包含巨核细胞来源囊泡的组合物及其制备方法和用途

本申请涉及生物医药，具体涉及包含巨核细胞来源囊泡的组合物及其制备方法和用途。

背景技术：

1、临床上生理性止血困难及障碍等病症可诱发更加危急的症状，甚至是死亡，正常的生理条件下，除了急性大面积创伤合并大出血等疾病，生理性止血困难及障碍性疾病主要是由生理性血小板减少症引起的。

2、血小板减少症是一种常见的临床症状，存在很多诱发因素，包括遗传性诱发、药物诱发、肿瘤诱发或感染诱发等。血小板减少症往往伴随着极高风险的出血症状，严重的血小板减少症会导致难以控制的出血，危及患者的生命安全。

3、临床上常采用血小板输注的方式来预防性或紧急性提升患者的血小板水平。然而血小板制品的临床应用存在诸多限制因素，如供体来源有限、产量低、制备工艺复杂、保存和运输困难、保质期短和使用成本高等。相关技术中，通过体外分化血小板和体外全合成血小板类似物(纳米级别脂质体形式)等手段制备血小板制品或其类似物，以满足临床上血小板制品的短缺。但是，这些技术仍然存在制备工艺复杂、产量低和成本高等问题，并且体外全合成血小板类似物还进一步存在注射后半衰期短、功能单一(某些仅能辅助血小板作用而其本身不具备止血和凝血作用)、引入异种免疫原等问题。

4、由此，亟待提出一种成本低廉并且安全有效的血小板替代疗法。

技术实现思路

1、本申请至少从以下方面解决了相关技术的问题之一。

2、为此，本申请第一方面实施例提供了一种包含巨核细胞来源囊泡的组合物在制备用于治疗生理性止血过程障碍性疾病的药物中的用途，其中所述组合物由通过挤压将所述巨核细胞分解为囊泡而制得。

3、在一些实施例中，所述生理性止血过程障碍性疾病包括血小板减少症，其中所述血小板减少症选自由以下组成的组：遗传性血小板减少症和获得性血小板减少症，

4、其中所述遗传性血小板减少症包括fanconi贫血、先天性伴畸形无巨核细胞血小板减少症和may-hegglin异常，

5、其中所述获得性血小板减少症包括血液系统相关原发疾病、药物、恶性肿瘤、感染和电离辐射对造血干细胞或骨髓造成的损伤性疾病；

6、任选地，所述生理性止血过程障碍性疾病包括血小板减少症，其中所述血小板减少症选自由以下组成的组：生理正常性血小板破坏增加和生理正常性血小板消耗增加，

7、其中所述生理正常性血小板破坏增加包括免疫性血小板减少症、系统性红斑狼疮和药物诱导的免疫性血小板减少，

8、其中所述生理正常性血小板消耗增加包括血栓性疾病引起的血小板减少症和病毒性感染疾病引起的血小板减少症，其中所述血栓性疾病包括弥散性血管内凝血和血栓性血小板减少性紫癜；

9、任选地，所述生理性止血过程障碍性疾病包括血小板减少症，其中所述血小板减少症是慢性肝病导致的脾肿大和脾功能亢进引起的血液循环中血小板减少。

10、在一些实施例中，所述巨核细胞为选自由以下组成的组的干细胞分化得到的成熟巨核细胞和/或巨核系祖细胞：脐带血或外周血来源的造血干细胞、胚胎干细胞、诱导多能干细胞和脂肪间充质干细胞，优选地，所述巨核细胞为cd41和cd42b双阳性的巨核细胞；

11、任选地，所述巨核细胞来源囊泡的粒径为50至1000nm，优选为100至600nm。

12、本申请第二方面的实施例提供一种用于治疗生理性止血过程障碍性疾病的包含巨核细胞来源囊泡的组合物的制备方法，包括：

13、(1)通过挤压将所述巨核细胞分解为囊泡从而制得包含囊泡的混悬液；

14、(2)纯化所述包含囊泡的混悬液，

15、其中所述巨核细胞为选自由以下组成的组的干细胞分化得到的成熟巨核细胞和/或巨核系祖细胞：脐带血或外周血来源的造血干细胞、胚胎干细胞、诱导多能干细胞和脂肪间充质干细胞，优选地，所述巨核细胞为cd41和cd42b双阳性的巨核细胞。

