一种烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物及其制备方法与应用

本发明涉及一种烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物及其制备方法与应用，属于烟曲霉菌感染诊断试剂和抗烟曲霉菌疫苗研制。

背景技术：

1、烟曲霉(aspergillus fumigatus，af)是最致命的真菌物种之一(trends inmicrobiology 2020,28(7),594-595)。根据宿主的免疫状态不同，af可以引起真菌致敏性重症哮喘(safs)、过敏性支气管肺曲霉病(abpa)、慢性肺曲霉病(cpa)、侵袭性肺曲霉病(ipa)和侵袭性支气管曲霉病(iba)等不同程度的感染疾病，其中在免疫功能低下的患者中引起的侵袭性曲霉病通常是严重且致命的。据统计每年有记录超过20万危及生命的曲霉菌病感染，给人们的生命和健康带来了严重的威胁，对经济社会生活产生了巨大的冲击。

2、当前，唑类抗真菌药物是治疗曲霉菌感染的主要方法，然而由于抗真菌药物的供应有限和耐药菌株的不断出现，开发新的治疗方式刻不容缓。半乳甘露聚糖(gm)作为烟曲霉菌细胞壁多糖的主要成分之一(medical mycology journal,2019,60(3),61-63；plospathog,2013,9(10):e1003642)，参加与宿主的相互作用和相关的免疫反应，可作为一种有希望的候选抗原来诱导宿主的特异性反应，用于开发针对侵袭性曲霉病的疫苗。同时，由于此聚糖在结构上高度特应性，临床上通常将其作为主要生物标记物用于针对患者血清和支气管肺泡灌洗液中曲霉菌感染情况的诊断以及侵袭性曲霉病治疗效果的评价(worldjournal of microbiology and biotechnology,2015,31,1823-1844)。但是，有时gm抗原检测也会存在假阳性以及灵敏度不高等问题。

3、许多研究人员已经对af的半乳甘露聚糖的化学结构进行了分析研究，但是由于菌株不同或培养条件的差异，其结构也有所不同。latgé等人研究表明半乳甘露聚糖是一种结构多样的杂多糖，主链由d-甘露聚糖骨架构建而成，侧链是通过β-(1→3)或β-(1→6)键连接到甘露糖单元上的低聚半乳呋喃糖苷，且侧链中的半乳呋喃糖苷残基通过β-(1→5)连接。目前，所有化学合成的寡糖结构基本上是基于以上结构特征进行的。例如，nifantiev课题组利用化学方法合成了一系列烟曲霉菌gm相关寡糖片段，并进行了一系列的免疫学研究(msphere,2020,5,e00688-19)。研究表明，半乳呋喃二糖galf-β-(1→5)-galf是诱导外周血单核细胞(pbmc)产生特定细胞因子白介素il-1β、il-1ra、il-6所需的最小片段，而gm的甘露聚糖部分不诱导抗体或细胞因子应答。最近，shibata等人研究揭示了gm分子内部存在β-(1→6)键连接的半乳呋喃糖苷侧链通过β-(1→2)键链接到甘露聚糖主链上的结构(glycobiology,2015,25(1),74–87)。目前，基于此类新型结构的寡糖片段的合成及研究应用尚未有报道。

4、为了更加详尽地进行gm的免疫学研究，寻找用于开发烟曲霉菌相关疫苗和诊断试剂的潜在靶标分子，这类最新报道的烟曲霉菌半乳甘露寡糖结构的合成与功能研究显得尤为重要。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物及其制备方法与应用。以各种保护的单糖模块为原料，通过收敛式糖基化组装依次进行糖苷化反应来制备呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物，其中寡糖片段的各还原端吡喃糖基的c-1位是由氨基烷烃链修饰的。另一方面提供了合成的烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物作为免疫增强剂的应用。

2、术语说明：

3、室温：具有本领域公知的含义，一般是指25±2℃。

4、-bn：苄基；-ac：乙酰基；-bz：苯甲酰基；-stol：对甲苯硫基；-fmoc：芴甲氧羰基；tlc：薄层层析色谱；1h nmr：核磁共振氢谱；13c nmr：核磁共振碳谱。

