来源于鹿茸尖的抗氧化肽、生物活性肽及制备方法和应用与流程

本发明属于活性肽领域，涉及天然生物活性成分的提取或制备技术，具体涉及一种来源于鹿茸尖的抗氧化肽、生物活性肽及制备方法和应用。

背景技术：

1、活性氧(ros)是一系列具有高化学反应活性的含氧分子的总称，是生物体进行有氧呼吸的天然副产物，主要包括超氧阴离子(o2-)、过氧化氢(h2o2)、羟自由基(oh-)、臭氧(o3)和单线态氧(1o2)等。在正常情况下，机体中ros的含量始终处于较低水平，并在基因表达调控、细胞信号转导和维持内环境稳态中发挥重要作用。然而，在过量的外源性(辐射、缺氧、高温、紫外)刺激下，ros的含量会急剧升高，过量的ros便会打破氧平衡，导致“氧化应激”的产生。目前，已有大量证据表明，氧化应激是导致糖尿病、高血压、动脉粥样硬化、炎症等慢性非传染病发生和加剧的重要因素。

2、抗氧化剂具有中和自由基、抑制氧化扩散的特点，可起到清除过量ros的作用，适量补充抗氧化剂，可减轻氧化应激对生物体所带来的不良反应。以丁基化羟基甲苯(bht)、丁基化羟基苯甲醚(bha)和叔丁基对苯二酚(tbhq)为代表的合成抗氧化剂在具有抗氧化功能的同时，存在肾功能损伤、肝毒性、致畸形、致癌等毒副作用。相比之下，从生物体中提取的天然抗氧化剂，具有来源广泛以及无毒副作用的优点，受到科研人员的广泛关注。其中，抗氧化肽作为天然抗氧化剂的一种，主要来源于各类蛋白质的水解产物，具有极高的安全性，被广泛应用于功能性食品、医疗、化妆品等多个领域。

3、梅花鹿，偶蹄目鹿科鹿属哺乳动物，主要分布于中国东北部、日本和俄罗斯的太平洋沿岸地区。梅花鹿的幼角，即鹿茸，作为一种名贵的药材，拥有2000多年的药用历史。鹿茸中含有磷脂、激素、脂肪酸、氨基酸、蛋白质等多种化学成分，其中氨基酸成分占总成分的一半以上是天然的生物活性肽库，具有增强机体免疫力、抗衰老、抗氧化等功能。

4、目前，鹿茸活性多肽的制备方法有co2超临界提取法、超声波提取法、萃取法、高压脉冲电场法、人工合成法、酶解法等，其中酶解法大多数采用水或醇提取鹿茸蛋白进行酶解，水与醇对鹿茸中不同的活性成分有不同的提取效果，因此水提会损失部分醇溶性物质，而醇提会损失部分水溶性物质，导致鹿茸活性成分丢失较多，鹿茸活性多肽/蛋白提取率较低，且产物中小分子多肽和其他鹿茸活性小分子在产物中的占比很少，影响产物发挥其生理活性。因此，有必要对现有鹿茸多肽制备方法进行改进。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中通过酶解法从鹿茸中提取生物活性肽存在的提取率低和产物发挥其生理活性小等技术问题，本发明第一方面公开了一种鹿茸尖生物活性肽的制备方法，所述方法包括：

2、对从鹿茸上分割的鹿茸尖进行干燥、粉碎和脱脂处理得到鹿茸尖粉末，将鹿茸尖粉末配置成蛋白浆；

3、用木瓜蛋白酶在优化后的水解条件对蛋白浆水解得到水解产物，离心后收集上清液得到鹿茸尖提取物；

4、使用超滤管对鹿茸尖提取物分馏，收集分子量＜3kda的馏分得到鹿茸尖生物活性肽。

5、本发明第二方面公开了一种鹿茸尖抗氧化肽的制备方法，所述方法是采用第一方面中的鹿茸尖生物活性肽作为原料，采用g-25凝胶柱对所述鹿茸尖生物活性肽进行分离，在214nm处实时采集色谱图，依据色谱图收集具有紫外吸收峰值的子馏分atp-2和/或子馏分atp-1作为鹿茸尖抗氧化肽。

6、本发明第三方面提供了一种来源于鹿茸尖的生物活性肽，包括第一无抗氧化性生物活性肽和抗氧化肽，所述第一无抗氧化性生物活性肽包括氨基酸序列如seq id no.4～12中所示的肽序列中的至少一种，所述第一无抗氧化性生物活性肽中肽序列的peptideranker得分＞0.95的肽序列。

7、该生物活性肽中第一无抗氧化性生物活性肽和抗氧化肽可以是对第一方面中得到鹿茸尖生物活性肽或者对第二方面中得到的鹿茸尖抗氧化肽进行紫外全波长扫描、质谱分析、生物活性评估，依据peptideranker得分和生物活性预测结果进行筛选获得的。

