α-淀粉酶突变体的制作方法

本发明涉及一种α-淀粉酶的突变体。

背景技术：

1、α-淀粉酶已在淀粉产业、酿造产业、纤维产业、医药品产业和食品产业等广泛的产业领域中利用，并且已知其与清洁剂的配合适应性，作为除去淀粉质污渍的成分，配合在自动餐具清洁机用的餐具清洁剂或衣物用洗剂等中。

2、作为清洁剂用有用的α-淀粉酶，除了来自芽孢杆菌(bacillus sp.)ksm-1378(ferm bp-3048)株的α-淀粉酶ap1378(专利文献1)、作为来自地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶的termamyl或duramyl(注册商标)以外，还已知有来自芽孢杆菌(bacillus sp.)dsm12649株的α-淀粉酶aa560(专利文献2)、来自芽孢杆菌(bacillus sp.)sp722株的α-淀粉酶sp722(专利文献3的序列号4)、来自噬纤维菌属的α-淀粉酶cspamy2(专利文献4)等。另外，对于这些α-淀粉酶，以面向特定用途而改善功能的方式进行改变，报告了例如洗剂中的稳定性提高了的突变体等(专利文献5)。

3、近年来，从保护环境和降低清洁成本的观点考虑，降低餐具清洁或洗涤清洁、特别是洗衣店中的洗涤清洁时的温度是重要的，还希望缩短清洁时间。然而，含有淀粉酶的大部分酶的最佳温度在低温清洁中高于通常设定的温度，因此完全除去大量的淀粉质污渍是困难的。因此，找到即使在低温下也保持清洁性能和淀粉分解活性并且污渍除去效果高的α-淀粉酶是重要的。

4、另外，近年来，已知低ph环境下的清洁对清洁品温和，与通常使用的碱性组合物相比没有那么强力，因此具有长期保持玻璃、带花纹的餐具等清洁品崭新的外观的效果，并且能够减少布料的恶臭，有助于具有捕捉布料上的污渍的倾向的钙皂的释放，提高ph反应性对污垢的性能，以及进一步对布料的触感带来益处等。

5、另外，在餐具清洁剂中，除了对作为主要清洁对象的餐具类进行清洁以外，也用于不锈钢制或树脂制的水槽周围的清洁，因此有时以高浓度配合对水垢污渍发挥清洁力的柠檬酸等螯合剂。

6、因此，可以说酸性和/或螯合剂配合洗剂在清洁时具有各种优势，认为通过在这样的洗剂中添加α-淀粉酶等酶，能够期待清洁性进一步提高。

7、在专利文献6中记载了在酸性条件下的淀粉液化工艺中稳定的淀粉酶、或在螯合剂配合洗剂中稳定的淀粉酶。另外，在专利文献7中记载了在螯合剂配合洗剂中稳定的sp722α-淀粉酶突变体。另外，还报告了含有即使在低温下也保持清洁性能和淀粉分解活性并且污渍除去效果高的α-淀粉酶yr288的清洁剂组合物(专利文献8)。

8、然而，在酸性或含有螯合剂的洗剂、特别是酸性且含有螯合剂的洗剂中，技术问题依然在于提供能够发挥高的清洁力并且稳定性高的α-淀粉酶。

9、〔专利文献1〕国际公开第94/26881号

10、〔专利文献2〕国际公开第00/60060号

11、〔专利文献3〕国际公开第06/002643号

12、〔专利文献4〕国际公开第2014/164777号

13、〔专利文献5〕国际公开第98/044126号

14、〔专利文献6〕日本特表2021-505167号公报

15、〔专利文献7〕日本专利6185243号公报

16、〔专利文献8〕国际公开第2022/017728号

技术实现思路

1、本发明涉及以下的方式。

2、1)一种α-淀粉酶突变体，其中，所述α-淀粉酶突变体是包括与序列号2所示的氨基酸序列的h238或e185位相当的位置上的氨基酸残基的取代、和以下的(a)或(b)所示的氨基酸残基的取代的亲本α-淀粉酶的突变体，并且，上述亲本α-淀粉酶或α-淀粉酶突变体相对于序列号2所示的氨基酸序列具有至少80％的序列同一性(但是，不包括与序列号2所示的氨基酸序列的h238、s239和g178位相当的3处位置、与h238、r209和g178位相当的3处位置、以及与e185、n190和g178位相当的3处位置上的氨基酸残基被取代的α-淀粉酶突变体)，

3、(a)选自与序列号2所示的氨基酸序列的t116、a181、a199、a275、v277、a286和l323位相当的位置中的1处以上的位置上的氨基酸残基的取代；

4、(b)与序列号2所示的氨基酸序列的g178位相当的位置上的氨基酸残基的取代、和选自与该序列号2所示的氨基酸序列的n126、t129、n190、r209和s239位相当的位置中的1处以上的位置上的氨基酸残基的取代。

5、2)一种编码1)的突变体的多核苷酸。

6、3)一种含有2)的多核苷酸的载体或dna片段。

7、4)一种含有3)的载体或dna片段的转化细胞。

8、5)一种含有1)的突变体的清洁剂组合物。

技术特征：

1.一种α-淀粉酶突变体，其中，

2.如权利要求1所述的突变体，其中，

3.如权利要求1或2所述的突变体，其中，

4.如权利要求1～3中任一项所述的突变体，其中，

5.如权利要求1所述的突变体，其中，

6.一种多核苷酸，其中，

7.一种载体或dna片段，其中，

8.一种转化细胞，其中，

9.如权利要求8所述的转化细胞，其中，

10.一种清洁剂组合物，其中，

11.如权利要求10所述的清洁剂组合物，其中，

12.如权利要求11所述的清洁剂组合物，其中，

13.如权利要求11或12所述的清洁剂组合物，其中，

14.如权利要求11～13中任一项所述的清洁剂组合物，其中，

技术总结本发明提供一种在低温下显示优异的淀粉分解活性并且在低pH和/或螯合剂存在下显示优异的稳定性的α‑淀粉酶。一种α‑淀粉酶突变体，其是包括与序列号2所示的氨基酸序列的H238或E185位相当的位置上的氨基酸残基的取代、和以下的(A)或(B)所示的氨基酸残基的取代的亲本α‑淀粉酶的突变体，并且，上述亲本α‑淀粉酶或α‑淀粉酶突变体相对于序列号2所示的氨基酸序列具有至少80％的序列同一性(但是，不包括与序列号2所示的氨基酸序列的H238、S239和G178位相当的3处位置、与H238、R209和G178位相当的3处位置、以及与E185、N190和G178位相当的3处位置上的氨基酸残基被取代的α‑淀粉酶突变体)。(A)选自与序列号2所示的氨基酸序列的T116、A181、A199、A275、V277、A286和L323位相当的位置中的1处以上的位置上的氨基酸残基的取代；(B)与序列号2所示的氨基酸序列的G178位相当的位置上的氨基酸残基的取代、和选自与该序列号2所示的氨基酸序列的N126、T129、N190、R209和S239位相当的位置中的1处以上的位置上的氨基酸残基的取代。技术研发人员：释真绪,日置贵大,寺井三佳,川原彰人受保护的技术使用者：花王株式会社技术研发日：技术公布日：2024/11/4