5、本发明通过如下的技术方案来实现：

6、一种烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物，其结构式如式ⅰ、ii、iii、ⅳ、ⅴ、ⅵ或vii所示：

7、

8、其中，n为1-5的整数。

9、本发明中，部分优选的烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物的名称和结构式如表1所示。

10、表1部分烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物的结构式及名称

11、

12、

13、

14、上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物i的制备方法，步骤如下：

15、(i-1)取对苯甲基2,3,5-三-氧-苯甲酰基-6-氧-(9-芴基甲氧基羰基)-1-硫-β-d-半乳呋喃糖苷为糖基供体，对苯甲基2,3,6-三-氧-苯甲酰基-5-羟基-1-硫-β-d-半乳呋喃糖苷为糖基受体，经偶联反应a，制得中间产物m1；

16、

17、(i-2)取步骤(i-1)制备的中间产物m1为糖基供体，叠氮基烷基3,4,6-三-氧-苄基-α-d-甘露吡喃糖苷为糖基受体，经偶联反应b，制得中间产物m2；其中，n是1-5任意一个整数；

18、

19、(i-3)取步骤(i-2)制备的中间产物m2进行脱芴甲氧羰酰基(fmoc)保护基反应，制得中间产物m3、m4；

20、

21、(i-4)取对苯甲基2,3,5,6-四-氧-苯甲酰基-1-硫-β-d-半乳呋喃糖苷为糖基供体，步骤(i-3)制备的中间产物m3为糖基受体，经偶联反应c，制得中间产物m5；

22、

23、(i-5)取步骤(i-4)制备的中间产物m5进行苯甲酰基保护基脱除反应和苄基、叠氮基的氢解脱除反应，制备得到烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物i；

24、

25、根据本发明优选的，步骤(i-1)中所述偶联反应a的方法为：取糖基供体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气保护、室温下搅拌30分钟后，加入物质的量比为(5～10):1的三氟甲磺酸银和2,4,6-三叔丁基嘧啶，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5～10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯活化40分钟，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，加入已溶于干燥二氯甲烷的糖基受体，糖基受体加量与糖基供体加量的物质的量比为(1.0～1.1):1，反应液缓慢升至室温，分离得中间产物m1。

26、根据本发明优选的，步骤(i-2)中所述偶联反应b的方法为：取物质的量比为(1.0～1.1):1的糖基供体和糖基受体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气保护、室温下搅拌30分钟后，加入三氟甲磺酸银，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5～10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯活化30分钟，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，反应液缓慢升至室温，分离得中间产物m2。

27、根据本发明优选的，步骤(i-3)中所述中间产物m3的具体制备方法为：将原料溶于二氯甲烷中，在搅拌条件下加入吡咯烷，吡咯烷与二氯甲烷的体积比为1:10，室温搅拌反应30-40分钟，经过水洗，干燥，浓缩，分离得中间产物m3。

28、根据本发明优选的，步骤(i-3)中所述中间产物m4的具体制备方法为：将原料溶于n,n-二甲基甲酰胺中，在搅拌条件下加入吗啉，吗啉与n,n-二甲基甲酰胺的体积比为1:20，室温搅拌反应20～30分钟，经过水洗，干燥，浓缩，分离得中间产物m4。

29、根据本发明优选的，步骤(i-4)中所述偶联反应c的方法为：取物质的量比为(1.0～1.1):1的糖基供体和糖基受体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气保护、室温下搅拌30分钟后，加入三氟甲磺酸银，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5～10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，反应液缓慢升至室温，反应完全后用三乙胺中和，分离得中间产物m5。

