一种治疗子宫内膜炎的药物组合

本发明涉及生物医药领域，具体地说，涉及一种治疗子宫内膜炎的药物组合。

背景技术：

1、子宫内膜炎是人类和母畜常发的一种疾病，严重危害人类健康和母畜的生产、生育能力，给人类公共卫生安全和畜牧业经济发展带来巨大挑战。金黄色葡萄球菌是引起该疾病的主要病原之一，其能定值与子宫上皮细胞内分泌多种毒力因子，如溶血毒素、表皮剥脱素、杀白细胞素、肠毒素、胞外酶类和表面蛋白粘附因子等，具有溶血、杀死细胞等作用（eckert lo，2014），引发子宫局部炎症。目前用于治疗子宫内膜炎药物主要是抗生素如青霉素、头孢类和中草药组方宫炎清等，但是由于抗生素不恰当使用导致多种细菌出现耐药性，特别是金黄色葡萄多重耐药性的出现（cheung gyc，2021），给人类带来巨大威胁，迫切需要研发一种新的、绿色、无耐药抗生素替代产品解决这一问题。

2、20世纪80年代，boman团队发现并报告了昆虫源的典型抗菌肽，称为天蚕素（cecropins），在抗菌肽发展起到里程碑意义（zasloff 等，2002）。抗菌肽来源广泛，动物、植物和微生物如细菌、真菌均可产生，具有抗菌、免疫调控和营养的功能（lazzaro bp，2020），同时其独特的阳离子和疏水性性特点，使其能够与细菌细胞膜相互作用，进入细菌内与胞内核酸或蛋白酶作用影响转录、翻译或代谢等引起细菌死亡，不易产生耐药性。研究者利用其高效抗菌和营养价值利用基因工程技术实现体外高产产品，为药物研发和饲料添加剂开发提供坚实基础。因此，具有较好活性且能实现体外高产制备的amps被认为是未来抗菌药物最有力的候选物之一（ali adem bahar 等，2013）。plectasin是一种从北欧松林地表腐生子囊菌中分离出来真菌防御素，对革兰氏阳性菌具有较好的活性。其包括不具活性的前体肽和由40个氨基酸组成具有抗菌活性的成熟肽。成熟肽具有独特的cs αβ二级结构由3对二硫键稳定的一个n端α-螺旋和c端的β折叠结构与其高效的抗菌活性构成强紧密的构效关系。早在2005年，mygind等研究了plectasin对130余株不同来源肺炎链球菌的抑制作用，发现对于青霉素敏感或抗性菌株，最小杀菌浓度(mic)均在0.1-8 μg/ml之间，mic50为 1μg/ml (mygind ,fischer等，2005)。plectssin作为一种活性抗菌肽，受到研究者广泛关注，为提高其稳定性和安全性，多种衍生肽被设计。其中，抗菌肽ap138是在2015年lociuro s通过计算机突变筛选获取plectasin衍生肽，通过化学合成验证其对金黄色葡萄球菌具有较好的抗菌活性,为抗生素耐药后时代候选药物（lociuro s，2015）。之后，grooac在2018年研究包被后的ap138对部分金黄色葡萄球菌mic在0.125-4 μg/ml，可作为抑制革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌引起疾病的候选药物(groo ac,2018)。同时，单一抗菌肽药物在体内用药可能纯在药效周期短效果不佳的现象，因此，在此基础上联合抗生素协同发挥药效，不仅可降低抗生素使用浓度缓解耐药性问题，而且可以显著提升疗效。抗菌肽及其联合抗生素组合的设想，为治疗子宫内膜炎提供新的思路。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种新型的抗菌肽a24及其联合头孢噻呋钠应用。

2、本发明的另一目的是提供一种治疗子宫内膜炎的药物组合。

3、本发明利用毕赤酵母5 l高密度发酵120 h，实现抗菌肽ap138高产量表达（达3.1g/l），并验证对金黄色葡萄球菌、链球菌和表皮葡萄球菌有一定的杀菌效果，且具有较低的溶血性。为进一步提高ap138抗菌活性剂安全性，本发明利用生物信息学技术，设计多种抗菌肽ap138衍生肽，其中抗菌肽a24抗致病性革兰氏阳性菌的活性提升4倍，且体外能高产量表达（达3.9g/l），并在实验室前期阳离子交换柱纯化的基础上，通过缓冲液a和b浓度优化（由20 mm至50mm）及缓冲液a和b ph优化（6.7至7.0），获得纯品。目前未有关于抗菌肽a24及其联合头孢噻呋钠对耐药性金黄色葡萄球菌体外药效及其感染引起子宫内膜炎治疗效果的报道。

