治疗肌萎缩和强直性肌营养不良的组合物和方法与流程

背景技术：

1、通过rna诱导的基因沉默进行的基因抑制提供了几种控制水平：转录失活、小干扰rna(sirna)诱导的mrna降解和sirna诱导的转录弱化。在一些情况下，rna干扰(rnai)对多细胞分裂提供持久的影响。因此，rnai代表了可用于药物靶标验证、基因功能分析、途径分析和疾病治疗的可行方法。

技术实现思路

1、在某些实施方案中，本文公开了用于调节与肌萎缩相关的基因(或atrogene)的多核酸分子和药物组合物。在一些实施方案中，本文还描述了用本文公开的多核酸分子或多核酸分子缀合物治疗肌萎缩的方法。

2、在某些实施方案中，本文公开了式(i)的分子：a-x1-b-x2-c(式i)其中，a为结合部分；b为与atrogene的靶序列杂交的多核苷酸；c为聚合物；且x1和x2各自独立地选自键或非聚合连接体；其中所述多核苷酸包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分；并且其中a和c不连接至b的同一末端。在一些实施方案中，所述atrogene包括igf1-akt-foxo途径、糖皮质激素-gr途径、pgc1α-foxo途径、tnfα-nfκb途径或肌肉生长抑制素-actriib-smad2/3途径内差异调节的(例如，上调或下调的)基因。在一些实施方案中，所述atrogene编码e3连接酶。在一些实施方案中，所述atrogene编码叉头框转录因子。在一些实施方案中，所述atrogene包括atrogin-1基因(fbxctccaacatcaaggaagatggcatttctag gaco32)(seq id no:881)、murf1基因(trim63)、foxo1、foxo3或mstn。在一些实施方案中，所述atrogen包括dmpk。在一些实施方案中，b由与atrogene的靶序列杂交的多核苷酸组成。在一些实施方案中，c由聚合物组成。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包含2’-o-甲基、2’-o-甲氧基乙基(2’-o-moe)、2’-o-氨基丙基、2’-脱氧、2’-脱氧-2’-氟代、2’-o-氨基丙基(2’-o-ap)、2’-o-二甲基氨基乙基(2’-o-dmaoe)、2'-o-二甲基氨基丙基(2’-o-dmap)、2’-o-二甲基氨基乙氧基乙基(2’-o-dmaeoe)或2’-o-n-甲基乙酰胺基(2’-o-nma)修饰的核苷酸。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包括锁定核酸(lna)或乙烯核酸(ena)。在一些实施方案中，所述至少一个修饰的核苷酸间连接包括硫代磷酸酯连接或二硫代磷酸酯连接。在一些实施方案中，所述至少一个反向脱碱基部分在至少一个末端。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含与atrogene的靶序列杂交的单链。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含第一多核苷酸和与第一多核苷酸杂交的第二多核苷酸，以形成双链多核酸分子，其中第一多核苷酸或第二多核苷酸还与atrogene的靶序列杂交。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含至少一个修饰。在一些实施方案中，第一多核苷酸和第二多核苷酸是rna分子。在一些实施方案中，所述多核苷酸与atrogene的靶序列的至少8个连续碱基杂交。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含与seqid no:190-303和532-642所示的序列至少60％、70％、80％、85％、90％、95％或99％互补的序列。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约8个至约50个核苷酸。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约10个至约30个核苷酸。在一些实施方案中，第一多核苷酸包含与seq id no:304-417、418-531、643-753、754-864和28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含与seq id no:304-417、418-531、643-753、754-864和28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，x1和x2独立地为c1-c6烷基。在一些实施方案中，x1和x2独立地为同双官能连接体或异双官能连接体，任选地缀合至c1-c6烷基。在一些实施方案中，a为抗体或其结合片段。在一些实施方案中，a包括人源化抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单结构域抗体(sdab)或者骆驼科抗体或其结合片段。在一些实施方案中，a为抗运铁蛋白受体抗体或其结合片段。在一些实施方案中，c为聚乙二醇。在一些实施方案中，a-x1缀合至b的5’端，且x2-c缀合至b的3’端。在一些实施方案中，x2-c缀合至b的5’端，且a-x1缀合至b的3’端。在一些实施方案中，a直接缀合至x1。在一些实施方案中，c直接缀合至x2。在一些实施方案中，b直接缀合至x1和x2。在一些实施方案中，该分子进一步包含d。在一些实施方案中，d缀合至c或缀合至a。在一些实施方案中，d为内体溶解聚合物。