30、根据本发明优选的，步骤(i-5)中所述脱除保护基反应的方法为：取原料溶于二氯乙烷和无水甲醇的混合溶液中，加入1m甲醇钠-甲醇溶液调ph值到10.0～11.0，反应完全，加入强酸性阳离子交换树脂(h+)，中和，过滤，浓缩，正己烷洗涤三次得到的粗产物溶于去离子水、二氯甲烷和叔丁醇的混合溶液中，加入催化钯碳，催化钯碳与原料的质量比为1:(1-2)；向反应瓶中通入氢气，置换出氮气，反应液在氢气保护、室温下搅拌24～48小时，过滤除去钯碳，减压蒸馏除去溶剂，分离、冻干后得目标产物烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物i；

31、其中，所述二氯乙烷和无水甲醇体积比为1:1；所述去离子水、二氯甲烷和叔丁醇的体积比为1:10:20。

32、上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ii的制备方法，步骤如下：

33、(ii-1)按照上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅰ的制备方法中步骤(i-3)，制得中间产物m3；

34、(ii-2)取对苯甲基2,3,5,6-四-氧-苯甲酰基-1-硫-β-d-半乳呋喃糖苷为糖基供体，对苯甲基2,3,6-三-氧-苯甲酰基-5-羟基--1-硫-β-d-半乳呋喃糖苷为糖基受体，经偶联反应d，制得中间产物m6；

35、

36、(ii-3)取步骤(ii-2)制备的中间产物m6为糖基供体，步骤(ii-1)制备的中间产物m3为糖基受体，经偶联反应e，制得中间产物m7；

37、

38、(ii-4)取步骤(ii-3)制备的中间产物m7进行苯甲酰基保护基脱除反应和苄基、叠氮基的氢解脱除反应，制备得到烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ii；

39、

40、根据本发明优选的，步骤(ii-2)中所述偶联反应d的方法为：取糖基供体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气保护、室温下搅拌30分钟后，加入三氟甲磺酸银，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5-10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯活化40分钟，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，然后加入已溶于干燥二氯甲烷的糖基受体，糖基受体加量与糖基供体加量的物质的量比为(1.0-1.1):1，反应液缓慢升至室温，反应完全后用三乙胺中和，分离得中间产物m6。

41、根据本发明优选的，步骤(ii-3)中所述偶联反应e的方法为：取物质的量比为(1.0-1.1):1的糖基供体和糖基受体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气保护、室温下搅拌30分钟后，加入三氟甲磺酸银，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5-10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，反应液缓慢升至室温，反应完全后用三乙胺中和，分离得中间产物m7。

42、根据本发明优选的，步骤(ii-4)中所述脱除保护基反应的方法为：取原料溶于二氯甲烷和无水甲醇的混合溶液中，加入1m甲醇钠-甲醇溶液调ph值到10.0～11.0，反应完全，加入强酸性阳离子交换树脂(h+)，中和，过滤，浓缩，正己烷洗涤三次得到的粗产物溶于去离子水和叔丁醇的混合溶液中，加入催化钯碳，催化钯碳与原料的质量比为1:(1-2)，向反应瓶中通入氢气，置换出氮气，反应液在氢气保护、室温下搅拌24～48小时，过滤除去钯碳，减压蒸馏除去溶剂，分离、冻干后得目标产物烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ii；

43、其中，所述二氯乙烷和无水甲醇体积比为1:1；所述去离子水和叔丁醇的体积比为1:1。

44、上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物iii的制备方法，步骤如下：

45、(iii-1)按照上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅰ的制备方法中步骤(i-3)和烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ii的制备方法中步骤(ii-2)，制得中间产物m4和m6；

46、(iii-2)取步骤(iii-1)制备的中间产物m6为糖基供体，中间产物m4为糖基受体，经偶联反应f，制得中间产物m8；

47、

48、(iii-3)取步骤(iii-2)制备的中间产物m8进行苯甲酰基保护基脱除反应和苄基、叠氮基的氢解脱除反应，制备得到烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物iii；

49、

50、根据本发明优选的，步骤(iii-2)中所述偶联反应f的方法为：取物质的量比为(1.0-1.1):1的糖基供体和糖基受体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气气氛下室温下搅拌30分钟后，加入三氟甲磺酸银，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5-10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，反应液缓慢升至室温，反应完全后用三乙胺中和，分离得中间产物m8。

