一种工厂化食用菌菌糠再利用适合菇种快速鉴定的方法及应用

本发明属于菌类栽培，具体涉及一种工厂化食用菌菌糠再利用适合菇种快速鉴定的方法及应用。

背景技术：

1、我国食用菌产值在农业中仅次于粮、油、果、菜，居第5位。据中国食用菌协会统计，2022年我国食用菌产量达4200万吨，食用菌产业成为我国农业经济的重要产业之一。随着产业的发展与升级，食用菌工厂化栽培在我国得到了较快发展，工厂化、规模化栽培是今后我国食用菌发展的趋势。但食用菌产业快速发展的同时，面临着亟待解决的可持续性问题。一、生产原料短缺。由于木屑原料极为有限，棉籽壳价格逐年提升，玉米芯、甘蔗糠当地来源紧缺，致使栽培原料生产成本急剧升高。解决原料短缺的问题根本出路在于原料的本地化和菌糠的再利用。二、菌糠造成污染环境。福建省每年仅木生食用菌产生的菌糠达200多万吨，部分作为燃料、有机肥，而大部分随意丢弃，浪费了资源，又污染了环境。工厂化栽培企业也因菌糠处理增加生产成本。

2、食用菌菌糠含有大量菌丝体有机质、蛋白质及其他营养物质，对其进行有效利用，可带来巨大的经济效益及社会效益。另外一方面，菌糠成分复杂，且不同食用菌、不同配方所产生的菌糠成分有很大差异。迄今为止，尽管食用菌菌糠作为食用菌栽培原料的再利用有大量报道，但大都依据经验或完全是一种盲目性。因此，为了更科学和针对性的利用食用菌菌糠，十分有必要对不同食用菌菌糠再利用适合菇种进行快速鉴定。

3、传统的菌糖再利用适合菇种的鉴定方法为：选取工厂化栽培产生的食用菌糠，按一定比例添加至配方，根据所栽培食用菌栽培生产工艺流程进行出菇实验，根据菌丝生长情况、子实体的农艺性状、产量判断工厂化食用菌菌糠是否可用于栽培该食用菌。然而，栽培出菇试验方法存在实验周期长、工作量大、花费高等缺点。

4、本发明采用mtt法测定固体培养料中菌丝的琥珀酸脱氢酶(简称sdh)，进而计算菌丝生物量，通过比较含有工厂化栽培食用菌菌糠的固体基质中食用菌菌丝的生物量，快速判断工厂化栽培食用菌菌糠是否可再利用于栽培该食用菌。该方法可在实验室中进行，无需进行栽培试验，具有方便快捷、稳定、重复性好、准确性高等优点。

技术实现思路

1、为解决传统的菌糠再利用适合菇种鉴定方法的实验周期长、工作量大、花费高等问题，本发明的目的在于提供一种工厂化食用菌菌糠再利用适合菇种快速鉴定的方法及应用。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种工厂化食用菌菌糠再利用适合菇种快速鉴定的方法，采用mtt比色法测定待测菇种菌丝琥珀酸脱氢酶活性，建立标准曲线；利用工厂化食用菌菌糠作为原料制作培养料，接种待测食用菌菌种，进行菌丝培养；对含有菌丝的培养料进行取样，采用mtt比法测定所取样品中菌丝琥珀酸脱氢酶活性，带入标准曲线中计算菌丝每日生长量，进而快速判断工厂化食用菌菌糠是否可再利用于栽培待测菇种；

4、其中，所述待测菇种为秀珍菇。

5、其中，所述工厂化食用菌菌糠为工厂化杏鲍菇菌糠、工厂化金针菇菌糠、工厂化真姬菇菌糠中的一种或多种。

6、上述一种工厂化食用菌菌糠再利用适合菇种快速鉴定的方法，包括以下步骤：

7、s1：标准曲线建立：

8、s1-1：将待测菇种菌饼接种于pdb液体培养基，25℃、150r/min培养7d，得到含有菌丝的培养液；收集所得培养液中的菌丝，用pdb液体培养基冲洗，冲洗后再收集菌丝，在超净台中吹干表面水分；

9、s1-2：分别称取0.02g、0.03g、0.04g、0.05g、0.06g待测菇种菌丝，加入9.4ml pdb液体培养基和0.6ml 5mg/ml的mtt溶液，混匀后置20℃水浴避光培养12h，离心，弃上清，向沉淀中加入9ml dmso，混匀后置25℃水浴浸提2h，再离心，弃沉淀，收集上清测定570nm波长处吸光度，以不同重量待测菇种菌丝与对应的吸光度绘制标准曲线；

10、s2：菌丝培养：

11、s2-1：利用工厂化食用菌菌糠作为原料制作培养料；

12、s2-2：将培养料用玻璃试管进行装料，121℃高压灭菌，冷却至常温后用石灰粉调节ph至6.0，接入待测菇种菌饼，竖直放置于25℃恒温生化培养箱中培养23～25d，得到含有菌丝的培养料并计算试管菌丝每天生长长度；