8、本发明第四方面提供了一种来源于鹿茸尖的抗氧化肽，包括氨基酸序列如seq idno.1～3中所示的肽序列中的至少一种，所述抗氧化肽中肽序列的分子量在1kd左右。该抗氧化肽可以是对第二方面中得到子馏分atp-2进行紫外全波长扫描、质谱分析、生物活性评估，依据peptideranker得分和生物活性预测结果筛选获得的。

9、本发明第五方面提供了一种抗氧化肽的应用，采用上述第二方面公开的方法制备的鹿茸尖抗氧化肽和第四方面的抗氧化肽制备低细胞毒性的抗氧化剂，该抗氧化剂用于清除dpph自由基和/或清除ros，可以在功能性食品、医疗和化妆品等领域中应用。

10、本发明第六方面提供了一种生物活性肽的应用，采用上述第一方面公开的方法制备的鹿茸尖生物活性肽和第三方面的生物活性肽制备功能性食品、化妆品、或制备抗菌/降血压/抗血栓等药物。

11、与现有技术相比，本说明书实施例采用的上述至少一个技术方案能够达到的有益效果至少包括：本发明建立了一种从鹿茸尖端获得生物活性肽或抗氧化肽的方法，通过超滤、凝胶柱分离、质谱分析、生物活性评估等方式从atp-2中确定了最佳的抗氧化活性的三种肽序列，且通过分子对接验证了三条抗氧化肽对mmp-1具有较好的结合能力，为抗氧化产品的制备和应用提供了强有力的技术支撑。

技术特征：

1.一种来源于鹿茸尖的抗氧化肽，其特征在于，所述抗氧化肽包括氨基酸序列如seqid no.1～3中所示的肽序列中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的抗氧化肽，其特征在于，所述抗氧化肽中肽序列的peptideranker得分＞0.95。

3.一种来源于鹿茸尖的生物活性肽，其特征在于，所述生物活性肽包括第一无抗氧化性生物活性肽和如权利要求1或2所示的抗氧化肽，所述第一无抗氧化性生物活性肽包括氨基酸序列如seq id no.4～12中所示的肽序列中的至少一种，所述第一无抗氧化性生物活性肽中肽序列的peptideranker得分＞0.95。

4.根据权利要求3所述的生物活性肽，其特征在于，所述生物活性肽还包括第二无抗氧化性生物活性肽，所述第二无抗氧化性生物活性肽中肽序列的peptideranker得分为0.5～0.95。

5.一种鹿茸尖生物活性肽的制备方法，其特征在于，包括：

6.根据权利要求5所述的鹿茸尖生物活性肽的制备方法，其特征在于，对从鹿茸上分割的鹿茸尖进行干燥、粉碎和脱脂处理得到鹿茸尖粉末，包括：

7.根据权利要求5所述的鹿茸尖生物活性肽的制备方法，其特征在于，优化后的水解条件包括酶浓度为3500～5500u/g，水解时间为3.75～5.25h，水解温度为37-55℃，ph值为6-9，底物浓度为10.15-20.25％。

8.根据权利要求6所述的鹿茸尖生物活性肽的制备方法，其特征在于，优化后的水解条件包括水解温度52.0±0.5℃，ph值7.10±0.2，底物浓度14.4±0.5％。

9.一种鹿茸尖抗氧化肽的制备方法，其特征在于，包括：

10.一种抗氧化肽的应用，其特征在于，采用如权利要求1或2所述的抗氧化肽，或如权利要求9所述的鹿茸尖抗氧化肽的制备方法制备的鹿茸尖抗氧化肽制备低细胞毒性的抗氧化剂，所述抗氧化剂用于清除dpph自由基和/或清除ros，在功能性食品、医疗和化妆品领域中应用。

技术总结本发明提供了一种来源于鹿茸尖的抗氧化肽、生物活性肽及制备方法和应用，抗氧化肽包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1～3中所示的肽序列中的至少一种。生物活性肽包括第一无抗氧化性生物活性肽和抗氧化肽，第一无抗氧化性生物活性肽包括氨基酸序列如SEQ ID NO.4～12中所示的肽序列中的至少一种，所述第一无抗氧化性生物活性肽中肽序列的PeptideRanker得分＞0.95。所述制备方法包括脱脂、木瓜蛋白酶水解、超滤分馏、凝胶柱分离等步骤，通过本发明方法得到的鹿茸尖抗氧化肽具有较高的DPPH自由基清除率，对UVB诱导的HaCaT细胞具有很好的保护作用。技术研发人员：肖兴玉,郝林琳,刘东跃,陈熙,刘柳,李雪,爱新觉罗启英,吴宪受保护的技术使用者：吉林省国大生物工程有限公司技术研发日：技术公布日：2024/11/4