针对突变的RAS的HLAI类限制性T细胞受体的制作方法

背景技术：

0、发明背景

1、一些癌症可具有十分有限的治疗选择，尤其在癌症变为转移性及不可切除时。尽管诸如例如手术、化学疗法及放射疗法的治疗已经取得进展，但许多癌症(诸如例如胰腺癌、结肠直肠癌、肺癌、子宫内膜癌、卵巢癌和前列腺癌)的预后可能较差。因此，存在对癌症的另外治疗的未满足的需求。

技术实现思路

0、发明简述

1、本发明的实施方案提供了分离的或纯化的t细胞受体(tcr)，其包含(i)seq idno:1-3、(ii)seq id no:4-6或(iii)seq id no:1-6的氨基酸序列，其中所述tcr对由人白细胞抗原(hla)i类分子呈递的突变的人ras氨基酸序列具有抗原特异性，并且其中所述突变的人ras氨基酸序列是突变的人kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(kras)氨基酸序列、突变的人harvey大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(hras)氨基酸序列或突变的人神经母细胞瘤大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(nras)氨基酸序列。

2、本发明的另一实施方案提供了分离的或纯化的多肽，其包含本发明tcr的功能部分，其中所述功能部分包含以下氨基酸序列：(a)全部seq id no:1-3，(b)全部seq id no:4-6，或(c)全部seq id no:1-6。

3、本发明的另一实施方案提供了包含至少一种本发明多肽的分离的或纯化的蛋白。

4、本发明的其它实施方案提供了与本发明的tcr、多肽及蛋白相关的核酸、重组表达载体、宿主细胞、细胞群体和药物组合物。

5、本发明的实施方案还提供了检测哺乳动物中癌症的存在的方法以及治疗或预防哺乳动物中癌症的方法。

6、附图中几个视图的简要说明

7、图1a描述了示例在与二甲基亚砜(dmso)或者用kras wt 24-mer肽或kras g12v24-mer肽脉冲的自体dc共培养后，外周血cd8+t细胞的cd137表达的图。方框中的数字表示在每种共培养条件下表达cd137的t细胞的百分比。

8、图1b是显示在t细胞与用dmso、kras wt 24-mer肽或kras g12v 24-mer肽脉冲的自体dc共培养后，每2x104个细胞的ifn-γ斑点数目的图。用pma:离子霉素培养的t细胞以及与用dmso脉冲的dc培养的t细胞作为对照。

9、图2显示了描述实验数据的图(点图)，示例了已经用结合kras g12v四聚体-别藻蓝素(apc)或kras g12v四聚体-藻红蛋白(pe)的kras g12v 24-mer肽进行ivs的cd8+外周血细胞的百分比(右图)。左图显示了已被修饰以表达tcr的t细胞，该tcr在hla-a*11:01的背景下识别kras g12d 10-mer，其与kras g12v四聚体-apc或kras g12v四聚体-pe结合。

10、图3描述了显示用实施例2的tcr转导的来自第一供体和第二供体(分别为左图和右图)的同种异体t细胞表面上tcr表达的图，如通过流式细胞术通过对鼠tcrβ链恒定区(mtcrβ)染色所测量的。方框中的数字表示mtcrβ表达阳性的细胞的百分比。

11、图4的图显示了与表达不同krasg12突变的癌细胞系共培养过夜后，用实施例2的tcr转导的来自两个不同供体(供体1和供体2)的t细胞的ifn-γ产生(如通过elispot测定法测量的(ifn-γ斑点/2e4个细胞)以及4-1bb表达(％mtcrβ+cd137+)。每个靶癌细胞系未转导或用hla-a*11:01转导。“>”表示大于500个斑点。

12、图5a是显示在将用实施例2的tcr转导的t细胞与用指示浓度(ng/ml)的kras g12v9-mer肽(实心圆)或kras wt 9-mer肽(空心圆)脉冲的靶细胞共培养后分泌的ifn-γ的浓度(pg/ml)的图。

13、图5b是显示在将用实施例2的tcr转导的t细胞与用指示浓度(ng/ml)的kras g12v10-mer肽(实心圆)或kras wt 10-mer肽(空心圆)脉冲的靶细胞共培养后分泌的ifn-γ的浓度(pg/ml)的图。

技术特征：

1.产生表达t细胞受体(tcr)的人细胞或人细胞群的方法，所述方法包括：

2.如权利要求1所述的方法，其中所述tcr还包含人可变区。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述tcr包含：

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述tcr包含：

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述tcr还包含：

6.如权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述tcr还包含：

7.如权利要求1-6任一项所述的方法，其中所述tcr包含：

8.如权利要求1-7任一项所述的方法，其中所述tcr包含：

9.产生表达多肽的人细胞或人细胞群的方法，所述方法包括：

10.如权利要求9所述的方法，其中所述多肽还包含：

11.如权利要求9或10所述的方法，其中所述多肽包含：

12.如权利要求9-11任一项所述的方法，其中所述多肽包含：

13.如权利要求9-12任一项所述的方法，其中所述多肽包含：

14.如权利要求9-13任一项所述的方法，其中所述多肽包含：

15.如权利要求9-14任一项所述的方法，其中所述多肽包含：

16.产生表达蛋白的人细胞或人细胞群的方法，所述方法包括：

17.如权利要求16所述的方法，其中：

18.如权利要求16或17所述的方法，其中：

19.如权利要求16-18任一项所述的方法，其中：

20.如权利要求16-19任一项所述的方法，其中：

21.如权利要求16-20任一项所述的方法，其中：

22.如权利要求16-21任一项所述的方法，其中：

23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，

24.如权利要求23所述的方法，其中所述突变的人ras氨基酸序列的氨基酸序列包含seq id no:29或30，或者由seq id no:29或30组成。

25.如权利要求1-24任一项所述的方法，其中所述hla i类分子是hla-a分子。

26.如权利要求1-24任一项所述的方法，其中所述hla i类分子是hla-a11分子。

27.如权利要求1-24任一项所述的方法，其中所述hla i类分子是hla-a*11:01分子。

28.如权利要求1-24任一项所述的方法，其中所述突变的人ras氨基酸序列包括在第12位的甘氨酸被取代的野生型人kras、野生型人hras或野生型人nras氨基酸序列，其中第12位是通过分别参照野生型人kras、野生型人hras或野生型人nras蛋白来定义的。

29.如权利要求28所述的方法，其中所述取代是第12位的甘氨酸被缬氨酸取代。

技术总结本申请公开了分离的或纯化的T细胞受体(TCR)，其中所述TCR对人白细胞抗原(HLA)I类分子呈递的突变的RAS氨基酸序列具有抗原特异性。还提供了相关的多肽和蛋白质，以及相关的核酸、重组表达载体、宿主细胞、细胞群和药物组合物。还公开了检测哺乳动物中癌症的存在的方法以及治疗或预防哺乳动物中的癌症的方法。技术研发人员：拉米·约瑟夫,卢勇成,盖尔·卡弗里,史蒂文·A·罗森伯格受保护的技术使用者：美国卫生和人力服务部技术研发日：技术公布日：2024/12/23