13、s3：菌丝生物量计算：

14、对含有菌丝的培养料清理料面剔除老化菌丝后，取样1g，加入9.4ml pdb液体培养基和0.6ml 5mg/ml的mtt溶液，混匀后置20℃水浴避光培养12h，离心，弃上清，向沉淀中加入9mldmso，混匀后置25℃水浴浸提2h，再离心，弃沉淀，收集上清测定570nm波长处吸光度，代入标准曲线方程计算所取样品中菌丝重量，再计算菌丝每日生长量，根据菌丝每日生长量量的数值大小判断工厂化食用菌菌糠是否可再利用于栽培待测菇种；

15、其中，所述菌丝每日生长量量的计算公式为

16、式中：bs为菌丝每日生长量，单位为g/d；wt为试管培养料总重量，单位为g；vt为试管培养料总体积，单位为mm3；lδ为试管菌丝每天生长长度，单位为mm/d；π为圆周率3.14；r为试管半径，单位为mm；ws为测定时采样重量，单位为g；b为采样样品中菌丝重量，单位为g。

17、上述一种方法在评估工厂化食用菌菌糠再利用栽培食用菌的适用性中的应用，所述工厂化食用菌菌糠为工厂化杏鲍菇菌糠、工厂化金针菇菌糠、工厂化真姬菇菌糠中的一种或多种。

18、上述一种方法在筛选秀珍菇培养料配方中的应用。

19、一种由上述方法筛选得到的秀珍菇培养料，所述秀珍菇培养料的配方为：按照重量份称量工厂化杏鲍菇菌糠60份、棉籽壳10份、杂木屑10份、麸皮18份、石灰粉1份、轻质碳酸钙粉末1份，混匀，调节含水量至65％。

20、本发明的显著优点在于：

21、本发明采用mtt法测定固态培养料中的菌丝，快速判断工厂化食用菌再利用栽培适合的菇种，可在实验室进行，具有方便快捷、稳定、重复性好、准确性高等优点。本发明具有重要的应用推广价值。

技术特征：

1.一种工厂化食用菌菌糠再利用适合菇种快速鉴定的方法，其特征在于：采用mtt比色法测定待测菇种菌丝琥珀酸脱氢酶活性，建立标准曲线；利用工厂化食用菌菌糠作为原料制作培养料，接种待测食用菌菌种，进行菌丝培养；对含有菌丝的培养料进行取样，采用mtt比法测定所取样品中菌丝琥珀酸脱氢酶活性，带入标准曲线中计算所取样品中菌丝重量，再计算菌丝每日生长量，进而快速判断工厂化食用菌菌糠是否可再利用于栽培待测菇种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述待测菇种为秀珍菇。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述工厂化食用菌菌糠为工厂化杏鲍菇菌糠、工厂化金针菇菌糠、工厂化真姬菇菌糠中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述菌丝每日生长量的计算公式为

6.如权利要求1~5任一项所述方法在评估工厂化食用菌菌糠再利用栽培食用菌的适用性中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述工厂化食用菌菌糠为工厂化杏鲍菇菌糠、工厂化金针菇菌糠、工厂化真姬菇菌糠中的一种或多种。

8.如权利要求1~5任一项所述方法在筛选秀珍菇培养料配方中的应用。

9.一种由权利要求1~5任一项所述方法筛选得到的秀珍菇培养料，其特征在于：所述秀珍菇培养料的配方为：按照重量份称量工厂化杏鲍菇菌糠60份、棉籽壳10份、杂木屑10份、麸皮18份、石灰粉1份、轻质碳酸钙粉末1份，混匀，调节含水量至65％。

技术总结本发明属于菌类栽培技术领域，具体涉及一种工厂化食用菌菌糠再利用适合菇种快速鉴定的方法及应用。所述方法包括以下步骤：采用MTT比色法测定待测菇种菌丝琥珀酸脱氢酶活性，建立标准曲线；利用工厂化食用菌菌糠作为原料制作培养料，接种待测菇种，进行菌丝培养；对含有菌丝的培养料进行取样，采用MTT比法测定所取样品中菌丝琥珀酸脱氢酶活性，带入标准曲线中计算所取样品中菌丝重量，再计算菌丝每日生长量，进而快速判断工厂化食用菌菌糠是否可再利用于栽培所述待测菇种。所述方法可在实验室中进行，无需进行栽培试验，具有方便快捷、稳定、重复性好、准确性高等优点。技术研发人员：张维瑞,刘盛荣,黄千慧,周修赵,陈爱靖,苏贵平,阮俊峰受保护的技术使用者：宁德师范学院技术研发日：技术公布日：2024/10/17