一种在培养基中抑制沙门氏菌持留菌复苏的方法

本发明涉及微生物学领域，具体涉及一种在培养基中抑制沙门氏菌持留菌复苏的方法。

背景技术：

1、沙门氏菌，作为一种广泛分布的革兰氏阴性食源性致病菌，其对食品安全和公共卫生构成了严峻的挑战。这种细菌能够通过污染肉类、蛋类和乳制品等食品，传播给人类，引起一系列严重的疾病，包括伤寒、急性肠胃炎和败血症。特别地，当沙门氏菌侵入血液组织时，其引发地系统性炎症可能导致致命后果。

2、持留菌时细菌群体中的一种特殊存在，它们处于不生长或生长缓慢的静止期状态。这种状态下的细菌即使在面对致死剂量的抗生素或其他外界压力时，仍能够进入一种休眠状态来存活。当这些压力消失后，持留菌能够迅速复苏并恢复其生长能力，从而重新成为环境中的潜在威胁。沙门氏菌持留菌在食品加工、运输和储藏过程中，能够在不利的环境中存活下来，一旦环境条件改善，他们能够复苏成具有完全致病能力的沙门氏菌。因此，开发一种抑制沙门氏菌持留菌复苏的方法具有重要意义。

技术实现思路

1、发明目的：本发明的目的是提供一种在培养基中抑制沙门氏菌持留菌复苏的方法。

2、为了实现本发明目的，本发明公开了一种抑制沙门氏菌持留菌复苏的方法，所述方法为：将外排抑制剂paβn溶液加入到沙门氏菌持留菌的环境中，抑制沙门氏菌持留菌的复苏。

3、前述方法具体技术方案包括以下步骤：

4、(1)向低水分活度lb肉汤培养基中加入沙门氏菌菌液，培养；

5、(2)向步骤(1)培养的沙门氏菌菌液中加入环丙沙星母液，培养；

6、(3)将步骤(2)培养所得的菌液离心，所得沉淀物即为含有持留菌的物质，沉淀物中的活菌即为持留菌；

7、(4)向lb肉汤培养基中加入步骤(3)离心得到的沙门氏菌持留菌，培养复苏；

8、(5)向步骤(4)中的沙门氏菌持留菌菌液中添加paβn制备液，培养复苏；

9、(6)在步骤(5)复苏的过程中，从0分钟开始，每隔5分钟用酶标仪测其od600值。

10、步骤(1)中，所述的沙门氏菌菌液的制备方法为将沙门氏菌过夜活化得到活化液，再将沙门氏菌活化液加入到低水分活度lb肉汤培养基中在37℃培养至菌数为108cfu/ml。

11、步骤(1)中，所述的低水分活度lb肉汤培养基的制备方法为调整lb肉汤培养基中nacl的质量分数为2％。

12、步骤(2)中，所述的环丙沙星母液中，环丙沙星的浓度为1000μg/ml以上，优选为1280μg/ml，溶剂为0.7vt％磷酸水溶液。

13、步骤(2)中，控制环丙沙星母液的加入量，使其终浓度为环丙沙星对沙门氏菌最低抑菌浓度的25-100倍，优选为50倍。

14、步骤(3)中，所述的沙门氏菌持留菌的分离方法为将50倍最低抑菌浓度的环丙沙星溶液加入到沙门氏菌菌液中，在37℃下培养4小时，再离心得到沙门氏菌持留菌。

15、步骤(5)中，所述的paβn储备液中，pan的浓度为20mg/ml，溶剂为二甲基亚砜溶液。

16、步骤(5)中，控制paβn储备液的加入量，使其最终浓度为0μg/ml、100μg/ml、200μg/ml。

17、步骤(5)中，沙门氏菌持留菌复苏培养条件温度为37℃。

18、有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优势：

19、本发明以沙门氏菌持留菌为研究对象，通过在培养基中添加外排抑制剂paβn溶液，在适宜温度下进行复苏，显著抑制了沙门氏菌持留菌的复苏。

技术特征：

1.一种在培养基中抑制沙门氏菌持留菌复苏的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的低水分活度lb肉汤的制备方法为调整lb肉汤培养基中nacl的质量分数为2％。

3.如权利1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的沙门氏菌菌液的制备方法为将沙门氏菌过夜活化得到活化液，再将活化液加入到低水分活度lb肉汤培养基中培养至菌数为108cfu/ml。

4.如权利1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的环丙沙星母液中，环丙沙星的浓度为1280μg/ml以上，溶剂为0.7vt％磷酸水溶液。

5.如权利1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，控制环丙沙星母液的加入量，使其最终浓度为环丙沙星最低抑菌浓度的50倍。

6.如权利1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的外排抑制剂为paβn。

7.如权利1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的外排抑制剂制备液中，paβn的浓度为20mg/ml，溶剂为二甲基亚砜。

8.如权利1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，控制外排抑制剂制备液的加入量，使其最终浓度为0μg/mi、100μg/ml、200μg/ml。

9.如权利1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中沙门氏菌持留菌的复苏温度为37℃。

技术总结本发明涉及微生物学领域，具体公开了一种在培养基中抑制沙门氏菌持留菌复苏的方法，包括如下步骤：(1)将沙门氏菌接种在低水分活度肉汤培养基中培养，得到菌液；(2)将步骤(1)培养所得的沙门氏菌菌液与环丙沙星母液混合，培养，离心，所得沉淀物为沙门氏菌持留菌；(3)将步骤(2)培养得到的沙门氏菌持留菌菌液中加入外排抑制剂。该方法能够显著抑制沙门氏菌持留菌的复苏。随着外排抑制剂浓度的增长，细胞数量的增长速度呈现出逐渐减缓的趋势。进一步分析表明，随着外排抑制剂浓度的升高，细胞开始增长的时间明显推迟，这意味着随着外排抑制剂浓度的增加，持留菌复苏的速度逐渐减缓。技术研发人员：崔晓文,俞皖,杨天羽,王刘玺,王煜,李雪娜受保护的技术使用者：南京工业大学技术研发日：技术公布日：2024/11/14