用于检测生物样本中的错误折叠蛋白质的装置和方法与流程

本申请涉及生物检测技术，更具体地，涉及一种用于检测生物样本中错误折叠蛋白质的装置和方法。

背景技术：

1、子痫前期是一种妊娠过程相关的疾病，目前对于其发生机制知之甚少，通常指孕前血压正常的孕妇在妊娠20周以后出现高血压、蛋白质尿，同时伴随头痛、眼花、恶心、呕吐、上腹不适等症状。

2、目前，临床上针对子痫前期的诊断主要是依赖其临床特征如高血压以及蛋白质尿进行判定。科研工作者一直致力于研究用于子痫前期诊断的新的标志物及新的方法。美国耶鲁大学的科研人员于孕妇尿液中发现一些错误折叠的蛋白质分子与子痫前期的发生存在明显的相关性，这些错误折叠的蛋白质分子可与刚果红染料选择性的结合，而刚果红染料也可与纤维素结合，并由此开发了一种基于斑点扩散的试验方法用于检测孕妇尿液中的错误折叠蛋白质以用于子痫前期的诊断或预测。

3、然而，现有技术采用的斑点扩散技术不适合处理弱阳性样本，难以有效区分弱阳性样本与阴性样本，容易引起误判。因此，有必要提供一种改进的检测方法和装置。另外，在本领域中对于能够进行定量和/或具有改进的灵敏度、特异度和准确度的检测方法和装置也存在需求。

技术实现思路

1、本公开满足了上述需求中的至少一个。本申请的一个目的在于提供一种能够有效检测错误折叠蛋白质的装置和方法。

2、在本申请的一个方面，提供了一种用于检测生物样本中的错误折叠蛋白或其聚集体的方法，其包括：(a)提供生物样本；(b)使所述生物样本与检测试剂混合，所述检测试剂能够与所述错误折叠蛋白或其聚集体结合；(c)使与所述检测试剂混合的所述生物样本接触并通过分离基质，所述分离基质被构造以吸附未与所述错误折叠蛋白或其聚集体结合的检测试剂并允许与所述错误折叠蛋白或其聚集体结合的检测试剂通过；(d)以游离液体状态收集从所述分离基质通过的生物样本；以及(e)检测所收集的呈游离液体状态的生物样本中所述检测试剂的存在，其中所述检测试剂的存在指示所述生物样本中存在所述错误折叠蛋白或其聚集体。在一个实施方案中，在步骤(d)中，在流体收集腔中收集所述生物样本，并且所收集的生物样本在所述流体收集腔中呈游离的液体状态。在进一步的实施方案中，所收集的所述生物样本在所述流体收集腔中能够自由流动。在仍进一步的实施方案中，所述流体收集腔中能够自由流动的液体体积为至少约50μl、至少约100μl、至少约500μl、至少约50μl、至少约1ml、至少约3ml、或约3ml至约5ml。

3、在本申请的另一个方面，提供了一种用于检测生物样本中的错误折叠蛋白或其聚集体的装置，该装置包括：壳体，所述壳体限定流体分离腔与流体收集腔；其中，所述流体分离腔用于接收与检测试剂混合的所述生物样本，其中所述检测试剂能够与所述生物样本中的所述错误折叠蛋白或其聚集体结合，所述流体分离腔还用于从所述与检测试剂混合的所述生物样本中分离并保留未与所述生物样本中的所述错误折叠蛋白或其聚集体结合的所述检测试剂，并允许与所述生物样本中的所述错误折叠蛋白或其聚集体结合的所述检测试剂流过；以及其中，所述流体收集腔用于收集流过所述流体分离腔的所述生物样本。

