曲、头部畸形和眼发育异常。

4.根据权利要求1所述的一种电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型，其特征在于：所述胚胎发育情况还包括幼鱼神经行为，幼鱼神经行为包括光暗刺激下的运动行为、镜面攻击、社会交往和集群行为。

5.根据权利要求1所述的一种电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型，其特征在于：所述胚胎发育情况还包括斑马鱼胚胎的细胞凋亡情况，斑马鱼胚胎的细胞凋亡情况观测方法为：

6.如权利要求1-5任一项所述的电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型的应用，其特征在于：采用所述动物模型评价抗坏血酸对斑马鱼电离辐射损伤的干预作用。

7.如权利要求1-5任一项所述的电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型的应用，其特征在于：采用所述动物模型评价芍药苷、阿魏酸、盐酸川芎嗪和β-谷甾醇对斑马鱼电离辐射损伤引起的胚胎心率下降的恢复作用。

8.如权利要求1-5任一项所述的电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型的应用，其特征在于：采用所述动物模型评价阿魏酸、盐酸川芎嗪和β-谷甾醇对斑马鱼电离辐射损伤引起的胚胎发育毒性、神经毒性、细胞凋亡和免疫应激反应的恢复作用。

9.如权利要求1-5任一项所述的电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型的应用，其特征在于：采用所述动物模型筛选或制备缓解或修复电离辐射诱导的胚胎损伤的药物。

10.如权利要求1-5任一项所述的电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型的应用，其特征在于：采用吖啶橙活体染色所述动物模型的凋亡细胞，用于电离辐射损伤后的修复干预研究。

技术总结本发明提供一种电离辐射诱导胚胎损伤的动物模型及其应用，本发明发现在斑马鱼胚胎期单次电离辐射（IR）处理可导致斑马鱼剂量依赖的胚胎发育毒性并诱发异常的神经行为发生，并据此构建了电离辐射诱导胚胎损伤的斑马鱼模型；并且发现吖啶橙（AO）活体染色凋亡细胞可以捕获IR后机体的损伤和修复过程，是一个敏感的IR生物学检测指标，且可以灵敏的用于IR损伤后修复干预研究中；此外，发明人应用本动物模型，发现多种中药单体成分可以挽救IR引起的胚胎损伤；这一模型可以为IR发育危害及科学干预的研究提供模型支持。技术研发人员：陈将飞,刘晓冬,潘栋梁,杨天鹏,马淑梅,任锐,张雅楠,祝扬帆受保护的技术使用者：温州医科大学技术研发日：技术公布日：2024/11/4