稳定的脂质纳米颗粒mRNA组合物及其用途的制作方法

背景技术：

1、covid-19疫情的爆发由高致病性冠状病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒-2(sars-cov-2)引起。mrna lnp疫苗是第一种获得fda紧急使用授权的疫苗。这改变了全球的疫苗。但mrna疫苗的储存和分发依赖于冰点温度，并且其施用依赖于医务人员进行复杂的准备。迫切需要稳定mrna lnp疫苗并且简化疫苗施用，以便在全球范围内不仅分发sars-cov-2疫苗，而且分发mrna lnp的许多疫苗和非疫苗应用。

技术实现思路

1、本文尤其提供了包含封装在脂质纳米颗粒(lnp)中的核酸(例如，rna分子)的组合物或制剂。在一些实施方案中，组合物或制剂能够增加封装在lnp中的核酸(例如，rna分子)的稳定性。在一些实施方案中，在干燥、储存和复溶(ds&r)过程后，与无ds&r过程的对照组合物或制剂相比，本文所述的组合物或制剂具有增加的稳定性。例如，这种稳定性的增加可导致在将组合物或制剂在一定温度下储存一时间段后保留核酸的结构和/或活性。在一些实施方案中，在室温下(例如，约+20℃至约+30℃，诸如25℃)储存某一时间段(诸如至少一天、两天、三天、一周、十天、两周、三周、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、一年或更久)后，本文所述的组合物或制剂中保留核酸的至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性。在一些实施方案中，在室温下储存至少一周或一个月后，组合物或制剂保留封装在lnp中的核酸的至少80％至100％活性。

2、在一个方面，提供了一种包含rna分子和脂质纳米颗粒(lnp)的组合物。在一些实施方案中，组合物包含rna分子和脂质纳米颗粒(lnp)，其中rna分子被封装在lnp中，其中组合物呈糖玻璃的形式。在一些实施方案中，rna分子是自扩增rna(samrna)。在一些实施方案中，rna分子是信使rna(mrna)、小干扰rna(sirna)、短发夹rna或小发夹rna(shrna)、微小rna(mirna)、mirna抑制剂(安塔够妙(antagomir)/阿够妙(antimir))或信使rna干扰互补rna(micrna)。

3、在一些实施方案中，本文所述的rna分子编码多肽或其片段。在一些实施方案中，本文所述的rna分子编码病毒多肽或其片段。在一些实施方案中，病毒多肽是或来源于病毒的刺突蛋白。在一些实施方案中，病毒是冠状病毒(例如，sars-cov-2)或流感病毒。

4、在一些实施方案中，本文所述的rna分子是针对病毒的疫苗，所述疫苗包含待施用于有需要的受试者的病毒多肽或其片段。

5、在一些实施方案中，本文所述的组合物还包含封装在lnp中的第二rna分子。在一些实施方案中，本文所述的组合物还包含封装在lnp中的多于一种另外的rna分子。

6、在一些实施方案中，本文所述的组合物呈糖玻璃的形式。在一些实施方案中，糖玻璃包括蔗糖、葡萄糖、半乳糖、果糖、海藻糖、麦芽糖和其他合适的糖类型中的一种或多种。在一些实施方案中，糖玻璃包括海藻糖。

7、在一些实施方案中，本文所述的组合物还包含peg分子、可离子化脂质和/或结构脂质。

8、在一些实施方案中，lnp包括可离子化脂质。例如，可离子化脂质可包括dlin-mc3-dma、c12-200、alc-0315、a9和sm-102中的一种或多种。

9、在一些实施方案中，peg分子包括聚乙二醇2000(peg 2000)、dmg-peg2000(聚乙二醇2000二肉豆蔻酰甘油)、alc-0159(2[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺)和dspe-peg2000中的一种或多种。在一些实施方案中，peg分子包括dspe-peg2000。

10、在一些实施方案中，本文所述的结构脂质包括以下中的一种或多种：胆固醇、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺(dspe)和dspe衍生物[包括1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-聚乙二醇(dspe-peg)，诸如dspe-peg2000或dspe-peg2k]。

11、在一些实施方案中，本文所述的组合物包含结构脂质、可离子化脂质和peg分子，其摩尔比为约27％-约40％可离子化脂质、约45％-约70％结构脂质和约0.1％-约3％ peg分子。在一些实施方案中，本文所述的组合物包含摩尔比为约35％-约37％的可离子化脂质、约62％-约64％的结构脂质和约0.3％-约1％的peg分子。在一些实施方案中，本文所述的组合物包含摩尔比为约36.5％的可离子化脂质、约62％的结构脂质和约0.5％的peg分子。

12、在一些实施方案中，本文所述的组合物包含至少一种类型的糖。在一些实施方案中，组合物中存在的至少一种类型的糖的量为约1％-约60％(重量/体积)、约1％-约50％(重量/体积)、约5％-约50％(重量/体积)、约5％-约20％(重量/体积)、约5％-约10％(重量/体积)、约10％-约60％(重量/体积)、约10％-约50％(重量/体积)、约10％-约20％(重量/体积)或其间的任何子值和子范围，包括端点。在一些实施方案中，组合物中存在的至少一种类型的糖的量为约1％、5％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％(重量/体积)或更多，包括其间的所有子值和子范围，包括端点。在一些实施方案中，组合物中存在的至少一种类型的糖的量为约5％-约20％(重量/体积)。在一些实施方案中，组合物中存在的至少一种类型的糖的量为约12％-约17％(重量/体积)。在一些实施方案中，组合物中存在的至少一种类型的糖的量为约15％(重量/体积)。

