DNA序列和培育抗棉蚜的棉花的方法

本发明属于生物，具体涉及培育抗棉蚜的棉花的。

背景技术：

1、棉蚜(aphis gossypii glover)俗称腻虫，是同翅目蚜科的昆虫，是棉花苗期的主要害虫之一。棉蚜为世界性棉花害虫，在中国所有棉区都有分布，西北棉区尤为严重。棉蚜寄主植物广泛，包括石榴、花椒、木槿、鼠李属、棉花、瓜类等。棉蚜是刺吸式昆虫，吸食棉花的汁液，导致植物营养恶化，并引起植物叶片皱缩，同时棉蚜分泌的蜜露覆盖在植物叶片表面，严重影响植物光合作用和呼吸作用，致使其产量下降、品质降低(dogimont c etal.2010,hogenhout saet al.2011)。

2、由于蚜虫危害的普遍与频繁发生，棉蚜的有效防治一直是困扰棉花生产的难题。使用农药虽然可以在短时间内有效地防治，但是极易使蚜虫产生抗药性。同时，农药会杀死蚜虫的天敌，这些天敌种群恢复明显滞后于蚜虫，导致蚜虫种群的再次爆发。此外，农药的不合理使用会污染环境，不符合环境保护、绿色生态农业的可持续发展战略。

3、因此，培育抗蚜棉花品种显得十分迫切。虽然育种工作者在形态育种上取得了一定的进展，但是并没有选育出真正意义上的抗蚜虫品种。当前转基因抗虫棉在抗棉铃虫方面产生了巨大效益，然而对刺吸性害虫抗性较差或根本没有抗性(蔚富生等.2012)。

4、近年来基因工程的快速发展使得使用生物控制各种病害虫的方法变得可行，利用转基因技术培育抗性的农作物新品种，是现代农业生产利用高科技提高农作物产量、保护生态环境、促进农业可持续发展的关键技术之一，目前通过基因工程防治蚜虫虽然有了较大发展，获得了一些抗蚜虫基因，但是这些抗蚜基因对蚜虫仅有抑制作用，不能满足生产实践中对蚜虫防治的要求。因此，寻求新的技术手段来创造抗蚜棉花材料成为棉花抗蚜育种亟待解决的im2022150i

5、新课题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种dna序列，其核苷酸序列如序列表seq idno.3所示。

2、第二，本发明提供了一种重组载体，含有权利要求1所述dna序列。

3、第三，本发明还提供了权利要求1所述dna序列在棉花抗棉蚜中的应用。

4、第四，本发明提供了一种权利要求1所述dna序列的制备方法，包括如下步骤：将在5’端加上bamhi酶切位点和3’端加上ecori酶切位点的seq idno.1所示序列与5’端加上bglii酶切位点和3’端加上saci酶切位点seq idno.2所示序列分别连接到载体puc57-amp上；将用bamhi和ecori酶切得到含seq id no.1所示序列的片段与用saci和bglii酶切得到含seq id no.2所示序列的片段连接到载体psk-int得载体psk-int-rnai；将载体psk-int-rnai用bamhi和saci酶切得如seq id no.3所示序列的基因。

5、第五，本发明提供了一种培育抗棉蚜的棉花的方法，包括如下步骤：将权利要求1所述dna序列连接到pbi121载体中得agdpps-rnai表达载体；将agdpps-rnai表达载体用电击转化的方法导入农杆菌感受态细胞中得转化成功的农杆菌；将转化成功的农杆菌感染棉籽的下胚轴得抗棉蚜的棉籽。

6、本发明通过在棉花植株中导入棉蚜基因的序列，使棉花植株中转录生成与棉蚜基因相对应的双链rna结构，棉花植株中的dicer-like蛋白将双链rna切割成21-24nt大小的sirna，这些sirna可以识别侵食棉花的棉蚜当中与之序列互补的mrna并致其降解，影响棉蚜的生长从而提高棉花的抗蚜性。

技术特征：

1.一种dna序列，其特征在于，其核苷酸序列如序列表seq id no.3所示。

2.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求1所述dna序列。

3.权利要求1所述dna序列在棉花抗棉蚜中的应用。

4.权利要求1所述dna序列的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.培育抗棉蚜的棉花的方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结本发明属于生物技术领域，具体涉及培育抗棉蚜的棉花的技术领域。本发明提供了一种DNA序列和培育抗棉蚜的棉花的方法，所述DNA序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示；所述培育抗棉蚜的棉花的方法，包括如下步骤：将权利要求1所述DNA序列连接到pBI121载体中得AgDPPS‑RNAi表达载体；将AgDPPS‑RNAi表达载体用电击转化的方法导入农杆菌感受态细胞中得转化成功的农杆菌；将转化成功的农杆菌感染棉籽的下胚轴得抗棉蚜的棉籽。本发明的方法能提高棉花的抗蚜性。技术研发人员：郭惠珊,张涛,赵建华,田文受保护的技术使用者：中国科学院微生物研究所技术研发日：技术公布日：2024/6/18