一种白及苷及其提取方法

本发明涉及中药材提取，尤其涉及一种白及苷及其提取方法。

背景技术：

1、白及药材为兰科植物白及(bletilla striata(thunb.)rchb.f.)的干燥块茎，又名连及草、甘根、白给，是我国名贵的中草药。它主要分布于温带、亚热带及热带地区，在我国主要于长江流域，主产于贵州、四川、湖北、安徽、甘肃、陕西等地，是我国濒危二级保护植物。白及主要具有收敛止血、消肿生肌的功效，可用于治疗咯血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒和皮肤皲裂等疾病。现代药理研究也表明，白及具有抗菌、抗炎、抗肺部疾病作用、抗氧化、抗溃疡、促进伤口愈合、抗肿瘤、止血、造血等药理作用。化学成分研究表明白及苷是白及中重要的化学成分，具有较高的开发价值和医学应用研究前景。

2、目前，在针对中药材白及的药物研究领域，少有对白及苷单体成分(化学结构如图1所示)进行系统性分离制备的方法。李霄等人(李霄，李泽琳，艾萍，等.1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法：cn202110784107.x[p].2010-10-20.)将白及块茎粉碎后用乙醇回流提取，经过大孔吸附树脂柱富集，硅胶柱层析，sephadex lh-20型凝胶柱层析，半制备型反向硅胶柱层析得到白及苷对照品，该方法适用于白及苷对照品的制备，但是操作较复杂，分离成本较高；胡江苗等人(胡江苗，周俊，李金玉，等.白及属植物中militarine部位及单体的制备方法及其应用：cn201711364335.1[p].2018-04-20.)将白及新鲜或干燥药材粉碎后，用不同浓度的乙醇提取，蒸去乙醇溶液，浸膏通过萃取或者经过大孔树脂柱后、再通过sephadex lh-20型凝胶柱分离得白及苷单体，但该方法使用的sephadex lh-20型凝胶柱价格较昂贵。

3、因此，提供一种成本较低，操作简单的白及苷提取方法，对于中药材白及的现代化发展具有较高的实用价值。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供成本低、操作简单的白及苷提取方法，该方法可以提高白及苷的提取率，且提取得到的白及苷纯度高。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种白及苷的提取方法，包括如下步骤：

4、(1)将白及块茎粉末和甲醇溶液混合，回流提取2～4次；将提取液减压浓缩得到甲醇浸膏；

5、(2)将甲醇浸膏和水混合，得到混合物1；将混合物1依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到萃取液；将萃取液减压浓缩得到正丁醇浸膏；

6、(3)将正丁醇浸膏和甲醇、硅胶混合，干燥，得到混合物2；将混合物2经柱层析，使用洗脱剂1进行梯度洗脱，分别收集洗脱液，再使用洗脱剂2进行梯度洗脱，分别收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩得到浸膏；将含有白及苷的部分合并，得到粗品a；

7、(4)将粗品a和甲醇、硅胶混合，干燥，得到混合物3；将混合物3经柱层析，使用洗脱剂3进行洗脱，收集洗脱液，再使用洗脱剂4进行梯度洗脱，分别收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩得到浸膏；将含有白及苷的部分合并，得到粗品b；

8、(5)将粗品b和甲醇、c18混合，干燥，得到混合物4；将混合物4经柱层析，使用洗脱剂5进行梯度洗脱，分别收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩得到浸膏；将含有白及苷的部分合并，得到粗品c；

9、(6)将粗品c和甲醇、硅胶混合，干燥，得到混合物5；将混合物5经柱层析，使用洗脱剂6进行洗脱，收集洗脱液，再使用洗脱剂7进行梯度洗脱，分别收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩得到浸膏；将含有白及苷的部分合并，得到白及苷。

