黄芪花蜂蜜及其免疫调节作用的制作方法

本发明涉及黄芪花蜂蜜及其免疫调节作用。

背景技术：

1、黄芪，又称黄耆，始见于《神农本草经》：“黄芪味甘，微温。一名戴糁，生山谷”。黄芪分布范围广泛，但以道地产品为佳，在不同历史时期黄芪的道地产区也不同。宋朝《本草图经》中记载：“今河东、陕西州郡多有之……其皮折之如绵,谓之绵黄芪”。元代《汤液本草》述：“今《本草》、《图经》只言河东者，沁州绵上是也，故谓之绵芪”。明朝《本草蒙筌》：“绵芪出山西沁州绵上，此品极佳(此为上品)”。清朝《本草崇原》中记载：“黄芪，生于西北……以山西之绵上者为良，故世俗谓之绵黄芪。或者只以坚韧如绵解之，非是”。故自宋元明清时期以来，山西产的黄芪质优效佳，山西恒山被认为是黄芪的道地产区。《神农本草经》中记载：“黄芪味甘微温，主痈疽久败创，排脓止痛，大风，痢疾，五痔，鼠瘘，补虚，小儿百病。现代中国药典中描述黄芪具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、脱毒排脓、敛疮生肌等功效。

2、黄芪是豆科植物蒙古黄芪astragalus memeranaceus(fisch.)bge.var.mongholicus(bge.)hsiao或膜荚黄芪a.membranaceus(fisch.)bge.的干燥根，具有健脾补中，升阳举陷、益卫固表、利尿、托毒生肌等功效，亦有“补气固表之圣药”的美称。现代药理学研究表明，黄芪具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、提高机体免疫功能及保护心脑血管等多种药理活性，临床应用广泛。

3、黄芪花具有丰富的营养价值，而且具有很高的药用价值和保健作用。有学者对其所含化学成分进行了全面研究，结果显示，黄芪花中主要含有糖类、蛋白质、核苷酸、氨基酸及脂肪酸等化学成分，这与黄芪花表现出的免疫调节、抗衰老、抗肿瘤、预防心脑血管等作用密切相关。

4、蜂蜜具有多种功能活性和丰富的营养价值，广泛应用于食品加工及医药产业中。《神农本草经》中称“蜂蜜味甘、平，安五脏诸不足，益气补中，止痛”，现代研究表明蜂蜜具有抗炎、抗氧化、抗菌等多种药理学活性，这些药理学活性与其所含的活性物质有关，如维生素、蛋白质、微量元素及一些萜类、多酚等。

5、综上，有必要研究黄芪花蜂蜜的相关活性。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供黄芪花蜂蜜提高免疫能力中的应用。

2、本发明涉及的黄芪花蜂蜜，指的是采集黄芪的道地产区的黄芪花并酿制而成的蜜，为独具特色的中草药蜂蜜。

3、本发明涉及的黄芪花蜂蜜的蜜源地位于恒山山脉主山脉上，这里海拔高，昼夜温差大，地理环境特殊，历史上是传统的恒山黄芪道地产区。恒山黄芪花蜂蜜产地周围分布湖流和国家森林公园，环境优美。蜜源地为中国中药协会黄芪野生哺育基地，同时是中国中医科学院中药资源中心确定的国家级黄芪示范基地。蜜源地黄芪野生抚育繁育区，维持的区域的植物多样性，哺育过程绿色，维持了原生态环境，保证了蜜源的环境。

4、在黄芪花原产地，黄芪花的开花时间是每年的六月中旬到七月初，只有20天开花时间，产地其他植物的花还未开放，使用黄芪花蜂蜜纯度可达95％。蜜源地独特的地理环境、花期，赋于黄芪花蜂蜜高纯度与稀缺性的独特品质。

5、本发明涉及的黄芪花蜂蜜颜色淡黄，气味芳香，甜而不腻，气味清香，不易结晶。

6、本发明涉及的黄芪花蜂蜜的制备工艺：将黄芪花原蜜经过一次过滤，二次过滤，低温贮存静止后，原蜜灌装，低温条件保护了黄芪花蜂蜜独有活性与原始口感。

7、本发明涉及的黄芪花蜂蜜中，葡萄糖和果糖的含量分别为341.5ug/mg和378.4ug/mg。

8、本发明涉及的黄芪花蜂蜜中，ca、mg、fe、cu、cr的元素含量分别为76.049μg/g、76.960μg/g、124.336μg/g、0.216μg/g、14.750μg/g。

