一株嗜酸乳杆菌及其在大黄鱼微生物饲料中的应用

本发明涉及生物，特别涉及一株嗜酸乳杆菌及其在大黄鱼微生物饲料中的应用。

背景技术：

1、高密度水产养殖致使养殖动物病害频发，抗生素等化学药品虽可以控制疾病，但长期滥用会造成诸多不利影响，比如病原菌菌耐药性提高、致使养殖动物组织损伤、水体污染等。因此，寻找健康有效的抗生素替代物变得迫在眉睫。近年来，益生菌在应对水产养殖中细菌性疾病方面展现出良好的应用前景，其具有改善养殖水环境、促进养殖动物生长性能、调节肠道微生态平衡、增强免疫力等作用。益生菌是一类以足量施用后赋予宿主健康益处的活的微生物。2013年，我国批准用于水产养殖的微生物饲料添加剂共计31种。其中包括8种乳酸杆菌。因此，乳酸杆菌属的细菌在水产养殖产业中具有广阔的应用前景。

2、水生动物的生活环境和肠道微生物区系流动性强，对食物变化高度敏感，且易受养殖条件和生态环境因素的影响，近年来，人们越来越关注使用宿主微生物群作为益生菌的来源。宿主微生物群是宿主的天然防御系统，其拥有多种有益因子。因此，宿主相关微生物为倾向于使用陆生益生菌的水产养殖业提供了益生菌的替代来源。

3、因此，水产养殖使用的益生菌可以尝试从宿主体内进行分离，深入探究其益生效应，并推广至水产养殖实际应用中。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一株嗜酸乳杆菌，该菌株具有促免疫、促消化和抗菌功能，且为鱼源性嗜酸乳杆菌。

2、本发明还提供该嗜酸乳杆菌在大黄鱼微生物饲料中的应用，该饲料可以提高鱼类免疫力和缓解脂肪肝。

3、本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

4、一株嗜酸乳杆菌，2024年04月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：cgmcc no.30304，名称为嗜酸乳杆菌ac，其分类命名为lactobacillusacidophilus，保藏单位地址为 北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

5、本发明提供的嗜酸乳杆菌ac菌株，分离于大黄鱼肠道，该菌株具有较强的抗菌活性，其发酵液对多种病原体均具有拮抗作用。

6、所述嗜酸乳杆菌ac的16s rdna序列如seq id no.1所示。

7、一种本发明所述的嗜酸乳杆菌ac在大黄鱼微生物饲料中的应用。进一步的，该应用是改善肠道健康、提高生长性能的大黄鱼微生物饲料。在大黄鱼饲料中适量添加本发明所述的嗜酸乳杆菌ac，能够缓解肝脏脂肪沉积，提高肠道消化酶活性并提高鱼类抗细菌感染的能力；改善大黄鱼的肠道组织结构，促进大黄鱼的营养吸收能力；能够有效降低潜在致病微生物的丰度、提高益生菌的丰度，从而改善大黄鱼的肠道健康、提高鱼类生长性能。

8、作为优选，所述的嗜酸乳杆菌ac以菌悬浮液或培养液或发酵产物或含有所述菌体的干物质的形式添加。

9、作为优选，将嗜酸乳杆菌ac菌株接种至mrs肉汤中，厌氧条件下，温度为35-37℃，转速为150-180rpm，培养24h得到菌培养液，将菌培养液离心，温度为25℃，转速为4000-6000rpm，时间为10min，弃去上清液，使用无菌水洗涤，加入无菌水重悬，即获得嗜酸乳杆菌ac的菌悬浮液。

10、一种大黄鱼微生物饲料，该饲料含有本发明所述的嗜酸乳杆菌ac，并且采用以基础饲料重量2-4％的海藻酸钠粉进行包裹，风干后制成。

11、作为优选，饲料中，嗜酸乳杆菌ac的含量为109-1011cfu/g。

12、一种本发明所述的大黄鱼微生物饲料的制备方法，其该方法包括如下步骤：

13、s1、将嗜酸乳杆菌ac菌株接种至mrs肉汤中，厌氧条件下，温度为35-37℃，转速为150-180rpm，培养24h得到菌培养液，将菌培养液离心，温度为25℃，转速为4000-6000rpm，时间为10min,弃去上清液，使用无菌水洗涤两次，最后加入无菌水重悬，即获得嗜酸乳杆菌ac的菌悬浮液；

