一种生物素标记鞣花酸及其制备方法

本发明涉及有机合成，更具体的说是涉及一种生物素标记鞣花酸及其制备方法。

背景技术：

1、轮状病毒(rotavirus，rv)属于呼肠孤病毒科轮状病毒属，无囊膜。rv有一个约18500bp的片段基因组，包含11个双链rna分子，编码6个结构蛋白和6个非结构蛋白。轮状病毒毒株分为a-j 10个群引起发病的主要为a群，是引起婴幼儿急性肠胃炎的主要病原体。

2、

3、尽管疫苗的大量应用降低了轮状病毒的发病率，但是轮状病毒疫苗衍生的病毒株也开始流行，针对rv感染并没有特效药，所以药物的筛选和开发刻不容缓。

4、中医常使用石榴皮治疗消化道疾病，记载于《普济方》和《雷公炮炙论》等古医书中。石榴皮中含有丰富的鞣质类、黄酮类、多糖和生物碱等活性物质，其中鞣质类物质含量最高，如安石榴苷和鞣花酸等。安石榴苷是鞣花酸的缩合物，不能被肠道直接吸收进入血液，而是先被水解后，才能被人体吸收利用。鞣花酸的药理作用主要有抗炎、抗菌、抗病毒和抗肿瘤等，并且是nf-κb的天然抑制剂。有研究表明，鞣花酸能够缓解腹泻，所以其具有非常高的抗rv的潜在价值。

5、我们前期通过网络药理学、计算生物学和表面等离子共振等技术，证明鞣花酸通过靶向tlr4蛋白发挥抗rv作用，最终可能为通过调控tlr4/nf-κb相关通路发挥其抗rv的作用。但是，还需进一步验证。

6、化学蛋白质组学技术旨在利用功能各异的探针，联合蛋白质组学技术，解决复杂体系中小分子如何与蛋白质相互作用的问题，已被成功用于新药先导化合物的筛选研究中。小分子药物设计的诉求是寻找对靶标蛋白具有高亲和力的新型小分子，而生物素和链霉亲和素的相互作用为小分子药物设计提供了重要的经验性参考。

7、因此，如何利用生物素将鞣花酸进行标记，以便于明确鞣花酸作用的靶蛋白是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种生物素标记鞣花酸及其制备方法，以解决现有技术中的不足。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种生物素标记鞣花酸，结构式为：

4、

5、进一步，上述产物1为米色固体，化学式为c34h34n4o12s2，精确质量为754.1614，分子量为754.7820。

6、进一步，上述产物2为米色固体，化学式为c34h34n4o12s2，精确质量为754.1614，分子量为754.7820。

7、进一步，上述产物3为米色固体，化学式为c24h20n2o10s，精确质量为528.0839，分子量为528.4880。

8、一种生物素标记鞣花酸的制备方法，具体包括以下步骤：将鞣花酸和生物素加入二甲基亚砜(dmso)中，再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edci)和4-二甲氨基吡啶(dmap)，反应，过滤，纯化，即得。

9、进一步，上述鞣花酸、生物素、dmso、edci和dmap的用量比为1mmol:1mmol:25ml:1.5mmol:1mmol。

10、采用上述进一步的有益效果在于，dmso为反应溶剂。

11、edci是一种具有活性亚胺结构的试剂，在edci/dmap酯化反应中起到了非常重要的作用。其作用机理如下：首先，在edci/dmap体系中，edci会与羧酸反应，生成活性的edci中间体，该中间体具有亲电性，可以与dmap形成复合物。复合物的形成有助于加速酯化反应的进行。其次，edci中间体还可以与胺类物质发生缩合反应，生成氨基酸中间体，该中间体也具有亲电性，可以进一步促进酯化反应的进行。

12、dmap是一种催化剂，在edci/dmap酯化反应中起到了催化作用。其作用机理如下：首先，dmap可以与edci形成复合物，该复合物可以增加edci分子的亲电性，并且使得edci更容易与羧酸发生反应。其次，dmap还可以与羧酸形成氢键，该氢键会使得羧酸分子更加易于离去，在酯化反应中起到了促进作用。

13、进一步，上述反应的温度为30℃，时间为15h。

14、采用上述进一步的有益效果在于，本发明edci/dmap酯化反应具有以下优点：1.反应速度快：edci/dmap酯化反应速度非常快，通常只需要几个小时就可以完成反应。2.反应产率高：edci/dmap酯化反应产率高，可以达到80％以上。3.适用范围广：edci/dmap酯化反应适用于各种不同类型的羧酸和胺类物质之间的缩合反应。

15、进一步，上述纯化的方法为高效液相色谱(hplc)，乙腈:水＝5％-95％，0.1％甲酸，流速20ml/min，室温。

16、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

17、本发明联合了蛋白质组学技术，解决了复杂体系中小分子与蛋白质相互作用的问题。且本发明制备方法简单，工艺稳定，反应条件温和，易于重现实验。

技术特征：

1.一种生物素标记鞣花酸，其特征在于，结构式为：

2.根据权利要求1所述的一种生物素标记鞣花酸，其特征在于，所述产物1为米色固体，化学式为c34h34n4o12s2，精确质量为754.1614，分子量为754.7820。

3.根据权利要求1所述的一种生物素标记鞣花酸，其特征在于，所述产物2为米色固体，化学式为c34h34n4o12s2，精确质量为754.1614，分子量为754.7820。

4.根据权利要求1所述的一种生物素标记鞣花酸，其特征在于，所述产物3为米色固体，化学式为c24h20n2o10s，精确质量为528.0839，分子量为528.4880。

5.一种生物素标记鞣花酸的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：将鞣花酸和生物素加入dmso中，再加入edci和dmap，反应，过滤，纯化，即得。

6.根据权利要求5所述的一种生物素标记鞣花酸的制备方法，其特征在于，所述鞣花酸、生物素、dmso、edci和dmap的用量比为1mmol:1mmol:25ml:1.5mmol:1mmol。

7.根据权利要求5所述的一种生物素标记鞣花酸的制备方法，其特征在于，所述反应的温度为30℃，时间为15h。

8.根据权利要求5所述的一种生物素标记鞣花酸的制备方法，其特征在于，所述纯化的方法为hplc，乙腈:水＝5％-95％，0.1％甲酸，流速20ml/min，室温。

技术总结本发明公开了一种生物素标记鞣花酸，结构式为：本发明还公开了一种生物素标记鞣花酸的制备方法，具体包括以下步骤：将鞣花酸和生物素加入DMSO中，再加入EDCI和DMAP，反应，过滤，纯化，即得。本发明联合了蛋白质组学技术，解决了复杂体系中小分子与蛋白质相互作用的问题。且本发明制备方法简单，工艺稳定，反应条件温和，易于重现实验。技术研发人员：郑剑纲,王鹤洁,杨建洲,张建斌,王晓云,孙琳琳受保护的技术使用者：长治医学院技术研发日：技术公布日：2024/9/9