4、在本申请的另一方面，还提供了一种试剂盒，其包括前述方面的用于检测生物样本中的错误折叠蛋白质的装置。

5、在本申请的又一方面，提供了本公开的装置在制备用于诊断或预测以错误折叠蛋白为特征的疾病的试剂盒中的用途。

6、在本申请的又一方面，提供了一种预测罹患以错误折叠蛋白为特征的疾病的风险的方法。

7、在本申请的又一方面，提供了(1)能够与错误折叠蛋白质特异性或其聚集体结合的检测试剂与(2)能够吸附游离状态的所述检测试剂的吸附介质的组合在制备用于诊断或预测以错误折叠蛋白为特征的疾病的装置或试剂盒中的用途。

8、以上为本申请的概述，可能有简化、概括和省略细节的情况，因此本领域的技术人员应该认识到，该部分仅是示例说明性的，而不旨在以任何方式限定本申请范围。本概述部分既非旨在确定所要求保护主题的关键特征或必要特征，也非旨在用作为确定所要求保护主题的范围的辅助手段。

技术特征：

1.一种用于检测生物样本中的错误折叠蛋白或其聚集体的方法，其包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(d)中，在流体收集腔中收集所述生物样本，并且所收集的生物样本在所述流体收集腔中呈游离的液体状态。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述检测试剂是染料，例如可见光染料或荧光染料，例如偶氮染料或其类似物(例如刚果红或伊文思蓝)、苯并噻唑类染料或其类似物(例如硫黄素t和硫黄素s)、苋菜红、亮黑或尼罗红。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述分离基质包括选自下组的一种或多种的材料：棉或棉纱布；蚕丝；纤维素，例如硝化纤维素、微晶纤维素、乙酸纤维素、或木屑；聚合物类，例如聚酯、聚乙烯、聚砜、聚乙烯醇、聚乙二醇(例如peg2000、peg3000、peg4000、peg5000或peg6000)、或聚丙烯酰胺；玻璃纤维；硅胶、明胶或葡聚糖凝胶；干蛋白或蛋白干粉，例如蛋清蛋白干粉；无机矿土类，例如沸石、陶土、高岭土、羧基磷灰石、蒙脱土；钙盐类，例如氯化钙、碳酸钙或磷酸钙；活性炭；或活性氧化铝。

5.一种用于检测生物样本中的错误折叠蛋白或其聚集体的装置，其特征在于，所述装置包括：

6.根据权利要求5所述的装置，其中所述检测试剂是是染料，例如可见光染料或荧光染料，例如偶氮染料或其类似物(例如刚果红或伊文思蓝)、苯并噻唑类染料或其类似物(例如硫黄素t和硫黄素s)、苋菜红、亮黑或尼罗红。

7.根据权利要求5-6中任一项所述的装置，其中所述流体收集腔被构造成以游离液体状态收集从所述流体分离腔流过的生物样本。

8.根据权利要求5-7中任一项所述的装置，其中所述装置还包括隔离层，其设置在所述流体分离腔和所述流体收集腔之间，并分隔所述流体分离腔和所述流体收集腔。

9.根据权利要求5-8中任一项所述的装置，其中所述壳体还限定流体接收腔，所述流体接收腔用于接收所述生物样本。

10.根据权利要求5-9中任一项所述的装置在制备用于诊断或预测以错误折叠蛋白为特征的疾病的试剂盒中的用途。

技术总结一种用于检测生物样本中的错误折叠蛋白质的装置和方法。方法包括(a)提供生物样本；(b)使生物样本与检测试剂混合，检测试剂能够与错误折叠蛋白结合；(c)使与检测试剂混合的生物样本接触并通过分离基质，分离基质被构造以吸附未与错误折叠蛋白结合的检测试剂并允许与错误折叠蛋白结合的检测试剂通过；(d)以游离液体状态收集从分离基质通过的生物样本；以及(e)检测所收集的呈游离液体状态的生物样本中检测试剂的存在，其中检测试剂的存在指示生物样本中存在错误折叠蛋白。装置和方法可用诊断和预测以错误折叠蛋白为特征的疾病，例如，可用于诊断孕妇是否患有子痫前期或患有子痫前期的风险。技术研发人员：李兴民受保护的技术使用者：浙江数问生物技术有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/10