3、在某些实施方案中，本文公开了一种多核酸分子缀合物，其包含与多核苷酸缀合的结合部分，所述多核苷酸与atrogene的靶序列杂交；其中所述多核苷酸任选地包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分；并且其中所述多核酸分子缀合物介导针对所述atrogene的rna干扰，从而治疗受试者的肌萎缩。在一些实施方案中，所述atrogene包括igf1-akt-foxo途径、糖皮质激素-gr途径、pgc1α-foxo途径、tnfα-nfκb途径或肌肉生长抑制素-actriib-smad2/3途径内差异调节的(例如，上调或下调的)基因。在一些实施方案中，所述atrogene编码e3连接酶。在一些实施方案中，所述atrogene编码叉头框转录因子。在一些实施方案中，所述atrogene包含tgf-beta(转化生长因子-beta)蛋白质超家族的配体。在一些实施方案中，所述atrogene包括dmpk。在一些实施方案中，所述结合部分是抗体或其结合片段。在一些实施方案中，所述结合部分包括人源化抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单结构域抗体(sdab)或者骆驼科抗体或其结合片段。在一些实施方案中，所述结合部分是抗运铁蛋白受体抗体或其结合片段。在一些实施方案中，所述结合部分是胆固醇。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含与atrogene的靶序列杂交的单链。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含第一多核苷酸和与第一多核苷酸杂交的第二多核苷酸，以形成双链多核酸分子，其中第一多核苷酸或第二多核苷酸还与atrogene的靶序列杂交。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含至少一个修饰。在一些实施方案中，第一多核苷酸和第二多核苷酸是rna分子。在一些实施方案中，所述多核苷酸与atrogene的靶序列的至少8个连续碱基杂交。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含与seq id no:190-303和532-642所示的序列至少60％、70％、80％、85％、90％、95％或99％互补的序列。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约8个至约50个核苷酸。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约10个至约30个核苷酸。在一些实施方案中，第一多核苷酸包含与seq id no:304-417、418-531、643-753、754-864和28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含与seq id no:142-255、256-369、481-591、592-702和3407-14222所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，所述多核酸分子缀合物任选地包含将所述结合部分连接至所述多核苷酸的连接体。在一些实施方案中，所述多核酸分子缀合物进一步包含聚合物，所述聚合物任选地通过另外的连接体间接缀合至所述多核苷酸。在一些实施方案中，所述连接体和所述另外的连接体各自独立地是键或非聚合连接体。在一些实施方案中，所述多核酸分子缀合物包含式(i)的分子：a-x1-b-x2-c(式i)，其中，a为抗体或其结合片段；b为与atrogene的靶序列杂交的多核酸；c为聚合物；且x1和x2各自独立地选自键或非聚合连接体；其中所述多核苷酸包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分；并且其中a和c不连接至b的同一末端。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包含2’-o-甲基、2’-o-甲氧基乙基(2’-o-moe)、2’-o-氨基丙基、2’-脱氧、2’-脱氧-2’-氟代、2’-o-氨基丙基(2’-o-ap)、2’-o-二甲基氨基乙基(2’-o-dmaoe)、2'-o-二甲基氨基丙基(2’-o-dmap)、2’-o-二甲基氨基乙氧基乙基(2’-o-dmaeoe)或2’-o-n-甲基乙酰胺基(2’-o-nma)修饰的核苷酸。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包括锁定核酸(lna)或乙烯核酸(ena)。在一些实施方案中，所述至少一个修饰的核苷酸间连接包括硫代磷酸酯连接或二硫代磷酸酯连接。在一些实施方案中，所述至少一个反向脱碱基部分在至少一个末端。在一些实施方案中，所述肌萎缩是糖尿病相关的肌萎缩。在一些实施方案中，所述肌萎缩是癌症恶病质相关的肌萎缩。在一些实施方案中，所述肌萎缩与胰岛素缺乏相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性肾功能衰竭相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与充血性心力衰竭相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性呼吸系统疾病相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性感染相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与禁食相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与去神经支配相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与少肌症、糖皮质激素治疗、中风和/或心脏病发作相关。在一些情况下，1型强直性肌营养不良(dm1)与dmpk基因3’utr中的ctg重复序列的扩展相关。

4、在某些实施方案中，本文公开了一种药物组合物，其包含：以上描述的分子或以上描述的多核酸分子缀合物；和药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制为纳米颗粒制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于肠胃外、口服、鼻内、经颊、直肠或经皮给药。