51、根据本发明优选的，步骤(iii-3)中所述脱除保护基反应的方法为：取原料溶于二氯乙烷和无水甲醇的混合溶液中，加入1m甲醇钠-甲醇溶液调ph值到10.0～11.0，反应完全，加入强酸性阳离子交换树脂(h+)，中和，过滤，浓缩，正己烷洗涤三次得到的粗产物溶于去离子水和叔丁醇的混合溶液中，加入催化钯碳，催化钯碳与原料的质量比为1:(1-2)，向反应瓶中通入氢气，置换出氮气，反应液在氢气保护、室温下搅拌24～48小时，过滤除去钯碳，减压蒸馏除去溶剂，分离、冻干后得目标产物烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物iii；

52、其中，所述二氯乙烷和无水甲醇体积比为1:1；所述去离子水和叔丁醇的体积比为1:1。

53、上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅳ的制备方法，步骤如下：

54、(ⅳ-1)按照上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅰ的制备方法中步骤(i-1)～(i-3)和烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ii的制备方法中步骤(ii-2)，制得中间产物m1、m3和m6；

55、(ⅳ-2)取步骤(ⅳ-1)制备的中间产物m1进行脱芴甲氧羰酰基(fmoc)保护基反应，制得中间产物m9、m10；

56、

57、(ⅳ-3)取步骤(ⅳ-1)制备的中间产物m6为糖基供体，步骤(ⅳ-2)制备的中间产物m9为糖基受体，经偶联反应g，制得中间产物m11；

58、

59、(ⅳ-4)取步骤(ⅳ-3)制备的中间产物m11为糖基供体，步骤(ⅳ-1)制备的中间产物m3为糖基受体，经偶联反应h，制得中间产物m12；

60、

61、(ⅳ-5)取步骤(ⅳ-4)制备的中间产物m12进行苯甲酰基保护基脱除反应和苄基、叠氮基的氢解脱除反应，制备得到烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅳ；

62、

63、根据本发明优选的，步骤(ⅳ-2)中所述中间产物m9的具体制备方法为：将原料溶于二氯甲烷中，在搅拌条件下加入吡咯烷，吡咯烷与二氯甲烷的体积比为1:10，室温搅拌反应30-40分钟，经过水洗，干燥，浓缩，分离得中间产物m9。

64、根据本发明优选的，步骤(ⅳ-2)中所述中间产物m10的具体制备方法为：将原料溶于n,n-二甲基甲酰胺中，在搅拌条件下加入吗啉，吗啉与n,n-二甲基甲酰胺的体积比为1:20，室温搅拌反应20-30分钟，经过水洗，干燥，浓缩，分离得中间产物m10。

65、根据本发明优选的，步骤(ⅳ-3)中所述偶联反应g的方法为：取糖基供体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气保护、室温下搅拌30分钟后，加入三氟甲磺酸银，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5-10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯活化1小时，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，然后加入已溶于干燥二氯甲烷的糖基受体，糖基受体加量与糖基供体加量的物质的量比为(1.0-1.1):1，反应液缓慢升至室温，反应完全后用三乙胺中和，分离得中间产物m11。

66、根据本发明优选的，步骤(ⅳ-4)中所述偶联反应h的方法为：取物质的量比为(1.0-1.1):1的糖基供体和糖基受体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气保护、室温下搅拌30分钟后，加入三氟甲磺酸银，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5-10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，反应液缓慢升至室温，反应完全后用三乙胺中和，分离得中间产物m12。

67、根据本发明优选的，步骤(ⅳ-5)中所述脱除保护基反应的方法为：取原料溶于二氯乙烷和无水甲醇醇的混合溶液中，加入1m甲醇钠-甲醇溶液调ph值到10.0～11.0，反应完全，加入强酸性阳离子交换树脂(h+)，中和，过滤，浓缩，正己烷洗涤三次得到的粗产物溶于去离子水中，加入催化钯碳，催化钯碳与原料的质量比为1:(1-2)，向反应瓶中通入氢气，置换出氮气，反应液在氢气保护、室温下搅拌36～60小时，过滤除去钯碳，减压蒸馏除去溶剂，分离、冻干后得目标产物烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅳ；

