双组分系统CpxRA在降低小肠结肠炎耶尔森菌耐受性中的用途

本发明属于生物，具体涉及双组分系统cpxra在降低小肠结肠炎耶尔森菌耐受性中的用途。

背景技术：

1、小肠结肠炎耶尔森菌(yersinia enterocolitica,y.enterocolitica)是一种典型的食源性致病菌，人感染后会引起耶尔森菌病，表现为胃肠道症状、呼吸和心血管系统受损，甚至能引起急性阑尾炎和败血症。小肠结肠炎耶尔森菌在环境中分布广泛，在水、土壤、动物和各种食品中均能被检测出来，还能在4℃冰箱中生存，也能在真空包装的冷冻食品中生长和繁殖，渗透压、ph、温度、光强度和营养供应等物理、化学和环境条件的变化使之暴露在各种生存压力中，这些变化均会威胁小肠结肠炎耶尔森菌的存活。小肠结肠炎耶尔森菌在感染和传播过程中，其环境耐受性较强，已对食品安全和人类健康造成了极大的危害，因此，加强对小肠结肠炎耶尔森菌流行性和致病性的研究是目前我国在食品微生物的研究领域亟待发展的一个研究方向。

2、细菌的环境应答对细菌在食品加工储存和运输中的存活至关重要,这就需要细菌多种分子调控系统来有效整合外界环境信息并控制细菌行为应对方式。双组分系统(tcs)是一类能够对外界信号变化进行响应的调控系统，且存在广泛。典型的双组分系统由一个组氨酸激酶(hk)感受外界刺激并相应地调控信号转导，并通过响应调控蛋白(rr)对hk感受到的信号做出响应。cpxra系统是革兰氏阴性菌中十分典型的一种双组分系统，由细胞质内膜上的组氨酸蛋白激酶cpxa和细胞质内的反应调节蛋白cpxr组成。当cpxa蛋白感知到外界信号分子变化时，通过自磷酸化使一个保守的组氨酸残基带上磷酸基团,然后将磷酸基团转移到细胞质内反应调节蛋白cpxr的天冬氨酸残基上，磷酸化的cpxr被激活,会与靶基因启动子区的特异序列结合，激活转录。因此，cpxra双组分系统对于细菌的生命以及生理活动具有着重要的调控作用。小肠结肠炎耶尔森菌环境耐受性强，且易产生抗生素耐药性，而在以往的研究中，有关小肠结肠炎耶尔森菌中cpxra双组分系统对于环境耐受性的影响尚不清晰，且随着抗生素的滥用，细菌的抗生素耐药性已经严重危害到了人类的健康，寻找新的抗菌剂靶点变得极为迫切和重要。

技术实现思路

1、为解决以上技术问题，本发明提供了双组分系统cpxra在降低小肠结肠炎耶尔森菌耐受性中的用途。

2、本发明的第一方面，双组分系统cpxra在降低小肠结肠炎耶尔森菌(yersiniaenterocolitica)耐受性中的用途，所述双组分系统cpxra的基因序列如seq id no.1所示；

3、所述耐受性是对酸性环境、碱性环境和抗生素药物的耐受性。

4、进一步的，所述双组分系统cpxra负调控小肠结肠炎耶尔森菌耐受性。

5、进一步的，所述抗生素药物为大环内酯类抗生素。

6、更进一步的，所述大环内酯类抗生素包括红霉素、罗红霉素、非达霉素。

7、本发明的第二方面，提供下调所述双组分系统cpxra活性的制剂。

8、进一步的，所述的制剂包括敲除质粒，所述敲除质粒是将cpxra-u500片段、cpxra-d500片段和用sbf1酶切过的pds132进行overlap pcr，一步法使其连接获得，所述cpxra-u500片段、cpxra-d500片段的序列依次如seq id no.2和seq id no.3所示。

9、本发明的第三方面，提供所述制剂在降低小肠结肠炎耶尔森菌耐受性中的用途。

10、本发明的第四方面，提供所述制剂降低小肠结肠炎耶尔森菌耐受性的方法，包括如下步骤：

11、s1、将所述敲除质粒转化大肠杆菌，得到重组大肠杆菌；

12、s2、将所述重组大肠杆菌与小肠结肠炎耶尔森菌野生型共培养进行同源重组；

13、s3、筛选小肠结肠炎耶尔森菌双组分系统cpxra敲除转化子。

14、进一步的，所述大肠杆菌为escherichia coli(e.coli)s17-1λpir。

15、本发明的第五方面，提供所述制剂在制备治疗由小肠结肠炎耶尔森菌感染引起的疾病的药物中的用途。

16、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

17、本发明研究结果发现，敲除双组分系统cpxra，小肠结肠炎耶尔森菌对所有测试的抗生素(3种)耐受性降低。同时，与野生型相比，突变菌株对酸性环境和碱性环境更加敏感，且这些敏感性变化均可通过基因回补得到恢复。综上，双组分系统cpxra缺失后小肠结肠炎耶尔森菌对酸性环境、碱性环境、抗生素耐受性显著降低，提示该基因可作为开发控制小肠结肠炎耶尔森菌感染的潜在靶点。

技术特征：

1.双组分系统cpxra在降低小肠结肠炎耶尔森菌(yersinia enterocolitica)耐受性中的用途，其特征在于，所述双组分系统cpxra的基因序列如seq id no.1所示；

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述双组分系统cpxra负调控小肠结肠炎耶尔森菌耐受性。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗生素药物为大环内酯类抗生素。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述大环内酯类抗生素包括红霉素、罗红霉素、非达霉素。

5.下调权利要求1中所述双组分系统cpxra活性的制剂。

6.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，包括敲除质粒，所述敲除质粒是将cpxra-u500片段、cpxra-d500片段和用sbf1酶切过的pds132进行overlap pcr，一步法使其连接获得，所述cpxra-u500片段、cpxra-d500片段的序列依次如seq id no.2和seq id no.3所示。

7.权利要求6所述制剂在降低小肠结肠炎耶尔森菌耐受性中的用途。

8.利用权利要求6所述制剂降低小肠结肠炎耶尔森菌耐受性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌为escherichia colis17-1λpir。

10.权利要求5所述制剂在制备治疗由小肠结肠炎耶尔森菌感染引起的疾病的药物中的用途。

技术总结本发明属于生物技术领域，具体涉及双组分系统CpxRA在降低小肠结肠炎耶尔森菌耐受性中的用途。所述双组分系统CpxRA的基因序列如SEQ ID NO.1所示；所述耐受性是对酸性环境、碱性环境和抗生素药物的耐受性。本发明将双组分系统CpxRA的敲除质粒pDS132‑ΔcpxRA转化大肠杆菌，随后将重组大肠杆菌与野生型小肠结肠炎耶尔森菌共培养，利用同源重组单交换原理敲除小肠结肠炎耶尔森菌双组分系统CpxRA，结果显示，双组分系统CpxRA缺失后，小肠结肠炎耶尔森菌对酸性环境、碱性环境、抗生素耐受性显著降低，提示该系统可作为开发控制小肠结肠炎耶尔森菌感染的潜在靶点。技术研发人员：陈晶瑜,邹丹阳,李文倩受保护的技术使用者：中国农业大学技术研发日：技术公布日：2024/6/18