一株深渊硝酸盐还原远洋杆菌及其在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用

本发明属于生物，涉及一株深渊硝酸盐还原远洋杆菌及其在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用，具体涉及深渊硝酸盐还原远洋杆菌pelagibacteriumnitratireducens m200的分离、纯化、鉴定和保藏以及其在不同初始细菌密度条件下形成的生物被膜对厚壳贻贝稚贝附着的影响作用。

背景技术：

1、海洋覆盖地球表面的三分之二以上，蕴藏着数量庞大、种类丰富的微生物资源，并扮演着重要的生态角色。马里亚纳海沟是地球上最深的海沟，位于北太平洋西部，马里亚纳群岛附近，海沟底部具有超高静水压力、低温和黑暗等特点。由于取样困难，早期从马里亚纳海沟中分离培养出的微生物较少。随着深海采样技术的发展，研究者对马里亚纳海沟微生物的研究逐渐得以开展。

2、厚壳贻贝(mytilus coruscus)，作为我国海水养殖贝类中重要的经济品种之一，也是代表性附着生物。在厚壳贻贝生长史中幼虫会经历2个阶段，浮游阶段和附着阶段。幼虫经过变态发育成稚贝从浮游态转变成附着生活，稚贝生长发育后变为成贝。厚壳贻贝稚贝会寻找一个合适的表面进行附着生长，环境变化时，稚贝会自行切断足丝重新寻找附着基进行附着。近年来，由于厚壳贻贝自然资源被大肆破坏和过量捕捞，苗种生产受到严重制约，野生资源大幅下滑。在海区养殖方式中，脱苗是影响厚壳贻贝保苗率的重要因素，因此提高二次附着率是解决产业问题的关键。开发深渊细菌、探索利用细菌形成生物被膜诱导厚壳贻贝附着技术的开发以解决种苗问题显得尤为必要。

技术实现思路

1、脱苗现象是南、北方贻贝养殖的共同问题，也是影响贻贝产量的重要方面。解决脱苗的方法很多，如选择优良的附着基、包苗密度适宜、沉筏养殖、选择合适的包苗时机等。以往研究发现具有细菌生物被膜的附着基可显著提高贻贝稚贝的附着率，不同细菌具有不同的诱导活性。部分近海细菌虽有诱导活性，但细菌本身对极端环境的适应性不强，因此本研究筛选了深渊细菌，探究深渊细菌对贻贝附着的诱导活性。

2、本发明采用的具体技术方案如下：

3、第一方面，本发明提供一株深渊硝酸盐还原远洋杆菌pelagibacteriumnitratireducens m200，来源西太平洋马里亚纳海沟，mt2016/12-mtd站位(142.36°e,11.43°n)水下-10900m处的表层沉积物。利用zobell 2216e固体培养基分离、纯化得到纯种菌落，并通过16s rrna基因测序与genebank中核酸数据进行比对后上传至ncbi数据库，获取序列号为pp464210，最终确定菌名为硝酸盐还原远洋杆菌(pelagibacteriumnitratireducens)m200，其分类命名为pelagibacterium nitratireducens，该细菌保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏日期为2024年05月30日，保藏编号为cctcc m20241110，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。

4、第二方面，本发明提供上述深渊硝酸盐还原远洋杆菌pelagibacteriumnitratireducen m200在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。

5、进一步地，在深渊硝酸盐还原远洋杆菌pelagibacterium nitratireducen m200的应用中，将纯种的硝酸盐还原远洋杆菌菌株接到海水2216e液体培养基中扩大培养，离心后得到细菌沉淀，用灭菌海水洗涤并制成悬浮液，将悬浮液稀释后在18℃下避光条件培养至形成生物被膜，再用于诱导厚壳贻贝稚贝附着。

6、进一步地，所述悬浮液稀释至细菌初始密度为1.0×106～5×108cells/ml。不同初始密度条件下形成的生物被膜对稚贝的诱导活性有所不同，在初始密度为1.0×108cells/ml时，形成的生物被膜对稚贝附着的诱导率为27.78％，初始密度为1.0×106cells/ml时形成的生物被膜对稚贝的诱导活性仅为14.4％。

7、本发明具有以下有益效果：

8、本发明的深渊硝酸盐还原远洋杆菌pelagibacterium nitratireducen m200形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝稚贝附着的活性，且该菌株能够适应极端环境，为提高厚壳贻贝附着率、提升贻贝产量提供了新的适用范围更广的方案。本发明还发现不同初始密度条件下形成的生物被膜对稚贝的诱导活性有所不同，有助于深渊硝酸盐还原远洋杆菌pelagibacterium nitratireducen m200的应用优化。

技术特征：

1.一株深渊硝酸盐还原远洋杆菌，其特征在于，名称为硝酸盐还原远洋杆菌(pelagibacterium nitratireducens)m200，分类命名为pelagibacteriumnitratireducens，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctccm20241110。

2.权利要求1所述的深渊硝酸盐还原远洋杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用。

3.根据权利要求2所述的深渊硝酸盐还原远洋杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用，其特征在于，将纯种的硝酸盐还原远洋杆菌菌株接到海水2216e液体培养基中扩大培养，离心后得到细菌沉淀，用灭菌海水洗涤并制成悬浮液，将悬浮液稀释后在18℃下避光条件培养至形成生物被膜，再用于诱导厚壳贻贝稚贝附着。

4.根据权利要求3所述的深渊硝酸盐还原远洋杆菌在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用，其特征在于，所述悬浮液稀释至细菌初始密度为1.0×106～5×108cells/ml。

技术总结本发明属于生物技术领域，具体公开了一株深渊硝酸盐还原远洋杆菌，名称为硝酸盐还原远洋杆菌(Pelagibacterium nitratireducens)M200，分类命名为Pelagibacterium nitratireducens，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20241110。本发明还公开了深渊硝酸盐还原远洋杆菌Pelagibacterium nitratireducens M200在诱导厚壳贻贝稚贝附着中的应用，该菌株形成的生物被膜具有诱导厚壳贻贝稚贝附着的活性，且能够适应极端环境，为提高厚壳贻贝附着率、提升贻贝产量提供了新的适用范围更广的方案。技术研发人员：梁箫,杨金龙,王钰怡,杨雨受保护的技术使用者：上海海洋大学技术研发日：技术公布日：2025/1/6