13、在一些实施方案中，本文所述的组合物包含任意合适百分比的糖玻璃中的水含量。在一些实施方案中，糖玻璃中的水含量为约0.01至100g·水/g·固体，包括其间的所有子值和子范围，包括端点。在一些实施方案中，糖玻璃中的水含量为约0.1至10、0.1至5、0.1至3、0.5至10、0.5至5、0.5至3、1至10、1至5、或1至3g·水/g·固体，包括其间的所有子值和子范围，包括端点。

14、在一些实施方案中，本文所述的组合物与非糖玻璃形式的类似组合物相比具有增加的稳定性。增加的稳定性可以是例如至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％、350％、400％、450％、500％、600％、700％、800％、900％、1000％、2000％、5000％、10000％或更多，包括其间的所有子值和子范围，包括端点。

15、在一些实施方案中，本文所述的组合物在非冰点温度或室温下具有增加的稳定性。

16、在一些实施方案中，本文所述的组合物能够在非冰点温度或室温下储存一时间段后复溶，以施用于有需要的受试者。储存一时间段可以是例如约1天、3天、一周、10天、两周、三周、一个月或更久。

17、在一些实施方案中，在施用于受试者之前，将组合物或制剂在一定温度下储存一时间段，同时保留组合物或制剂中封装在lnp中的核酸的至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性。在一些实施方案中，储存温度为室温(例如，约+20℃至约+30℃，诸如25℃)。在一些实施方案中，储存一时间段为至少一天、两天、三天、一周、十天、两周、三周、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、一年或更久。在一些实施方案中，在施用于受试者之前，在室温下储存例如至少一周或一个月后，组合物或制剂保留封装在lnp中的核酸的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％活性。

18、在一些实施方案中，本文所述的组合物还包含能够促进封装的剂。所述剂可例如包括p188或hes。在一些实施方案中，组合物中的剂的浓度为约1％、3％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％或更高，包括其间的所有子值和子范围，包括端点。

19、在一些实施方案中，本文所述的组合物已经历玻璃化。例如，组合物可以被玻璃化成糖玻璃状态。

20、在另一个方面，提供了一种本文所述的组合物的制剂。在一些实施方案中，制剂还包含药学上可接受的赋形剂。

21、在另一个方面，提供了一种含有本文所述的糖玻璃组合物或制剂的小瓶、安瓿或预填充注射器。

22、在另一个方面，提供了一种用于施用本文所述的组合物或制剂的微针装置、微阵列或类似装置。在一些实施方案中，微针装置包括(a)本文所述的组合物或制剂；以及(b)基底，所述基底包括薄片和从其延伸的多个微针，每个所述微针包括尖端、基部、位于基部的将微针连接至薄片的铰链，以及包含脱水组合物的孔。

23、在另一个方面，提供了一种用于施用于有需要的受试者的复溶组合物，其包含本文所述的组合物或制剂。在一些实施方案中，复溶组合物位于本文所述的小瓶、安瓿或预填充注射器中。

24、在另一个方面，提供了一种增加本文所述的组合物或制剂的稳定性的方法，例如通过玻璃化成糖玻璃。在一些实施方案中，所述方法是一种增加组合物中的rna分子稳定性的方法，其包括将rna分子与lnp一起配制并且将所述制剂形成为糖玻璃组合物。在一些实施方案中，糖玻璃组合物包含本文所述的组合物或制剂。在一些实施方案中，糖玻璃是通过玻璃化形成的。在一些实施方案中，增加的稳定性是在非冰点温度或室温下的稳定性。

25、在另一个方面，提供了一种通过玻璃化成糖玻璃而生产本文所述的组合物或制剂的方法。在一些实施方案中，所述方法是一种生产本文所述的组合物或制剂以施用于有需要的受试者的方法。在一些实施方案中，所述方法包括i)将组合物或制剂玻璃化成糖玻璃；以及ii)在非冰点温度或室温下储存一时间段后，复溶所述组合物以施用。

26、在另一个方面，提供了一种在受试者中产生免疫反应或用本文所述的组合物或制剂对受试者进行疫苗接种的方法。在一些实施方案中，所述方法是一种在有需要的受试者中产生免疫反应的方法，其包括施用治疗有效量的本文所述的组合物或制剂。

27、在另一个方面，提供了一种通过施用本文所述的组合物或制剂来治疗受试者的病毒相关疾病或病症的方法。在一些实施方案中，在施用之前，在非冰点温度或室温下储存一时间段后，复溶本文所述的组合物或制剂。在一些实施方案中，在施用于受试者之前，将组合物或制剂在一定温度下储存一时间段，同时保留组合物或制剂中封装在lnp中的核酸的至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性。在一些实施方案中，储存温度为室温(例如，约+20℃至约+30℃，诸如25℃)。在一些实施方案中，储存一时间段为至少一天、两天、三天、一周、十天、两周、三周、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、一年或更久。在一些实施方案中，在施用于受试者之前，在室温下储存至少一周或一个月后，组合物或制剂保留封装在lnp中的核酸的至少80％至100％活性。

28、在另一个方面，提供了一种用于在安瓿、小瓶或预填充注射器中玻璃化成糖玻璃的方法。在另一个方面，提供了包含本文所述的组合物和/或制剂的安瓿、小瓶或预填充注射器。在另一个方面，提供了一种使用包含组合物和/或制剂的安瓿、小瓶或预填充注射器例如来治疗疾病的方法。