9、本发明的目的是获得黄芪花蜂蜜在免疫调节等方面的活性证明，保护中药黄芪花蜂蜜这一地理标志性功能产品。本发明采用超高效液相色谱-质谱联用技术对黄芪花蜂蜜中的活性成分进行表征，初步明确其免疫调节功效物质基础；综合运用代谢组学与肠道菌群高通量测序技术共同揭示黄芪花蜂蜜增强免疫功能的作用。本发明对黄芪花蜂蜜作为免疫调节剂进行开发应用意义重大。

10、经本发明研究，黄芪花蜂蜜能够提高nk细胞的活力、提高巨噬细胞的吞噬能力以及提高t淋巴细胞的增殖能力。

11、经本发明研究，黄芪花蜂蜜能够调节抗坏血酸、醛酸及甘油磷脂的代谢通路。本发明采用lc-ms方法，结果显示：代谢组学分析空白组与黄芪花蜂蜜组鉴定出278个差异代谢物，筛选得到抗坏血酸和醛酸代谢通路及甘油磷脂代谢通路2条相关性较强的代谢通路。

12、经本发明研究，黄芪花蜂蜜能够调节抗坏血酸、醛酸及甘油磷脂的代谢通路。本发明采用lc-ms方法，分析黄芪花蜂蜜组与黄芪组小鼠血清中的差异代谢物，结果显示：代谢组学分析空白组与黄芪花蜂蜜组鉴定出278个差异代谢物，筛选得到抗坏血酸和醛酸代谢通路及甘油磷脂代谢通路2条相关性较强的代谢通路；空白组和黄芪组鉴定出169个差异代谢物，筛选到甘油磷脂代谢1条相关性较强的代谢通路。黄芪花蜂蜜和黄芪对小鼠血清中所含代谢通路上的差异代谢物具有相似的调节作用。

13、与黄芪进行对比的研究中发现，灌胃黄芪可使小鼠肠道菌群的物种多样性显著增加，且对物种相对丰度具有明显的调节作用。在lefse差异判别分析中，黄芪花蜂蜜组、黄芪组小鼠的标志性菌群分析结果存在差异，尚未发现二者存在共性标志菌群。此外，二者对正常小鼠肠内部分物种存在相似调节作用。在门水平上，黄芪花蜂蜜、黄芪均可以使梭杆菌门、拟杆菌门等有益菌的相对丰度升高，使spirochaetota、厚壁菌门、疣微菌门、变形菌门的相对丰度降低；在属水平上，黄芪花蜂蜜、黄芪均可以使muribaculaceae_unclassified、parabacteroides、欧陆森氏菌属、脱硫弧菌属等的相对丰度升高，使clostridia_ucg-014_unclassified、akkermansia、唾液联合乳杆菌(ligilactobacillus)、lachnospiraceae_unclassified、desulfovibrionaceae_unclassified、乳杆菌、prevotellaceae_ucg-001、邓卡尼氏菌(duncaniella)的相对丰度降低。其中，parabacteroides是潜在益生菌，可以缓解肥胖和肥胖相关的代谢功能障碍。picrust2功能预测发现，黄芪花蜂蜜、黄芪存在共性调节机制。ko分析显示，黄芪花蜂蜜组、黄芪组样本的kegg功能在level 1、level 2分类相同，而功能对应基因的丰度值略有差异，具体表现为黄芪组较黄芪花蜂蜜组大。通路分析结果显示，二者各有其独特的作用通路，以黄芪组筛选得到的通路数量较多；二者亦存在共性作用通路，如腺苷钴胺生物合成ii(晚期钴掺入)、cob(ii)yrinatea,c-二酰胺生物合成ii(晚期钴掺入)、外分泌激素生物合成。

14、另外，金属元素分析表明，黄芪花蜂蜜未检出zn元素，而黄芪中zn含量达25.342μg/g。

15、本发明具有如下有益技术效果：

16、本发明涉及的黄芪花蜂蜜具有改善能够提高nk细胞的活力、提高巨噬细胞的吞噬能力以及提高t淋巴细胞的增殖能力，蜂蜜中含有ca、mg、fe、cu、cr等微量金属元素。