10、作为优选，步骤(1)中，所述白及块茎粉末和甲醇溶液混合的质量比为1:5～15；

11、所述甲醇溶液的初始浓度为85～100vt％；

12、每次回流提取的时间为2～4h。

13、作为优选，步骤(2)中，所述甲醇浸膏和水混合的体积比为1:0.5～1.5；

14、所述石油醚萃取的次数为1～3次；所述乙酸乙酯萃取的次数为3～4次；所述正丁醇萃取的次数为3～5次。

15、作为优选，步骤(3)中，所述正丁醇浸膏和甲醇混合的质量比为1:2～2.7；所述正丁醇浸膏和硅胶混合的质量比为1:1.5～2；

16、所述洗脱剂1为石油醚-乙酸乙酯；

17、洗脱时石油醚和乙酸乙酯的体积比为1:0、1:4、0:1；

18、所述洗脱剂2为二氯甲烷-甲醇；

19、洗脱时二氯甲烷和甲醇的体积比为10:1、5:1、5:2。

20、作为优选，步骤(4)中，所述粗品a和甲醇混合的质量比为1:1.4～2；

21、所述粗品a和硅胶混合的质量比为1:1.5～2；

22、所述洗脱剂3为石油醚；

23、所述洗脱剂4为二氯甲烷-甲醇；

24、利用二氯甲烷-甲醇洗脱时，二氯甲烷和甲醇的体积比为15:1、10:1、7.5:1、5:1、5:2。

25、作为优选，步骤(5)中，所述粗品b和甲醇混合的质量比为1:1～1.4；所述粗品b和c18混合的质量比为1:1.5～2；

26、所述洗脱剂5为甲醇-水；

27、洗脱时甲醇和水的体积比为10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、80:20、100:0。

28、作为优选，步骤(6)中，所述粗品c和甲醇混合的质量比为1:0.8～1.2；所述粗品c和硅胶混合的质量比为1:1.5～2；

29、所述洗脱剂6为石油醚；

30、所述洗脱剂7为二氯甲烷-甲醇；

31、利用二氯甲烷-甲醇洗脱时，二氯甲烷和甲醇的体积比为7.5:1、5:1、5:2。

32、本发明还提供了所述的提取方法提取得到的白及苷，所述白及苷的纯度≥95％。

33、本发明的有益效果：

34、本发明提供了一种从中药白及块茎中提取白及苷的方法，该方法首先依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，然后通过中压硅胶柱色谱，用白及苷标准品结合tlc检测方法迅速找到白及苷部位，高效富集白及苷部位，再通过小孔吸附树脂柱、硅胶柱分离得到白及苷单体。本发明的提取方法可控性和重现性好，成本较低，操作简单，适合实验研究及工厂对中药白及中白及苷的提取。

技术特征：

1.一种白及苷的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，所述白及块茎粉末和甲醇溶液混合的质量比为1:5～15；

3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，所述甲醇浸膏和水混合的体积比为1:0.5～1.5；

4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中，所述正丁醇浸膏和甲醇混合的质量比为1:2～2.7；所述正丁醇浸膏和硅胶混合的质量比为1:1.5～2；

5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，所述粗品a和甲醇混合的质量比为1:1.4～2；

6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，步骤(5)中，所述粗品b和甲醇混合的质量比为1:1～1.4；所述粗品b和c18混合的质量比为1:1.5～2；

7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，步骤(6)中，所述粗品c和甲醇混合的质量比为1:0.8～1.2；所述粗品c和硅胶混合的质量比为1:1.5～2；

8.权利要求1～7任意一项所述的提取方法提取得到的白及苷，其特征在于，所述白及苷的纯度≥95％。

技术总结本发明涉及中药材提取技术领域，尤其涉及一种白及苷及其提取方法。本发明的白及苷的提取方法，包括如下步骤：将白及块茎粉末和甲醇溶液混合、回流提取、浓缩得到甲醇浸膏；将甲醇浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取、浓缩得到正丁醇浸膏；将正丁醇浸膏分别经过多次层析、洗脱、合并含有白及苷的部分，得到白及苷。本发明的提取方法可控性和重现性好，成本较低，操作简单，适合实验研究及工厂对中药白及中白及苷的提取。技术研发人员：徐德林,甘义吉,肖世基,赵娟娟,郭尚佳,吴依林,黄朗,杨宁,张禾受保护的技术使用者：遵义医科大学技术研发日：技术公布日：2024/11/4