16、在一些实施例中，在挤压所述巨核细胞之前，所述方法还包括对所述巨核细胞进行预处理，其中所述预处理为用蛋白酶抑制剂处理所述巨核细胞；

17、任选地，所述巨核细胞来源囊泡的粒径为50至1000nm，优选为100至600nm。

18、在一些实施例中，所述蛋白酶抑制剂包括解整合素金属蛋白酶17(adam17)的特异性抑制剂，优选为小分子抑制剂tapi-1；

19、任选地，所述预处理为用终浓度为1至1000μm的所述蛋白酶抑制剂处理所述巨核细胞；

20、任选地，所述预处理为用终浓度为1至1000μm的所述蛋白酶抑制剂处理所述巨核细胞12至48小时。

21、在一些实施例中，所述通过挤压将所述巨核细胞分解为囊泡从而制得所述包含囊泡的混悬液，包括：

22、通过挤压使得巨核细胞悬液通过高分子膜制得所述包含囊泡的混悬液；或者

23、通过挤压使得巨核细胞悬液通过微流道芯片制得所述包含囊泡的混悬液。

24、在一些实施例中，所述通过挤压使得巨核细胞悬液通过高分子膜制得所述包含囊泡的混悬液，包括：以5至10秒/次的挤压速度、0.5至2毫升/次的挤压体积和5至20次的次数重复挤压所述巨核细胞悬液使其通过孔径为1至5μm的高分子膜，任选为聚碳酸酯膜，制得所述包含囊泡的混悬液。

25、在一些实施例中，所述通过挤压使得巨核细胞悬液通过微流道芯片制得所述包含囊泡的混悬液，包括：使所述巨核细胞悬液依次通过第一微流道芯片和第二微流道芯片，其中所述第一微流道芯片的预定宽度为5至20μm，并且所述第二微流道芯片的预定宽度为1至5μm。

26、在一些实施例中，所述巨核细胞悬液的浓度为：5×105至5×107个细胞/ml。

27、本申请第三方面的实施例提供上述第二方面任一实施例的制备方法制备得到的组合物。

28、本申请的实施例实现了如下有益效果：

29、通过挤压巨核细胞制备的包含巨核细胞来源囊泡的组合物，可作为由血小板减少症导致的生理性止血过程障碍性疾病(例如包含全身各处的难以控制性出血等)治疗中的血小板替代或补充药物，且具备体内调节内源巨核细胞生产血小板的潜力，生物安全性良好并且易于保存和运输。本申请的实施例提供了一种包含巨核细胞来源囊泡的组合物的制备方法及其在制备用于治疗生理性止血过程障碍性疾病的药物中的新用途，从而实现了一种成本低廉并且安全有效的血小板替代疗法。

技术特征：

1.包含巨核细胞来源囊泡的组合物在制备用于治疗生理性止血过程障碍性疾病的药物中的用途，其中所述组合物由通过挤压将所述巨核细胞分解为囊泡而制得。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述生理性止血过程障碍性疾病包括血小板减少症，其中所述血小板减少症选自由以下组成的组：遗传性血小板减少症和获得性血小板减少症，其中所述遗传性血小板减少症包括fanconi贫血、先天性伴畸形无巨核细胞血小板减少症和may-hegglin异常，其中所述获得性血小板减少症包括血液系统相关原发疾病、药物、恶性肿瘤、感染和电离辐射对造血干细胞或骨髓造成的损伤性疾病；

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述巨核细胞为选自由以下组成的组的干细胞分化得到的成熟巨核细胞和/或巨核系祖细胞：脐带血或外周血来源的造血干细胞、胚胎干细胞、诱导多能干细胞和脂肪间充质干细胞，优选地，所述巨核细胞为cd41和cd42b双阳性的巨核细胞；

4.用于治疗生理性止血过程障碍性疾病的包含巨核细胞来源囊泡的组合物的制备方法，包括：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在挤压所述巨核细胞之前，所述方法还包括对所述巨核细胞进行预处理，其中所述预处理为用蛋白酶抑制剂处理所述巨核细胞；

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂包括解整合素金属蛋白酶17的特异性抑制剂，优选为小分子抑制剂tapi-1；

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述通过挤压将所述巨核细胞分解为囊泡从而制得所述包含囊泡的混悬液，包括：

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述通过挤压使得巨核细胞悬液通过高分子膜制得所述包含囊泡的混悬液，包括：以5至10秒/次的挤压速度、0.5至2毫升/次的挤压体积和5至20次的次数重复挤压所述巨核细胞悬液使其通过孔径为1至5μm的高分子膜，任选为聚碳酸酯膜，制得所述包含囊泡的混悬液；或者

9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述巨核细胞悬液的浓度为：5×105至5×107个细胞/ml。

10.根据权利要求4至9中任一项所述的制备方法制备得到的组合物。

技术总结本申请涉及生物医药技术领域，具体涉及包含巨核细胞来源囊泡的组合物及其制备方法和用途。该用途为包含巨核细胞来源囊泡的组合物在制备用于治疗多种原因引起的生理性止血过程障碍性疾病的药物中的用途，其中所述组合物由通过挤压将所述巨核细胞分解为囊泡而制得。本申请的实施例提供了一种包含巨核细胞来源的囊泡的组合物及其制备方法和该组合物在制备用于治疗生理性止血过程障碍性疾病的药物中的新用途，从而实现了一种成本低廉并且安全有效的血小板替代疗法。技术研发人员：杜亚楠,张蕊,梁海威,邓丽萍,敖艳肖受保护的技术使用者：清华大学技术研发日：技术公布日：2024/9/29