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调控C4BPM表达的试剂盒在制备抗禽流感病毒制剂中的应用

  • 国知局
  • 2024-12-06 12:28:23

本发明涉及基因工程,具体地,涉及调控c4bpm表达的试剂盒在制备抗禽流感病毒制剂中的应用。

背景技术:

1、c4bpm(complement 4binding protein,membrane)是位于鸡26号染色体的一段基因,又称为crem,cremp。是由n inoue,a fukui等人发现并克隆的一种编码新型跨膜scr蛋白的cdna。鸡c4bpm首先在鸡cdna文库中被鉴定为一个片段,其中包含与迄今为止的所有物种的cd46共享的共识序列。从进化的角度来看,首先确定了鸡的c4bpm为补体调节系统,这是一种非哺乳动物膜锚定的补体调节蛋白,类似于cd46和daf。而daf和cd46的作用是保护宿主细胞免受自身补体介导的攻击。c4bpm同时也被证明可以选择性的作用于鸡补体系统,通过抑制鸡的经典和替代途径来保护宿主细胞免遭同源补体的攻击。此外,c4bpm可能是一种多功能蛋白,因为迄今为止发现的几乎所有人的scr蛋白都可作为病毒和/或细菌受体以及补体调节分子发挥作用。

2、禽流感(avian influenza)是由正粘病毒科a型流感病毒(avian influenzavirus,aiv)引起的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多种症状的传染病。通常多发于鸡、鸟类、鸭子和鹅等禽类,给我国乃至世界养禽业造成重大的经济损失。某些禽流感病毒也可跨越物种界限传播,并导致人类和其他哺乳动物患病或亚临床感染。禽流感在临床上变现为:急性败血型、急性呼吸道型和非典型3种类型。主要特征为:发热、咳嗽、下痢、产蛋量下降,严重可导致全身败血,及一些呼吸道特征。目前由于多种高度多样化的禽流感病毒存在,且在全世界的禽类及哺乳动物中广泛传播,禽流感仍然无法得到有效控制,寻找对禽流感病毒增殖具有重要影响的宿主因子并工具化,无疑是禽流感病毒抗原生产和致病机制研究的有效途径。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了克服现有技术的不足,提供调控c4bpm表达的试剂盒在制备抗禽流感病毒制剂中的应用。

2、为了实现上述目的,本发明是通过以下方案予以实现的:

3、调控c4bpm表达的试剂盒在制备抗禽流感病毒制剂中的应用,是基于本发明发现c4bpm过表达有利于禽流感病毒增殖,敲除c4bpm,抑制c4bpm表达,则抑制禽流感病毒增殖。

4、所述的调控c4bpm表达的试剂盒包括促进c4bpm表达的试剂和抑制c4bpm表达的试剂中的至少一种。

5、所述的促进c4bpm表达的试剂包括含有c4bpm编码基因的重组表达载体;优选地,还包括转染试剂。

6、所述的c4bpm编码基因的核苷酸序列优选如seq id no.1所示。

7、所述的重组表达载体的框架优选为慢病毒载体;更优选为pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp-t2a-puro。

8、所述的促进c4bpm表达的试剂有利于促进禽流感病毒的增殖,从而有利于禽流感疫苗的制备。因此,所述的调控c4bpm表达的试剂盒为促进c4bpm表达的试剂时,可用于制备禽流感疫苗,从而,所述的抗禽流感病毒制剂为禽流感疫苗。

9、所述的抑制c4bpm表达的试剂包括突变失活c4bpm基因的试剂,或抑制c4bpm基因转录或翻译的试剂。

10、所述的突失活变c4bpm基因的方式优选为同源重组或基因编辑。

11、所述的突失活变c4bpm基因优选为敲除c4bpm。

12、所述的抑制c4bpm表达的试剂包括基因编辑载体和sgrna,其中的sgrna的核心序列如seq id no.2所示;更优选包括含有序列如seq id no.3所示的sgrna-c4bpm的基因编辑重组载体。

13、所述的基因编辑载体优选为lenticrisprv2载体。

14、所述的基因编辑重组载体的载体框架优选为lenticrisprv2载体。

15、所述的抑制c4bpm表达的试剂有利于抑制禽流感病毒的增殖,因此可用于制备抗禽流感病毒药物。

16、所述禽流感病毒为h5n1型禽流感病毒和/或h9n2型禽流感病毒。

17、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:本发明首次公开了c4bpm是对禽流感病毒增殖具有重要影响的宿主因子。促进c4bpm表达的鸡源细胞有利于禽流感病毒的增殖,从而可用于禽流感疫苗的制备;抑制c4bpm表达的鸡源细胞则抑制禽流感病毒的增殖,因此,抑制c4bpm表达的试剂能开发作为抗禽流感病毒的药物。

技术特征:

1.调控c4bpm表达的试剂盒在制备抗禽流感病毒制剂中的应用,其特征在于:所述的调控c4bpm表达的试剂盒包括促进c4bpm表达的试剂和抑制c4bpm表达的试剂中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:所述的促进c4bpm表达的试剂还包括转染试剂。

5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:所述的c4bpm编码基因的核苷酸序列如seqid no.1所示。

6.根据权利要求3~5任一项所述的应用,其特征在于:所述的重组表达载体的框架为慢病毒载体。

7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:所述的重组表达载体的框架为pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp-t2a-puro。

8.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于:

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于:所述的基因编辑重组载体的载体框架为lenticrisprv2载体。

技术总结本发明公开了调控C4BPM表达的试剂盒在制备抗禽流感病毒制剂中的应用。本发明发现C4BPM过表达有利于禽流感病毒增殖,敲除C4BPM,抑制C4BPM表达,则抑制禽流感病毒增殖。本发明首次公开了C4BPM是对禽流感病毒增殖具有重要影响的宿主因子。促进C4BPM表达的鸡源细胞有利于禽流感病毒的增殖,从而可用于禽流感疫苗的制备;抑制C4BPM表达的鸡源细胞则抑制禽流感病毒的增殖,因此,抑制C4BPM表达的试剂能开发作为抗禽流感病毒的药物。技术研发人员:宁章勇,王诗诗,廖明,亓文宝,李慧子,贾伟新受保护的技术使用者:华南农业大学技术研发日:技术公布日:2024/12/2

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