68、其中，所述二氯乙烷和无水甲醇体积比为1:1。

69、上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅴ的制备方法，步骤如下：

70、(ⅴ-1)按照上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅰ的制备方法中步骤(i-3)和(ⅳ-3)，制得中间产物m4和m11；

71、(ⅴ-2)取步骤(ⅴ-1)制备的中间产物m11为糖基供体，中间产物m4为糖基受体，经偶联反应i，制得中间产物m13；

72、

73、(ⅴ-3)取步骤(ⅴ-2)制备的中间产物m13进行苯甲酰基保护基脱除反应和苄基、叠氮基的氢解脱除反应，制备得到烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅴ；

74、

75、根据本发明优选的，步骤(ⅴ-3)中所述偶联反应i的方法为：取物质的量比为(1.0-1.1):1的糖基供体和糖基受体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气保护、室温下搅拌30分钟后，加入三氟甲磺酸银，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5-10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，反应液缓慢升至室温，反应完全后用三乙胺中和，分离得中间产物m13。

76、根据本发明优选的，步骤(ⅴ-3)中所述脱除保护基反应的方法为：取原料溶于二氯乙烷和无水甲醇的混合溶液中，加入1m甲醇钠-甲醇溶液调ph值到10.0～11.0，反应完全，加入强酸性阳离子交换树脂(h+)，中和，过滤，浓缩，正己烷洗涤三次得到的粗产物溶于去离子水中，加入催化钯碳，催化钯碳与原料的质量比为1:(1-2)，向反应瓶中通入氢气，置换出氮气，反应液在氢气保护、室温下搅拌36～60小时，过滤除去钯碳，减压蒸馏除去溶剂，分离、冻干后得目标产物烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅴ；

77、其中，所述二氯乙烷和无水甲醇体积比为1:1。

78、上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅵ的制备方法，步骤如下：

79、(ⅵ-1)按照上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅰ的制备方法中步骤(i-3)、烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ii的制备方法中步骤(ii-2)和烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅳ的制备方法中步骤(ⅳ-2)，制得中间产物m3、m6和m10；

80、(ⅵ-2)取步骤(ⅵ-1)制备的中间产物m6为糖基供体，中间产物m10为糖基受体，经偶联反应j，制得中间产物m14；

81、

82、(ⅵ-3)取步骤(ⅵ-2)制备的中间产物m14为糖基供体，步骤(ⅵ-1)制备的中间产物m3为糖基受体，经偶联反应k，制得中间产物m15；

83、

84、(ⅵ-4)取步骤(ⅵ-3)制备的中间产物m15进行苯甲酰基保护基脱除反应和苄基、叠氮基的氢解脱除反应，制备得到烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅵ；

85、

86、根据本发明优选的，步骤(ⅵ-2)中所述偶联反应j的方法为：取糖基供体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气保护、室温下搅拌30分钟后，加入三氟甲磺酸银，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5-10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯活化1小时，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，然后加入已溶于干燥二氯甲烷的的糖基受体，糖基受体加量与糖基供体加量的物质的量比为(1.0-1.1):1，反应液缓慢升至室温，反应完全后用三乙胺中和，分离得中间产物m14。

87、根据本发明优选的，步骤(ⅵ-3)中所述偶联反应k的方法为：取物质的量比为(1.0-1.1):1的糖基供体和糖基受体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气气氛下保护、物质的量比为(5-10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，反应液缓慢升至室温，反应完全后用三乙胺中和，分离得中间产物m15。

88、根据本发明优选的，步骤(ⅵ-4)中所述脱除保护基反应的方法为：取原料溶于二氯乙烷和无水甲醇的混合溶液中，加入1m甲醇钠-甲醇溶液调ph值到10.0-11.0，反应完全，加入强酸性阳离子交换树脂(h+)，中和，过滤，浓缩，正己烷洗涤三次得到的粗产物溶于去离子水中，加入催化钯碳，催化钯碳与原料的质量比为1:(1-2)，向反应瓶中通入氢气，置换出氮气，反应液在氢气气氛下室温搅拌36～60小时，过滤除去钯碳，减压蒸馏除去溶剂，分离、冻干后得目标产物烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅵ；

