一种盐酸托莫西汀中痕量亚硝胺杂质N-亚硝基-托莫西汀的检测方法与流程

本发明属于药物检测，具体涉及一种盐酸托莫西汀中痕量亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀的检测方法。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、盐酸托莫西汀(atomoxetine hydrochloride)，化学结构如下：

3、

4、盐酸托莫西汀是一种选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂，用于治疗儿童注意缺陷多动障碍。与同样有疗效的中枢兴奋剂类药物相比，其明显具有选择性强、安全性好优点。但盐酸托莫西汀合成过程中会生成亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀。亚硝胺类化合物为已知的高风险致癌物。近年来，美国食品和药物管理局(fda)、欧洲药品管理局(ema)及国家药品监督管理局(nmpa)相继发布亚硝胺类杂质相关文件。根据fda的最新规定，建议的盐酸托莫西汀中亚硝胺类杂质的可接受摄入量为100ng/天，盐酸托莫西汀的最大日服用量为100mg/天，计算得亚硝胺杂质的限度为不得过1ppm。

5、化合物常规检测方法主要有气相色谱法、液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法。气相色谱法和液相色谱法对样本处理较为严格，若样本复杂，存在分离度差、无法准确确定目标化合物色谱峰，引起结果的不可靠，干扰大。气相色谱-质谱联用和液相色谱-质谱联用主要利用色谱柱分离，质谱根据测定的分子量以及该分子量物质的强度进行定性和定量，较之气相色谱和液相色谱，色谱与质谱联用技术可较好地完成复杂样品的定性和定量。如专利cn106596780a公开了高压液相色谱-质谱联用检测水中多种抗生素含量的方法，通过固相萃取富集浓缩、高压液相色谱-质谱仪检测、分析得到水环境样品中多种抗生素的含量，精确度小于1ppm，检测限为0.0001-0.005ppm。亚硝胺类化合物在人体中可接受限度较小，痕量杂质的检测和控制难度大。目前未发现盐酸托莫西汀原料药及制剂中痕量亚硝胺类杂质n-亚硝基-托莫西汀检测方法的报道。

6、因此，实现盐酸托莫西汀中痕量亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀的快速、精准检测，对于盐酸托莫西汀及其制剂的质量控制和保证用药安全具有重要意义。

技术实现思路

1、为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供一种盐酸托莫西汀中痕量亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀的检测方法，发明人研究发现，若只采用超高效液相色谱检测盐酸托莫西汀中亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀，检测限较高，无法实现含量低于～0.13ppm的亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀的精准检测。对此，本发明提供了一种采用超高效液相色谱-质谱检测盐酸托莫西汀中痕量亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀的方法，该检测方法的检测限为0.033ppm，定量限为0.100ppm，实现了盐酸托莫西汀原料药中痕量亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀的快速、准确检测。

2、为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

3、本发明的第一个方面，提供一种盐酸托莫西汀中痕量亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀的检测方法，包括如下步骤：

4、将盐酸托莫西汀溶于稀释剂中，得到供试品溶液；采用超高效液相色谱-质谱对所述供试品溶液进行分析检测；

5、色谱条件包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲酸水溶液为流动相a，甲酸乙腈溶液为流动相b，梯度洗脱；

6、质谱条件包括：离子源为电喷雾离子源，扫描方式为正离子模式，检测方式为多反应检测mrm；

7、所述痕量是指检测方法能够识别和检测到ppm级别及其以下的n-亚硝基-托莫西汀。

8、在本发明的一些实施例中，所述检测方法还包括定量分析步骤；

9、其中，所述定量分析步骤包括：将n-亚硝基-托莫西汀溶于稀释剂中，得到对照品溶液，采用上述的检测方法对所述对照品溶液进行分析，得到对照品溶液的色谱图；

10、通过供试品溶液的色谱图和对照品溶液的色谱图中的峰面积，计算盐酸托莫西汀中n-亚硝基-托莫西汀的含量。

11、在本发明的一些实施例中，所述质谱条件包括：定量检测，q1为285.0da，q3为177.2da，dp为85±2v，ce为12±2v。

12、优选的，dp为85v，ce为12v。在该条件下，检测效果最好。

13、在本发明的一些实施例中，所述检测方法检测盐酸托莫西汀中痕量亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀的定量限为0.1ppm，检测限为0.033ppm，线性范围为0.1-2ppm，线性方程为y＝245124.7629x+5273.9731，r＞0.999。

