一种肿瘤原代细胞分离组织保护液及其制备方法与流程

本发明属于生物领域，特别是涉及一种肿瘤原代细胞分离组织保护液及其制备方法。

背景技术：

1、现如今癌症是严重威胁人类生命的一种疾病，已开发多种用于癌症治疗的手段，但是癌症的治疗任然是一大难题，患者生存率还是很低，主要是由于肿瘤组织中存在肿瘤干细胞，肿瘤干细胞具有很强的自我更新能力，从而促进肿瘤生长以及癌症转移。从肿瘤组织中分离肿瘤干细胞用于研究，为癌症的治疗提供更多的手段。因此需要把从肿瘤患者中手术切除或者穿刺的肿瘤组织保存在液体中，运输到实验室，分离肿瘤干细胞进行培养，用于科学研究或者进行筛药，筛选出对于患者最适合的药物，用于患者个性化治疗。因此组织运输过程中需要一种保护液，可以保证组织在运输过程中维持较高的活性，保证分离的肿瘤干细胞具有更高的活性，提高细胞培养时的成活率。

2、目前较常用的组织运输液为磷酸缓冲盐溶液(pbs)以及细胞培养基或者在这两者的基础上加入抗生素。磷酸缓冲盐溶液主要起到盐平衡、可调整适宜的ph缓冲作用，细胞培养基主要用于维持细胞的生长增殖，但是磷酸缓冲盐溶液(pbs)和细胞培养基都不能很好地保持体外肿瘤组织的生物活性。在这基础上加入抗生素也只能抑制组织微生物的感染，但是对于维持肿瘤组织的活性还是有很大缺陷，从而致使肿瘤细胞的分离的成功率很低。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种肿瘤原代细胞分离组织保护液及其制备方法。

2、为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

3、一种肿瘤原代细胞分离组织保护液，每500ml肿瘤原代细胞分离组织保护液中包括5ml抗生素混合液，0.05ml y-27632溶液，其余为dmem培养基；

4、抗生素混合液中包括青霉素和链霉素；青霉素在抗生素混合液中的浓度为5.7-6.3mg/ml；链霉素在抗生素混合液中的浓度为9.6-10.4mg/ml；y-27632溶液中y-27632的浓度为10-15mg/ml。

5、进一步的改进，所述青霉素在抗生素混合液中的浓度为6.3mg/ml。

6、进一步的改进，所述链霉素在抗生素混合液中的浓度为10.4mg/ml。

7、进一步的改进，y-27632溶液中y-27632的浓度为15mg/ml。

8、一种肿瘤原代细胞分离组织保护液的制备方法，包括如下步骤：

9、步骤一、称取青霉素，链霉素加入10ml pbs缓冲液中充分溶解,用0.22μm滤器过滤,配置成抗生素混合液；

10、步骤二、称取y-27632，加入1ml超纯水中充分溶解，用0.22μm滤器过滤；

11、步骤三、取步骤一中5ml抗生素混合液，取步骤2中0.05ml y-27632,剩余用500mldmem/f12培养基补齐到500ml,得到权利要求1-4任一所述的组织保护液；

12、步骤四、用封口膜进行封口，4℃的环境下保存。

13、本发明具有以下有益效果：

14、1.抗生素的主要作用为抑制微生物生长，杀死肿瘤组织可能携带的微生物，进而防止细菌、真菌等微生物感染，以确保肿瘤原代细胞分离培养成功。n-乙酰半胱氨酸的主要作用为抗氧化，增加细胞活力。clonertm浓的作用为抗凋亡，增加单细胞/细胞团培养成类器官的成功率。人血白蛋白提供人体渗透压环境。dmem/f12培养基提供组织运输过程中维持组织细胞基本的营养物质。(。

15、2.本发明所述的组织保护液中加入了抗生素，抑制微生物生长，杀死肿瘤组织可能携带的微生物，进而防止细菌、真菌等微生物感染，以确保肿瘤原代细胞分离培养成功。

16、3.本发明所述的组织保护液中加入了抗生素，加入了y-27632，抑制组织细胞凋亡，可有效保护组织块结构完整性，提高组织活性，提高肿瘤原代细胞的获得率。

技术特征：

1.一种肿瘤原代细胞分离组织保护液，其特征在于：每500ml肿瘤原代细胞分离组织保护液中包括5ml抗生素混合液，0.05ml y-27632溶液，其余为dmem培养基；

2.如权利要求1所述的肿瘤原代细胞分离组织保护液，其特征在于：所述青霉素在抗生素混合液中的浓度为6.3mg/ml。

3.如权利要求1所述的肿瘤原代细胞分离组织保护液，其特征在于：所述链霉素在抗生素混合液中的浓度为10.4mg/ml。

4.如权利要求1所述的肿瘤原代细胞分离组织保护液，其特征在于：y-27632溶液中y-27632的浓度为15mg/ml。

5.一种肿瘤原代细胞分离组织保护液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结本发明公开了一种肿瘤原代细胞分离组织保护液及其制备方法，其每500ml肿瘤原代细胞分离组织保护液中包括5ml抗生素混合液，0.05mlY‑27632溶液，其余为DMEM培养基；抗生素混合液中包括青霉素和链霉素；青霉素在抗生素混合液中的浓度为5.7‑6.3mg/ml；链霉素在抗生素混合液中的浓度为9.6‑10.4mg/ml；Y‑27632溶液中Y‑27632的浓度为10‑15mg/ml。本发明所述的组织保护液中加入了抗生素，抑制微生物生长，杀死肿瘤组织可能携带的微生物，进而防止细菌、真菌等微生物感染，以确保肿瘤原代细胞分离培养成功；加入了Y‑27632，抑制组织细胞凋亡，可有效保护组织块结构完整性，提高组织活性，提高肿瘤原代细胞的获得率。技术研发人员：殷豪,孙誉,郑耿鸿,尹齐受保护的技术使用者：广州沃亘生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/17