一种低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法及其应用与流程

：本发明属于生物活性物质提取，更具体地涉及一种低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法及其应用。

背景技术

0、背景技术：

1、何首乌为蓼科植物何首乌(polygonum multiflorum thunb)的干燥块根，具有解毒、消痈、截疟、润肠通便等功效。现代药理研究表明何首乌具有抗肿瘤、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗衰老、提高免疫力、抗炎等活性，因此，近年来何首乌在药品、保健品、化妆品等领域应用广泛。化学成分研究表明何首乌块根中主要含有二苯乙烯苷类、多糖类、蒽醌类、黄酮类、磷脂类等活性成分。何首乌提取物主要活性成分是何首乌苷，二苯乙烯苷是何首乌苷中特有的水溶性生物活性成分，也是一种有效的化妆品护肤成分。因此，何首乌提取物被作为化妆品添加剂通过外用而得到广泛应用。在生发和防止脱发中的效果与作用机制的研究表明何首乌提取物有效成分何首乌苷能够调控与生发或防止脱发相关的5α-还原酶、碱性磷酸酶(alpl)、雄激素受体、dkk-1等基因表达，在促进生发与防止脱发方面效果显著。

2、目前，何首乌苷的提取方法多采用水作为反应溶剂提取，并结合相应的超声波处理技术和微波处理技术，提取技术研究相对成熟，二苯乙烯苷是何首乌苷中特有的水溶性生物活性成分，水作为优选溶剂，可以用于二苯乙烯苷的提取，但是何首乌为木本植物，何首乌苷有一部分作为游离态处于细胞之间，这部分可以很方便的利用水提提取出来，还有一部分作为结合态或游离态处于何首乌的细胞内或者细胞膜蛋白上，这部分何首乌苷不能直接通过水提的方式提取出来，

3、最近也有些研究表明：可以通过超声波细胞破碎机对何首乌粉末进行处理，该法可以破坏细胞壁，再通过破碎细胞的方式，将细胞内容物释放，再利用水提的方式将何首乌苷提取出来，然而随着细胞的破碎，其他水溶性活性物质也会进入水溶液，给后续精带来无法解决的难题，导致产品纯度极差。

4、如何获得一种纯度高、收率高、操作流程简单的何首乌苷的提取方法至关重要。

技术实现思路

0、技术实现要素：

1、为解决上述问题，克服现有技术的不足，本发明提供了一种低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法及其应用，能够有效的解决首乌苷不能直接通过水提的方式提取和提取率低的问题。

2、本发明解决上述技术问题的具体技术方案为：低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法，其特征在于包括如下步骤：

3、(1)将何首乌粉末利用超声波连续流细胞破碎机处理得到何首乌破壁粉末，将何首乌破壁粉末按照料液比为1：(7-9)置于水中，加入磷脂酶和螯合树脂并混合搅拌，同时控制容器温度为40-50℃，反应1-2h,得到处理液；捞出螯合树脂，离心取上层清液得到处理液；

4、(2)将螯合树脂加入到处理液中，加入糖苷内切酶h、处理液的ph为7.5-8.3，控制容器温度为40-50℃，反应0.5h，再加1％edta反应0.5-2h，捞出螯合树脂，抽滤取上层清液得到反应液；

5、(3)在反应液中加入乙醚溶剂中，常温萃取48小时后，得到上清液；

6、(4)将上清液经浓缩并干燥后，得到何首乌苷粗品。

7、进一步地，按照处理液的质量百分比加入1-5％磷脂酶、10-15％螯合树脂、1％-5％糖苷内切酶h、1-2％反应助剂，处理液的ph为7.5-8.3。

8、进一步地，反应助剂为金属螯合剂，金属螯合剂为edta。

9、进一步地，所述何首乌粉末与所述乙醚的质量体积比为(45～55)g：(0.5～1.5)l。

10、进一步地，何首乌苷粗品通过精制工艺得到精制何首乌苷。

11、进一步地，所述精制工艺：

12、(1)将何首乌苷粗品，加入蒸馏水，摇匀后进行超声预处理，冷却，调节溶液ph5-8；加入纤维素酶，添加量为0.5-2.5％，在温度45-65℃下酶解4-8h，取出，高温进行灭酶，冷却；

13、(2)将上述酶解液放入大孔树脂，以水为洗脱液洗脱，洗脱得到洗脱液，洗脱液干燥，得到精制何首乌苷。

14、一种低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法制备的何首乌苷。

15、一种何首乌苷在制备促进生发与防止脱发的化妆品中的应用。

16、本发明的有益效果是：

17、本发明创造性的将可以通过超声波细胞破碎机对何首乌粉末进行处理，将细胞内容物释放，极大地提高了体系中的何首乌苷的含量，借助螯合树脂将糖蛋白捕获，并通过水提和将不溶于水的内容物去掉，避免杂质引入，再借助乙醚萃取将水解后的何首乌苷转移至乙醚相与水溶性物质分离。

18、本发明创造性地在何首乌粉末的细胞内容物中加入糖苷内切酶h，糖苷内切酶h能够将螯合树脂捕获的糖蛋白中结合态的何首乌苷释放，极大地提高体系中的首乌苷的含量，从而配合乙醚的加入使水溶性的蛋白的变性进入水相，将产物与杂质有效分离，极大地提高了首乌苷的收率和纯度。

19、本发明创造性地分步加入edta，保证了螯合树脂优先捕获的糖蛋白，进一步地作为金属螯合剂避免金属离子能够对何首乌苷起到了降解的作用，还能够对糖苷内切酶h起到一定的缓冲作用，避免过度水解的产生。

技术特征：

1.一种低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法，其特征在于包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法，其特征在于按照处理液的质量百分比加入1-5％磷脂酶、10-15％螯合树脂、1％-5％糖苷内切酶h、1-2％反应助剂。

3.根据权利要求1所述的低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法，其特征在于反应助剂为金属螯合剂，金属螯合剂为edta。

4.根据权利要求1所述的低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法，其特征在于何首乌粉末与乙醚的质量体积比为(45～55)g：(0.5～1.5)l。

5.根据权利要求1所述的低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法，其特征在于何首乌苷粗品通过精制工艺得到精制何首乌苷。

6.根据权利要求5所述的低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法，其特征在于所述精制工艺：

7.一种权利要求1～6任一项所述低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法制备的何首乌苷。

8.一种如权利要求7所述何首乌苷在制备促进生发与防止脱发的化妆品中的应用。

技术总结本发明公开了一种低温溶剂酶法提取何首乌苷的方法及其应用，属于生物活性物质提取技术领域，其特征在于包括如下步骤：将何首乌粉末利用超声波连续流细胞破碎机处理得到何首乌破壁粉末，加入螯合树脂、糖苷内切酶H、EDTA，离心取上层清液得到反应液；加入乙醚溶剂萃取，经浓缩至挥散乙醚液、干燥后，得到何首乌苷粗品；本发明的有益效果是：通过超声波细胞破碎机对何首乌粉末进行处理，极大地提高了体系中的何首乌苷的含量，并通过水提将不溶于水的内容物去掉，并借助乙醚萃取将何首乌苷转移至乙醚相与水溶性物质分离，并借助螯合树脂能够吸附一定的何首乌苷类生物，避免杂质引入。技术研发人员：顾世海,揭从能受保护的技术使用者：山东蔚扬药业有限公司技术研发日：技术公布日：2025/1/6