一种发酵组合物的制备方法及其应用与流程

本申请涉及发酵，尤其涉及一种发酵组合物的制备方法及其应用。

背景技术：

1、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)是一种革兰氏阳性杆菌，其广泛分布于土壤、农作物秸以及纳豆和豆豉等传统发酵食品中。枯草芽孢杆菌易在枯草浸汁中生长，在不利环境下可形成芽孢，故名枯草芽孢杆菌。枯草芽孢杆菌不产生毒素，但可产生多种重要的生物活性物质，例如纳豆激酶、凝乳酶、淀粉酶、脂肪酶、抗菌肽、血管紧张素转化酶抑制物等。枯草芽孢杆菌对人体有益的生物学特性，使其作为发酵食品用菌种和益生菌，以及作为生物工程/代谢工程菌用于合成各种酶类和生物活性物质，用于食品生产或生物医药领域。

2、纳豆激酶(nattokinase,nk)是一种新颖的纤维蛋白溶解酶，最早由日本学者须见洋行从传统的枯草芽孢杆菌发酵食品纳豆(natto)中提取获得。纳豆激酶是一种枯草芽孢杆菌分泌的碱性丝氨酸蛋白质，单链多肽结构，无二硫键。

3、近年来，以纳豆激酶为主要成分作为食品、保健品、药品的研发工作进展迅速，市场涌现大批的相关产品，多以片剂、胶囊为主。由于枯草芽孢杆菌发酵产生纳豆激酶的同时具有刺鼻的氨臭味，气味冲，并且口感差，严重限制了其普及和应用。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足之处，本申请提供了一种发酵组合物的制备方法及其应用。

2、本申请的技术方案如下所述：

3、第一方面，本申请提供了一种发酵组合物的制备方法，包括以下步骤：

4、提供包含甘薯浆液和大豆浆液的灭菌混合物；以及

5、将包含第一枯草芽孢杆菌的第一菌液和包含第二枯草芽孢杆菌的第二菌液接种于所述灭菌混合物以进行发酵，获得所述发酵组合物；

6、其中，所述第一枯草芽孢杆菌保存于国家典型培养物保藏中心，保藏编号为cctccno：m2022132；所述第二枯草芽孢杆菌保存于国家典型培养物保藏中心，保藏编号为cctccno：m20221746。

7、可选地，所述第一菌液的接种量与所述第二菌液的接种量之间的比例为1：(1～2)，即第一菌液的接种量：第二菌液的接种量为1：(1～2)，例如可以是1：1、1：1.2、1：1.5、1：

8、1.8、1：2或前述任意两个比值之间的值。

9、可选地，每100ml的所述灭菌混合物接种1ml～3ml的所述第一菌液；和/或

10、每100ml的所述灭菌混合物接种1ml～3ml的所述第二菌液。

11、可选地，所述第一菌液的制备方法包括步骤：将所述第一枯草芽孢杆菌按照0.05％～0.5％的接种量接种于液体培养基中，发酵培养直至菌液od600值不小于3.0；

12、所述第二菌液的制备方法包括步骤：将所述第二枯草芽孢杆菌按照0.05％～0.5％的接种量接种于液体培养基中，发酵培养直至菌液od600值不小于3.0；

13、其中，所述液体培养基包括：15～25g/l的葡萄糖、10～20g/l的蛋白胨、5～10g/l的酵母提取物、5～10g/l的十二水磷酸氢二钠、0.5～2g/l的一水磷酸二氢钠以及0.1～0.5g/l的硫酸镁；所述液体培养基的ph为7.0～7.6。

14、可选地，所述将包含第一枯草芽孢杆菌的第一菌液和包含第二枯草芽孢杆菌的第二菌液接种于所述灭菌混合物以进行发酵的步骤中，所述发酵的条件为：37℃、300～600r/min，溶氧30％，罐压0.05mpa，18～20h。

15、可选地，所述将包含第一枯草芽孢杆菌的第一菌液和包含第二枯草芽孢杆菌的第二菌液接种于所述灭菌混合物以进行发酵的步骤之后且所述获得所述发酵组合物的步骤之前，所述发酵组合物的制备方法还包括步骤：对经所述发酵获得的发酵产物进行固液分离处理，收集液体；收集的所述液体为所述发酵组合物；

16、可选地，所述固液分离处理为离心，所述离心的转速为3000r/min～7000r/min。

17、可选地，在所述灭菌混合物中，所述甘薯浆液与所述大豆浆液的体积比为1：(0.3～3)，例如可以是1：0.3、1：0.5、1：1、1：2、1：3或前述任意两个比值之间的值；和/或

18、所述甘薯浆液的制备方法包括步骤：蒸制甘薯，对蒸制后的甘薯进行均浆处理，除渣，获得所述甘薯浆液；和/或

19、所述大豆浆液的制备方法包括步骤：蒸制大豆，对蒸制后的大豆进行均浆处理，除渣，获得大豆浆液。

20、可选地，所述蒸制甘薯包括步骤：采用饮用水对甘薯干进行淘洗，再将甘薯干与饮用水按照甘薯干：饮用水为1：(1～3)的重量比混合以进行浸泡处理，然后沥干，将沥干后的甘薯干进行蒸制；

