一种利用免疫胶体金法检测新鲜蔬菜中重金属镉的方法与流程

本发明涉及食品安全快速检测，特别涉及一种利用免疫胶体金法检测新鲜蔬菜中重金属镉的方法。

背景技术：

1、镉（cadmium，cd）是人体非必要的元素，也是毒性最强的重金属元素之一，而且镉元素具有蓄积性且不易消除；镉可以通过空气、水、食物等途径进入体内，并可在人体骨骼、肾脏和肝脏等器官中蓄积，最终诱发骨科疾病，如骨软化、骨质疏松、肱骨疼痛等，还会诱发肾功能的减退或收到损害、贫血，严重时甚至会引起癌变。

2、目前重金属镉的检测方法主要有原子荧光光谱法（afs）、原子吸收分光光度法(aas)、电感耦合等离子发射光谱法等等，其中，原子荧光光谱分析法具有很高的灵敏度，校正曲线的线性范围宽，能进行多元素同时测定；但是‌原子荧光的强度较低‌，需要用高强度的激发光源，才能得到测定所需的荧光强度；另外，由于荧光弱，导致杂散光对分析检测过程中的影响较大‌，使检测结果的准确性和可靠性降低。原子吸收分光光度法只能进行无机元素的含量分析，不能直接用于有机化合物的含量分析和结构分析；并且，常规原子吸收分光光度法每测一种元素，要更换一次空心阴极灯光源，不能同时进行多元素分析。电感耦合等离子发射光谱法具有分析速度快，灵敏度高，准确度精密度高，测定范围广的优点，但是该方法对所采用的设备要求较高，且操作费用较高，另外，对标准参比组分要求也比较高。以上这些传统的方法，所需仪器及检测成本高昂，对操作人员、实验环境、前处理均有较高的要求，不适合在基层现场实时在线检测，无法满足基层医院、基层环境监测机构和食品检测机构的需求。

3、胶体金是一种由纳米粒子组成的溶液，其表面容易吸附一些化合物或生物分子，形成所谓的“胶体金标记物”。基于这个原理，免疫胶体金检测法通过将特异性抗体等分子与胶体金颗粒共价结合，通过免疫反应检测样本中的目标物质，使其形成肉眼可见颜色的纳米颗粒聚集物，从而实现快速、灵敏、可视化地检测某些生物分子。

4、目前免疫胶体金法不仅可以适用于乳制品中重金属铅元素的检测，还能用于粮食等食用品中重金属元素镉残留的快速定量检测。然而，目前采用现有的免疫胶体金法检测新鲜蔬菜中重金属元素镉的过程中，常常会出现以下问题：

5、1、新鲜蔬菜(叶菜蔬菜、豆类蔬菜、块根和块茎蔬菜、茎类蔬菜、黄花菜除外)的检测结果不能与《gb2762 2022食品安全国家标准 食品中污染物限量》所规定的检出限统一，即检测的灵敏度差；

6、2、同一检出限的不同基质检测结果不同，即相同方法不同基质检测结果假阴、假阳率高，尤其是生姜，其检测结果出现假阳的概率非常高；

7、3、在酸性基质检测过程中会出现无效卡。

8、根据《gb2762 2022食品安全国家标准-食品中污染物限量》中记载的内容，蔬菜的检出限具体见表1所示。

9、表1.不同种类蔬菜的检出限度

10、

11、因此，急需研发一种能够快速、便捷且适用于检测新鲜蔬菜中是否残留有重金属元素镉的方法。

12、本发明提供了一种利用免疫胶体金法检测新鲜蔬菜中重金属镉的方法，以解决现有技术中存在的检测方法，其灵敏度差、检测结果出现假阴或假阳概率高以及出现无效检测概率高等问题。

技术实现思路

1、本发明目的是：本发明提供了一种利用免疫胶体金法检测新鲜蔬菜中重金属镉的方法，以解决现有技术中存在的检测方法的灵敏度差、检测结果的假阴、假阳率高以及无效卡多、应用范围小的问题。

