具有靶向M细胞功能的PEDVFJ-FQ2014株特异性引物及其在酵母表达中的应用

本发明属于兽医，具体涉及具有靶向m细胞功能的pedv fj-fq2014株特异性引物及其在酵母表达中的应用。

背景技术：

1、猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea，ped)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，pedv)引起的一种具有急性传染性的肠道疾病，临床症状和猪传染性胃肠炎非常相似，主要表现为呕吐、急性腹泻、脱水等。该病可以感染所有年龄段的猪，尤其对7日龄以内的哺乳仔猪感染非常严重，一旦发病，病死率高达90％-100％。

2、pedv，特别是变异的pedv毒株严重威胁我国养猪产业的快速发展，该病毒进入机体后，猪小肠绒毛肠细胞会分泌出大量的氨肽酶n(apn)，这是一种150-kda糖基化的跨膜蛋白，被认定为是pedv的细胞受体。同时pedv的细胞溶解性会引起小肠细胞发生急性坏死，并伴有明显的绒毛萎缩。因此，研究具有针对变异性毒株可以引起保护性的体液和黏膜免疫反应的pedv黏膜疫苗具有十分重要的意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供具有靶向m细胞功能的pedv fj-fq2014株特异性引物及其在酵母表达中的应用。

2、为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、具有靶向m细胞功能的pedv fj-fq2014株特异性引物，所述引物序列如下：

4、ppiczαa-s1+m-col f：ttcgaaaggaacctcctgagc

5、ppiczαa-s1+m-col r：cgtctagattatggtaatggtgaacgagctggtaattgatgaaatgagactaaatgaagcac

6、所述引物扩增片段大小为1541bp。

7、所述的具有靶向m细胞功能的pedv fj-fq2014株特异性引物可以在酵母中表达具有免疫活性和靶向性的pedv的s1基因和m基因串联重组蛋白。

8、pedv s1基因和m基因串联重组质粒的构建方法：在pedv变异毒株fj-fq2014的基础上，设计涵盖s1基因主要抗原位点和m基因的特异性引物，并在引物中设计针对m细胞靶向肽col，以ppiczαa为表达载体，构建s1基因和m基因的串联重组质粒ppiczαa-s1+m-col。

9、本发明在前期研究并证实为pedv变异毒株fj-fq2014的基础上，设计涵盖s1基因主要抗原位点和m基因的的特异性引物，并在引物中设计了针对m细胞靶向肽(col)，构建表达载体，并在酵母中进行诱导表达，表达出具免疫活性和靶向性的pedv的s1+m重组蛋白。动物实验表明，表明口服重组酵母菌ppiczαa-s1+m-col能诱导小鼠产生较好的免疫抗体，重组ppiczαa-s1+m-col能较好地靶向在肠道粘膜上。

10、本发明研究结果可以促进今后进一步研发口服pedv靶向性基因工程疫苗，具有重要的现实意义。

技术特征：

1.具有靶向m细胞功能的pedv fj-fq2014株特异性引物，其特征在于，所述引物序列如下：

2.根据权利要求1所述的具有靶向m细胞功能的pedv fj-fq2014株特异性引物，其特征在于，所述引物扩增片段大小为1541 bp。

3.如权利要求1或2所述的具有靶向m细胞功能的pedv fj-fq2014株特异性引物在酵母表达中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的pedv fj-fq2014株特异性引物在酵母中表达具有免疫活性和靶向性的pedv的s1基因和m基因串联重组蛋白。

5. pedv s1基因和m基因串联重组质粒的构建方法，其特征在于，在pedv变异毒株fj-fq2014的基础上，设计涵盖s1基因主要抗原位点和m基因的特异性引物，并在引物中设计针对m 细胞靶向肽col，以ppiczαa为表达载体，构建s1基因和m基因的串联重组质粒ppiczαa-s1+m-col。

技术总结本发明公开了具有靶向M细胞功能的PEDV FJ‑FQ2014株特异性引物及其在酵母表达中的应用，属于兽医技术领域。本发明在前期研究并证实为PEDV变异毒株FJ‑FQ2014的基础上，设计涵盖S1基因主要抗原位点和M基因的并含有M细胞靶向肽Col的特异性引物，构建表达载体，并在酵母中进行诱导表达，表达出具免疫活性和靶向性的PEDV的S1+M重组蛋白。本发明可以促进今后进一步研发口服PEDV靶向性基因工程疫苗，具有重要的现实意义。技术研发人员：王隆柏,周伦江,王全溪,陈秋勇,吴学敏,侯恩慧,陈如敬,连春红受保护的技术使用者：福建省农业科学院畜牧兽医研究所技术研发日：技术公布日：2024/11/4