一种TNS1基因增强子及其应用的制作方法

本发明涉及遗传修饰，特别涉及一种tns1基因增强子及其应用。

背景技术：

1、非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，nsclc）是一种严重的肺脏疾病，占据了肺癌患者中的大多数，约占所有肺癌的80%。其早期症状包括胸部胀痛、痰血、低热、咳嗽等，晚期症状为呼吸困难、咳嗽、咯血等局部症状和疲乏、体重减轻、食欲下降等全身症状。发病原因可能与吸烟、环境影响、遗传因素等有关。其中上皮间充质转化（epithelial-to-mesenchymal transition，emt）是非小细胞肺癌转移的重要原因和表型。通过emt，肿瘤细胞获得更强的迁移和侵袭能力，更容易从原发部位脱离并转移到其他部位。同时，emt还导致肿瘤细胞形态、分子标志物和功能的变化，这些变化共同构成了emt作为nsclc转移重要原因和表型的证据。因此，如何抑制上皮间充质转化就成为了治疗非小细胞肺癌转移恶化的新课题。

2、增强子（enhancer）是基因表达调控中的一类重要顺式作用元件，它们能够增强启动子（promoter）的转录活性，从而增加基因的表达水平。增强子通常是一段较短的dna序列，可以位于目标基因上游、下游或基因内部，甚至可能位于远离目标基因的染色体其他位置。由于染色质的高级结构（如环化、拓扑关联结构等），使得远离基因的增强子仍能在三维空间中接近并影响目标基因的转录，因此增强子可以位于基因的任何位置，甚至跨越多个基因或染色体区域。基于增强子位置的不确定性，所以基因增强子的发现是复杂的过程，需要涉及实验方法和计算方法的结合，实验方法包括dna甲基化酶敏感性测定、染色质免疫沉淀（chip）等，计算方法包括大规模基因组数据对比、软件预测功能分析等。然而dna甲基化酶敏感性测定实验周期长，技术要求高，且容易出现存在假阳性和假阴性；chip需要完成一系列交联、裂解、免疫沉淀和dna纯化步骤，技术要求高，成本也较高；大规模基因组数据对比和软件预测功能分析均可能存在误差和误判，大量预测的“增强子”经过实验后发现并不能真正起到增加基因表达水平的效果，所以计算方法发现增强子需要与实验验证相结合才能确认。

3、相较于靶向编码基因的编辑治疗而言，编辑增强子能够不改变编码基因的序列，具有更高的安全性和临床应用能力，fda首个批准的基因编辑治疗疾病方案即是通过编辑确定能够调控目标基因表达的增强子序列进行治疗。寻找并明确能够真实抑制非小细胞肺癌细胞迁移能力的功能性增强子是基因编辑治疗非小细胞肺癌转移领域的热点与难点。

技术实现思路

1、本发明目的在于公开了一种tns1基因增强子及其应用，以解决现有技术中所存在的一个或多个技术问题，提供至少一种有益的选择或创造条件。

2、本发明第一方面在于提供一种张力蛋白1（tensin 1，tns1）基因增强子，命名为etns1。

3、本发明第二方面在于提供了用于靶向敲除本发明第一方面所述tns1基因增强子的sgrna。

4、本发明第三方面在于提供本发明第一方面所述tns1基因增强子的应用方向。

5、本发明第四方面在于提供一种含有本发明第二方面所述sgrna的载体。

6、本发明第五发明在于提供一种含有本发明第二方面所述sgrna或本发明第四方面所述载体的药物

7、编码本发明第一方面所述tns1基因增强子的核苷酸序列如seq id no:1所示。

8、本发明第二方面所述sgrna包括sgrna1和/或sgrna2；编码所述sgrna1的核苷酸序列如seq id no:2所示；编码所述sgrna2的核苷酸序列如seq id no:3所示。

9、本发明第三方面所述应用是利用所述etns1调控非小细胞肺癌细胞。

10、在本发明第三方面的一些应用实施方式中，通过对所述etns1进行遗传修饰实现调控非小细胞肺癌细胞。进一步，所述遗传修饰为插入或删除。

11、在本发明第三方面的一些应用实施方式中，所述调控是减少所述非小细胞肺癌细胞中的tns1 mrna转录。

12、在本发明第三方面的一些应用实施方式中，所述调控是抑制所述非小细胞肺癌细胞迁移。

13、本发明第四方面所述载体包含本发明第二方面所述sgrna的核苷酸序列。

14、本发明第五方面所述药物含有本发明第二方面所述sgrna或本发明第四方面所述载体。

15、在本发明第五方面的一些应用实施方式中，所述药物还包括药学上可接受的辅料。

16、本发明的有益效果在于：

17、1、本发明提供一种新的真实有功能的tns1基因增强子，利用荧光素酶报告系统证实了etns1能够在a549细胞中显著增强tns1基因的转录水平。

18、2、通过对所述etns1的修饰，使得tns1的mrna转录降低能够令发生emt的细胞迁移能力被抑制，进而获得调控nsclc迁移抑制的效果。

19、3、提供了抑制tns1基因表达的产品的制备方法，使得调控nsclc迁移抑制易于实现。

技术特征：

1.tns1基因增强子，其特征在于，编码所述tns1基因增强子的核苷酸序列如seq idno:1所示。

2.用于靶向敲除权利要求1所述tns1基因增强子的sgrna，其特征在于，包括sgrna1和/或sgrna2；编码所述sgrna1的核苷酸序列如seq id no:2所示；编码所述sgrna2的核苷酸序列如seq id no:3所示。

3.权利要求1所述tns1基因增强子在调控非小细胞肺癌细胞中的应用。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，通过对所述tns1基因增强子进行遗传修饰实现调控非小细胞肺癌细胞。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述遗传修饰为插入或删除。

6.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述调控是减少所述非小细胞肺癌细胞中的tns1 mrna转录。

7.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述调控是抑制所述非小细胞肺癌细胞迁移。

8.一种载体，其特征在于，包含编码权利要求2所述sgrna的核苷酸序列。

9.一种药物，其特征在于，含有权利要求2所述sgrna或权利要求8所述载体。

10.根据权利要求9所述药物，其特征在于，还包括药学上可接受的辅料。

技术总结本发明涉及一种TNS1基因增强子及其应用。编码所述TNS1基因增强子的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，命名为eTNS1。本发明提供了一种新的TNS1基因增强子eTNS1，利用荧光素酶报告系统证实了所述eTNS1能够在发生了上皮间充质转化的A549细胞中显著增强TNS1启动子的转录活性。通过对所述eTNS1的修饰，使得TNS1的mRNA转录水平降低，进而获得调控NSCLC迁移抑制的效果。另外还提供了抑制TNS1基因表达的产品的制备方法，使得调控NSCLC迁移抑制易于实现。技术研发人员：张满,彭天然受保护的技术使用者：广州国家实验室技术研发日：技术公布日：2024/12/2