5、在某些实施方案中，本文公开了一种治疗有需要的受试者的肌萎缩或强直性肌营养不良的方法，其包括：向所述受试者施用治疗有效量的多核酸分子缀合物，其包含与多核苷酸缀合的结合部分，所述多核苷酸与atrogene的靶序列杂交；其中所述多核苷酸任选地包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分；并且其中所述多核酸分子缀合物介导针对所述atrogene的rna干扰，从而治疗所述受试者的肌萎缩或强直性肌营养不良。在一些实施方案中，所述肌萎缩是糖尿病相关的肌萎缩。在一些实施方案中，所述肌萎缩是癌症恶病质相关的肌萎缩。在一些实施方案中，所述肌萎缩与胰岛素缺乏相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性肾功能衰竭相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与充血性心力衰竭相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性呼吸系统疾病相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与慢性感染相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与禁食相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与去神经支配相关。在一些实施方案中，所述肌萎缩与少肌症相关。在一些实施方案中，所述强直性肌营养不良是dm1。在一些实施方案中，所述atrogene包括igf1-akt-foxo途径、糖皮质激素-gr途径、pgc1α-foxo途径、tnfα-nfκb途径或肌肉生长抑制素-actriib-smad2/3途径内差异调节的(例如，上调或下调的)基因。在一些实施方案中，所述atrogene编码e3连接酶。在一些实施方案中，所述atrogene编码叉头框转录因子。在一些实施方案中，所述atrogene包括atrogin-1基因(fbxo32)、murf1基因(trim63)、foxo1、foxo3或mstn。在一些实施方案中，所述atrogen包括dmpk。在一些实施方案中，所述多核酸分子缀合物包含式(i)的分子：a-x1-b-x2-c(式i)，其中，a为结合部分；b为与atrogene的靶序列杂交的多核苷酸；c为聚合物；且x1和x2各自独立地选自键或非聚合连接体；其中所述多核苷酸包含至少一个2’修饰的核苷酸、至少一个修饰的核苷酸间连接或至少一个反向脱碱基部分；并且其中a和c不连接至b的同一末端。在一些实施方案中，b由与atrogene的靶序列杂交的多核苷酸组成。在一些实施方案中，c由聚合物组成。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包含2’-o-甲基、2’-o-甲氧基乙基(2’-o-moe)、2’-o-氨基丙基、2’-脱氧、2’-脱氧-2’-氟代、2’-o-氨基丙基(2’-o-ap)、2’-o-二甲基氨基乙基(2’-o-dmaoe)、2'-o-二甲基氨基丙基(2’-o-dmap)、2’-o-二甲基氨基乙氧基乙基(2’-o-dmaeoe)或2’-o-n-甲基乙酰胺基(2’-o-nma)修饰的核苷酸。在一些实施方案中，所述至少一个2’修饰的核苷酸包括锁定核酸(lna)或乙烯核酸(ena)。在一些实施方案中，所述至少一个修饰的核苷酸间连接包括硫代磷酸酯连接或二硫代磷酸酯连接。在一些实施方案中，所述至少一个反向脱碱基部分在至少一个末端。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含与atrogene的靶序列杂交的单链。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含第一多核苷酸和与第一多核苷酸杂交的第二多核苷酸，以形成双链多核酸分子，其中第一多核苷酸或第二多核苷酸还与atrogene的靶序列杂交。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含至少一个修饰。在一些实施方案中，第一多核苷酸和第二多核苷酸是rna分子。在一些实施方案中，所述多核苷酸与atrogene的靶序列的至少8个连续碱基杂交。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含与seq id no:190-303和532-642所示的序列至少60％、70％、80％、85％、90％、95％或99％互补的序列。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约8个至约50个核苷酸。在一些实施方案中，所述多核苷酸的长度为约10个至约30个核苷酸。在一些实施方案中，第一多核苷酸包含与seq id no:304-417、418-531、643-753、754-864和28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含与seq id no:304-417、418-531、643-753、754-864和28-189所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，x1和x2独立地为c1-c6烷基。在一些实施方案中，x1和x2独立地为同双官能连接体或异双官能连接体，任选地缀合至c1-c6烷基。在一些实施方案中，a为抗体或其结合片段。在一些实施方案中，a包括人源化抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单结构域抗体(sdab)或者骆驼科抗体或其结合片段。在一些实施方案中，a为抗运铁蛋白受体抗体或其结合片段。在一些实施方案中，c为聚乙二醇。在一些实施方案中，a-x1缀合至b的5’端，且x2-c缀合至b的3’端。在一些实施方案中，x2-c缀合至b的5’端，且a-x1缀合至b的3’端。在一些实施方案中，a直接缀合至x1。在一些实施方案中，c直接缀合至x2。在一些实施方案中，b直接缀合至x1和x2。在一些实施方案中，该方法进一步包含d。在一些实施方案中，d缀合至c或缀合至a。在一些实施方案中，d为内体溶解聚合物。在一些实施方案中，所述多核酸分子缀合物被配制用于肠胃外、口服、鼻内、经颊、直肠或经皮给药。在一些实施方案中，所述受试者是人。

6、在某些实施方案中，本文公开了包含以上描述的分子或以上描述的多核酸分子缀合物的试剂盒。