14、s2、将菌悬浮液喷洒至大黄鱼基础饲料上，风干后用海藻酸钠粉末进行包裹，使嗜酸乳杆菌ac菌体被充分包裹于饲料上，风干后制得大黄鱼微生物饲料。

15、作为优选，所述大黄鱼基础饲料的配方以重量为100％计包括：秘鲁鱼粉40％，小麦蛋白粉16％，小麦淀粉14％，豆粕13％，鱼油2.28％，豆油2.28％，纤维素4.64％，大豆卵磷脂1.5％，磷酸二氢钙2％，氯化胆碱0.3％，复合维生素2％，复合矿物质2％。

16、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

17、1、本发明提供了一株鱼源性嗜酸乳杆菌菌株ac，该菌株ac对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌及哈维氏弧菌具有较强的抑制效果。实验验证，该菌株能够提高鱼类生长性能，提高血清及肝脏总抗氧化能力(t-aoc)、过氧化氢酶(cat)、溶菌酶(lzm)活性，缓解肝脏脂肪沉积，提高肠道消化酶活性并提高鱼类抗细菌感染的能力。

18、2、经肠道切片的组织学分析和肠道菌群测序分析，在饲料中添加本发明所述的嗜酸乳杆菌ac可以有效提高大黄鱼肠道肠壁厚度、绒毛高度及单根绒毛杯状细胞数，并降低隐窝深度，从而改善大黄鱼的肠道组织结构，促进大黄鱼的营养吸收能力；能够有效降低潜在致病微生物(例如大西洋鲑鱼游泳膀胱肉瘤病毒(atlantic_salmon_swim_bladder_sarcoma_virus)及鲍曼不动杆菌(acinetobacter_baumannii)的丰度，并提高粪肠球菌(enterococcus_faecium)等益生菌的丰度，从而改善大黄鱼的肠道健康。

技术特征：

1. 一株嗜酸乳杆菌，2024年04月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：cgmcc no.30304，名称为嗜酸乳杆菌ac，其分类命名为lactobacillus acidophilus。

2.一种权利要求1所述的嗜酸乳杆菌ac在大黄鱼微生物饲料中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的嗜酸乳杆菌ac以菌悬浮液或培养液或发酵产物或含有所述菌体的干物质的形式添加。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将嗜酸乳杆菌ac菌株接种至mrs肉汤中，厌氧条件下，温度为35-37℃，转速为150-180rpm，培养24h得到菌培养液，将菌培养液离心，温度为25℃，转速为4000-6000rpm，时间为10min，弃去上清液，使用无菌水洗涤，加入无菌水重悬，即获得嗜酸乳杆菌ac的菌悬浮液。

5.一种大黄鱼微生物饲料，其特征在于：该饲料含有权利要求1所述的嗜酸乳杆菌ac，并且采用以基础饲料重量2-4%的海藻酸钠粉进行包裹，风干后制成。

6. 根据权利要求5所述的大黄鱼微生物饲料，其特征在于：饲料中，嗜酸乳杆菌ac的含量为109-1011 cfu/g。

7.一种权利要求5所述的大黄鱼微生物饲料的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述大黄鱼基础饲料的配方以重量为100%计包括：秘鲁鱼粉40%，小麦蛋白粉16%，小麦淀粉14%，豆粕13%，鱼油2.28%，豆油2.28%，纤维素4.64%，大豆卵磷脂1.5%，磷酸二氢钙2%，氯化胆碱0.3%，复合维生素2%，复合矿物质2%。

技术总结本发明涉及生物技术领域，特别涉及一株嗜酸乳杆菌及其在大黄鱼微生物饲料中的应用。一株嗜酸乳杆菌，2024年04月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.30304，名称为嗜酸乳杆菌AC，其分类命名为Lactobacillus acidophilus。本发明提供的嗜酸乳杆菌AC菌株，分离于大黄鱼肠道，该菌株具有较强的抗菌活性，其发酵液对多种病原体均具有拮抗作用。该嗜酸乳杆菌制成的大黄鱼微生物饲料，可以提高鱼类免疫力和缓解脂肪肝。技术研发人员：王萍,邱浩宇,陶晨智,冉志强,许嘉航受保护的技术使用者：浙江海洋大学技术研发日：技术公布日：2024/12/2