2、本发明的技术方案是：一种利用免疫胶体金法检测新鲜蔬菜中重金属镉的方法，包括：步骤一，配制待检液体；步骤二，使用待用耗材检测待检液体；

3、其中，所述配制待检液体具体包括如下步骤：

4、s1、称取待测的样本并放置于离心管m中，向离心管m中缓慢加入试剂a，混合均匀之后，再加入试剂b，震荡0.5-3min，混匀后静置，形成澄清液体；

5、所述试剂a为酸性溶液；所述试剂b为螯合剂溶液；

6、s2、使用滴管吸取离心管m中的澄清液体至离心管n中，加入试剂c，混合均匀后，配制形成待检液体；

7、所述试剂c为中和试剂；所述中和试剂为碱性溶液或中性缓冲液。

8、优选的，所述酸性溶液为浓硫酸溶液、浓硝酸溶液、乙酸溶液、多元有机酸溶液、多元有机酸溶液与优化试剂的混合液中的任意一种；所述多元有机酸溶液为柠檬酸溶液、酒石酸溶液、苹果酸溶液中的任意一种；所述优化试剂为超纯水或无机弱碱盐溶液。

9、优选的，所述优化试剂为无机弱碱盐溶液；所述多元有机酸溶液与优化试剂的混合液中，多元有机酸溶液与优化试剂的体积比为（2.0-4.0）:1；

10、所述无机弱碱盐溶液为磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、碳酸钠、碳酸氢钠中任意一种或多种的水溶液。

11、优选的，所述多元有机酸溶液与优化试剂的混合液中，所述多元有机酸溶液的浓度为0.03-0.1mol/l，所述优化试剂的浓度为0.05-0.4mol/l。

12、优选的，所述螯合剂溶液为isothiocyanobenzyl-edta的dmso溶液或edtasolutinon和氢氧化钠的水溶液。

13、优选的，所述中和试剂为碱性溶液；所述碱性溶液为0.01-0.2mol/l的氢氧化钠溶液、0.01-0.5mol/l的磷酸氢二钾溶液、0.01-0.5mol/l的磷酸二氢钾溶液、碳酸氢钠饱和溶液、0.01-0.4mol/l的碳酸钾溶液、0.01-0.4mol/l的碳酸钠溶液中的任意一种。

14、优选的，所述中和试剂为中性缓冲溶液；所述中性缓冲溶液由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、氯化钠中的任意一种或者多种与表面活性剂、防腐剂共同组合而成。

15、优选的，所述步骤s1中，加入的所述试剂a的体积为1-3ml，加入的试剂b的体积为20-500μl；

16、所述步骤s2中，吸取的所述澄清液体的体积为25-300μl；加入的所述试剂c的体积为0-1.5ml。

17、优选的，所述步骤s2中，配制得到的所述待检液体的ph值为6-7.5。

18、与现有技术相比，本发明的优点是：

19、（1）本技术提供了一种利用免疫胶体金法检测新鲜蔬菜中重金属镉的方法，该方法首先根据蔬菜的种类和特性采用适合的方案配制待测液体，然后使用铝箔袋封装的待用耗材对待测液体进行检测；该方法操作简单，且不需要使用昂贵仪器，对操作人员、实验环境等要求低，检测成本低，适合在基层、现场实时实施检测，应用范围更广；同时，采用该方法检测新鲜蔬菜中是否含有重金属元素镉时，其检测结果的灵敏度高，误差较小，出现假阳、假阴、无效检测的概率极低，可以解决现有技术中存在的检测方法，其灵敏度差、检测结果出现假阴或假阳概率高以及出现无效检测概率高的问题。

20、（2）本技术提供的一种利用免疫胶体金法检测新鲜蔬菜中重金属镉的方法，该方法可以根据蔬菜的种类和特性，在配制待测液体时，通过选择使用合适的试剂a、试剂b、试剂c，并通过调整试剂a、试剂b、试剂c的浓度以及调整试剂b、试剂c的添加量，来调控待检液体中酸性物质的浓度或试剂b的含量，使检测结果的具有较高准确性；提高检测的灵敏度，降低检测结果出现假阳、假阴、无效检测的概率；同时，实现同一检出限的不同基质的检测结果基本一致，进而使该方法具有优异稳定性。另外，该检测方法还可以快速、便捷地检测各种蔬菜中是否含有重金属元素镉，扩大该检测方法的应用范围。