89、其中，所述二氯乙烷和无水甲醇体积比为1:1。

90、上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物vii的制备方法，步骤如下：

91、(vii-1)按照上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅰ的制备方法中步骤(i-1)～(i-3)和烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅳ的制备方法中步骤(ⅵ-2)，制得中间产物m4和m14；

92、(vii-2)取步骤(vii-1)制备的中间产物m14为糖基供体，中间产物m4为糖基受体，经偶联反应l，制得中间产物m16；

93、

94、(vii-3)取步骤(vii-2)制备的中间产物m16进行苯甲酰基保护基脱除反应和苄基、叠氮基的氢解脱除反应，制备得到烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物vii；

95、

96、根据本发明优选的，步骤(vii-2)中所述偶联反应l的方法为：取物质的量比为(1.0-1.1):1的糖基供体和糖基受体溶于干燥的二氯乙烷中，加入型分子筛，在氮气保护、室温下搅拌30分钟后，加入三氟甲磺酸银，三氟甲磺酸银的加量与糖基供体加量的物质的量比为(5-10):1，室温下搅拌30分钟后，将反应液降温至-78℃，加入对甲苯硫氯，对甲苯硫氯的加量与糖基供体加量的物质的量比为1:1，反应液缓慢升至室温，反应完全后用三乙胺中和，分离得中间产物m16。

97、根据本发明优选的，步骤(vii-3)中所述脱除保护基反应的方法为：取原料溶于二氯乙烷和无水甲醇的混合溶液中，加入1m甲醇钠-甲醇溶液调ph值到10.0～11.0，反应完全，加入强酸性阳离子交换树脂(h+)，中和，过滤，浓缩，正己烷洗涤三次得到的粗产物溶于去离子水中，加入催化钯碳，催化钯碳与原料的质量比为1:(1-2)，向反应瓶中通入氢气，置换出氮气，反应液在氢气保护、室温下搅拌36～60小时，过滤除去钯碳，减压蒸馏除去溶剂，分离、冻干后得目标产物烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物vii；

98、其中，所述二氯乙烷和无水甲醇体积比为1:1。

99、本发明还提供了上述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物作为免疫增强剂在制备诊断试剂和疫苗中的应用。所述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物能够提高巨噬细胞增殖活性、吞噬功能以及免疫因子的表达。

100、进一步优选的，所述烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物为烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物ⅴ、ⅵ或vii。

101、本发明中未详细说明的实验步骤均按照本技术领域常规操作进行。

102、有益效果：

103、1、本发明以各种保护的单糖模块为原料，通过收敛式糖基化组装依次进行糖苷化反应制备得到了分子量不同、特征键连接位置不同的烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物，其中的呋喃半乳甘露寡糖苷的还原端甘露吡喃糖基的c-1位是由氨基烷烃长链修饰，可与蛋白缀合进而制备成寡糖蛋白缀合物，然后进行相关免疫学研究。本发明解决了烟曲霉菌中提取分离获得足量多糖化合物困难的问题，可大量制备均一的寡糖苷衍生物，有助于开发针对烟曲霉菌感染的诊断试剂，对于研发相应糖类疫苗具有重要意义。

104、2、本发明提供的烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物通过细胞增殖实验、吞噬能力实验以及qpcr实验显示出了对raw 264.7细胞系鼠巨噬细胞的免疫调节活性，有助于开发具有调节免疫功能的免疫增强剂，对于研发相关糖类药物具有重要意义。

105、3、本发明提供的烟曲霉菌呋喃半乳甘露寡糖苷衍生物的制备方法设计合理，可操作性强，合成效率高，产品收率高，纯度好。通过合成不同结构寡糖片段以进行免疫学研究，对于研发相应的诊断试剂和治疗烟曲霉菌相关疫苗和糖类药物具有重要意义。