4、为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种抗菌肽a24，其包含如下的氨基酸序列或由其组成：

5、i)seq id no:2所示的氨基酸序列；或

6、ii)在i)的n端和/或c端连接标签得到的氨基酸序列。

7、第二方面，本发明提供编码抗菌肽a24的核酸分子。

8、第三方面，本发明提供含有所述核酸分子的生物材料，所述生物材料包括但不限于重组dna、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或转基因细胞系。

9、第四方面，本发明提供抗菌肽a24在制备抗菌药物或组合物中的应用。

10、所述菌为革兰氏阳性菌，优选金黄色葡萄球菌（ staphylococcus aureus）和耐药性金黄色葡萄球菌。

11、第五方面，本发明提供抗菌肽a24在制备预防或治疗子宫内膜炎的药物中的应用；其中，所述子宫内膜炎的致病菌包括金黄色葡萄球菌和耐药性金黄色葡萄球菌。

12、第六方面，本发明提供一种治疗子宫内膜炎的药物组合，所述药物组合包括抗菌肽a24和抗生素头孢噻呋钠。

13、本发明中，抗菌肽、头孢噻呋钠可同时给药或先后给药。

14、抗菌肽a24、头孢噻呋钠的给药方式为腹腔注射。

15、借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

16、本发明首次发现抗菌肽a24对耐药金黄色葡萄球菌及其生物膜具有显著抑制作用。实验结果表明，抗菌肽a24对金黄色葡萄球菌具有高效、快速地杀菌作用，优于万古霉素（van）和头孢噻呋钠（cef），且a24优于母肽ap138。同时，a24可以穿过牛子宫上皮细胞膜，且能对胞内金黄色葡萄球菌杀伤，胞内杀菌率大于90%。体外试验中，a24与头孢噻呋钠具有联合杀菌效果，低剂量组合能够显著抑制金黄色葡萄球菌生长，在小鼠子宫内膜炎模型的试验中，a24及其联合头孢噻呋钠可以降低细菌引起的白细胞增加现象；同时能够还能够显著降低小鼠子宫荷菌量和促炎因子il-6；并能保护组织免受损伤，且上述指标显示衍生肽a24效果优于母肽ap138，低于组合组；因此，抗菌肽a24联合头孢噻呋钠的组合具有开发成为治疗由金黄色葡萄球菌引起的子宫内膜炎新型制剂的潜力。

技术特征：

1.抗菌肽a24，其特征在于，其包含如下的氨基酸序列或由其组成：

2.编码权利要求1所述抗菌肽的核酸分子。

3.含有权利要求2所述核酸分子的生物材料，其特征在于，所述生物材料为重组dna、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或转基因细胞系。

4.权利要求1所述抗菌肽在制备抗菌药物或组合物中的应用；

5.权利要求1所述抗菌肽在制备预防或治疗子宫内膜炎的药物中的应用；其中，所述子宫内膜炎的致病菌包括金黄色葡萄球菌。

6.一种预防或治疗子宫内膜炎的药物，其特征在于，所述药物的活性成分为权利要求1所述抗菌肽。

7.一种治疗子宫内膜炎的药物组合，其特征在于，所述药物组合包括权利要求1所述抗菌肽和头孢噻呋钠。

8.根据权利要求7所述的药物组合，其特征在于，抗菌肽、头孢噻呋钠可同时给药或先后给药。

9.根据权利要求7或8所述的药物组合，其特征在于，抗菌肽a24、头孢噻呋钠的给药方式为腹腔注射。

技术总结本发明提供一种治疗子宫内膜炎的药物组合。抗菌肽A24是来源于母肽AP138的衍生肽。AP138及其衍生肽A24对多重耐药葡萄球菌具有高效的体外杀菌活性。抗菌肽A24杀菌效率、抗生素后效应明显高于万古霉素或头孢噻呋钠，且优于母肽AP138。其中A24与头孢噻呋钠具有联合效应，在体内外具有较好地抑菌效果。AP138及A24在小鼠体内用药安全，对细胞、组织和器官无损伤，且与低浓度头孢噻呋钠联合使用后对感染了金黄色葡萄球菌的子宫内膜炎疗效较佳。所述药物的联用发挥了显著的协同增效，比单一药物更有效地降低或避免子宫内膜炎预防及治疗过程中产生的严重不良反应，提高子宫内膜炎预防及治疗效果。技术研发人员：王建华,张昆,滕达,毛若雨,郝娅,杨娜受保护的技术使用者：中国农业科学院饲料研究所技术研发日：技术公布日：2024/11/14