14、需要说明的是，可通过外标法计算盐酸托莫西汀中痕量n-亚硝基-托莫西汀的含量，计算公式如下：

15、

16、式中：

17、au--供试品溶液中n-亚硝基-托莫西汀峰面积；

18、as--对照品溶液中n-亚硝基-托莫西汀峰面积；

19、cs--对照品溶液中n-亚硝基-托莫西汀浓度，ng/ml；

20、cu--供试品溶液浓度，mg/ml。

21、在本发明的一些实施例中，所述n-亚硝基-托莫西汀的结构如下：

22、

23、需要说明的是，n-亚硝基-托莫西汀的分子式为c17h20n2o2，该对照品购自于美国quality control chemicals inc公司，qcc cat no.:qa150923。

24、在本发明的一些实施例中，所述稀释剂为甲醇水溶液，优选为70％甲醇水溶液。

25、需要说明的是，70％甲醇水溶液中的70％为体积百分数，70％甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为7:3。

26、在本发明的一些实施例中，所述供试品溶液的浓度为0.9～1.1mg/ml，优选为1mg/ml。

27、在本发明的一些实施例中，所述流动相a为0.09-0.11％甲酸水溶液，优选为0.1％甲酸水溶液。

28、在本发明的一些实施例中，所述流动相b为0.09-0.11％甲酸乙腈溶液，优选为0.1％甲酸乙腈溶液。

29、需要说明的是，所述0.09-0.11％为体积百分数，0.09-0.11％甲酸水溶液即为每1000ml溶液中含甲酸0.9～1.1ml的溶液，0.09-0.11％甲酸乙腈溶液即为每1000ml溶液中含甲酸0.9～1.1ml的溶液。

30、在本发明的一些实施例中，以体积百分数计，所述梯度洗脱如下：

31、0～1min，流动相a 80％，流动相b 20％；

32、1～8min，流动相a由80％降低至10％，流动相b由20％增加至90％；

33、8.1～10min，流动相a 80％，流动相b 20％。

34、在本发明的一些实施例中，所述色谱条件还包括：

35、流速为0.35～0.45ml/min，优选为0.4ml/min；

36、柱温为35～45℃，优选为40℃；

37、色谱柱为hypersil gold，100mm×2.1mm，1.9μm；

38、进样器温度为4℃。

39、在本发明的一些实施例中，所述质谱仪为三重四极杆质谱，梯度洗脱后，采用三重四极杆质谱检测。

40、在本发明的一些实施例中，所述质谱条件还包括：

41、is电压为5500v；雾化器gas1为55psi；辅助气gas2为20psi；离子源温度为550℃；碰撞气：8。上述质谱条件为本发明技术方案中最优的技术条件，在该条件下，检测效果好。本领域技术人员可根据实际需要进行相应的调整，以获得优异的检测效果。

42、在本发明的一些实施例中，所述质谱条件还包括：定性检测，q1为285.0da，q3为117.0da，dp为84±2v，ce为27±2v。

43、优选的，dp为84v，ce为27v。在该条件下，检测效果最好。

44、在本发明的一些实施例中，所述色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱为hypersil gold，100mm×2.1mm，1.9μm；以0.1％甲酸水溶液为流动相a，0.1％甲酸乙腈溶液为流动相b，梯度洗脱；流速为0.4ml/min，柱温为40℃，进样体积为5μl，进样器温度为4℃；

45、所述质谱条件为：质谱仪为三重四极杆质谱，离子源为电喷雾离子源，扫描方式为正离子模式，检测方式为多反应检测mrm；is电压为5500v；雾化器gas1为55psi；辅助气gas2为20psi；离子源温度为550℃；碰撞气：8；定性检测时，q1为285.0da，q3为117.0da，dp为84v，ce为27v；定量检测时，q1为285.0da，q3为177.2da，dp为85v，ce为12v。

46、本发明的第二个方面，提供一种盐酸托莫西汀的质量评估方法，采用上述的检测方法。

47、本发明的有益效果为：

48、本发明提供了一种盐酸托莫西汀中痕量亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀的检测方法。本发明首次提出采用超高效液相色谱-质谱技术对盐酸托莫西汀中痕量的亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀进行分析检测，为有效控制药品质量、保障药品的安全性提供有力保障。采用本发明的超高效液相色谱串联质谱技术对盐酸托莫西汀原料药中痕量亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀进行检测，选择性高，方法专属性好，定量限低至0.1ppm，检测限低至0.033ppm，方法灵敏度高，可快速、准确地检测样品中痕量亚硝胺杂质n-亚硝基-托莫西汀的含量，有效降低分析成本。本发明还验证了亚硝胺杂质在限度浓度(1ppm)的50％～150％范围的准确度，n-亚硝基-托莫西汀的回收率在75％～120％之间，准确度良好；还验证了n-亚硝基-托莫西汀在限度浓度的10％～200％范围的线性，n-亚硝基-托莫西汀在上述范围内r>0.999，线性良好。