21、所述蒸制大豆包括步骤：采用饮用水对大豆进行淘洗，再将大豆与饮用水按照大豆：饮用水为1：(2～4)的重量比混合以进行浸泡处理，然后沥干，将沥干后的大豆进行蒸制。

22、可选地，在所述蒸制甘薯的步骤和所述蒸制大豆的步骤中，所述浸泡处理的温度为2℃～30℃，例如可以是2℃、5℃、10℃、20℃、30℃或前述任意两个值之间的值，所述浸泡处理的时间为6小时至12小时，例如可以是6小时、8小时、10小时、12小时或前述任意两个数值之间的值；和/或

23、所述蒸制甘薯的步骤中所述蒸制的条件和所述蒸制大豆的步骤中所述蒸制的条件分别独立地为：105℃～115℃，0.02mpa蒸制30分钟至60分钟。

24、第二方面，本申请提供了如第一方面中任意一种所述发酵组合物的制备方法制得的发酵组合物在制备食品或药物中的应用，食品或药物例如为液体形态，示例食品为饮料。

25、本申请提供了一种发酵组合物的制备方法及其应用，产生如下的技术效果：

26、本申请将大豆浆液和甘薯浆液作为发酵原料，摆脱了传统大豆发酵中氨基酸在代谢中发生脱羧作用产生的氨臭味，保留了甘薯的香甜口味，口感显著改善和提升，发酵采用双菌混合发酵，可使大豆和甘薯的功效成分及营养成分得到充分的分解、溶出和利用，提高发酵原料的综合利用率和生物转化率，发酵过程不需要添加任何其他物质，原料天然、安全，成本低。尤其是，纳豆激酶活性提高了十倍以上。此外，在纳豆激酶、大豆多肽和甘薯膳食纤维协同作用下，具有显著降血脂功效，无论在气味和口感，还是在纤溶活性、降脂功效方面都具有显著优势，更为人们所喜欢，更容易普及。不仅对心血管疾病防控具有重要的社会意义，而且具有巨大的商用价值。

技术特征：

1.一种发酵组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述发酵组合物的制备方法，其特征在于，所述第一菌液的接种量与所述第二菌液的接种量之间的比例为1：(1～2)。

3.根据权利要求1或2所述发酵组合物的制备方法，其特征在于，每100ml的所述灭菌混合物接种1ml～3ml的所述第一菌液；和/或

4.根据权利要求3所述发酵组合物的制备方法，其特征在于，所述第一菌液的制备方法包括步骤：将所述第一枯草芽孢杆菌按照0.05％～0.5％的接种量接种于液体培养基中，发酵培养直至菌液od600值不小于3.0；

5.根据权利要求1所述发酵组合物的制备方法，其特征在于，所述将包含第一枯草芽孢杆菌的第一菌液和包含第二枯草芽孢杆菌的第二菌液接种于所述灭菌混合物以进行发酵的步骤中，所述发酵的条件为：37℃、300～600r/min，溶氧30％，罐压0.05mpa，18～20h。

6.根据权利要求1所述发酵组合物的制备方法，其特征在于，所述将包含第一枯草芽孢杆菌的第一菌液和包含第二枯草芽孢杆菌的第二菌液接种于所述灭菌混合物以进行发酵的步骤之后且所述获得所述发酵组合物的步骤之前，所述发酵组合物的制备方法还包括步骤：对经所述发酵获得的发酵产物进行固液分离处理，收集液体；收集的所述液体为所述发酵组合物；

7.根据权利要求1所述发酵组合物的制备方法，其特征在于，在所述灭菌混合物中，所述甘薯浆液与所述大豆浆液的体积比为1：(0.3～3)；和/或

8.根据权利要求7所述发酵组合物的制备方法，其特征在于，所述蒸制甘薯包括步骤：采用饮用水对甘薯干进行淘洗，再将甘薯干与饮用水按照甘薯干：饮用水为1：(1～3)的重量比混合以进行浸泡处理，然后沥干，将沥干后的甘薯干进行蒸制；

9.根据权利要求8所述发酵组合物的制备方法，其特征在于，在所述蒸制甘薯的步骤和所述蒸制大豆的步骤中，所述浸泡处理的温度为2℃～30℃，所述浸泡处理的时间为6小时至12小时；和/或

10.如权利要求1至9任一项中所述发酵组合物的制备方法制得的发酵组合物在制备食品或药物中的应用。

技术总结本申请公开了一种发酵组合物的制备方法及其应用，所述发酵组合物的制备方法包括步骤：提供包含甘薯浆液和大豆浆液的灭菌混合物；以及，将包含第一枯草芽孢杆菌的第一菌液和包含第二枯草芽孢杆菌的第二菌液接种于所述灭菌混合物以进行发酵，获得所述发酵组合物；其中，所述第一枯草芽孢杆菌保存于国家典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2022132；所述第二枯草芽孢杆菌保存于国家典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20221746，提高发酵原料的综合利用率和生物转化率，并且发酵组合物具有良好的气味、口感和保健功效。技术研发人员：廖园园,董艳山,张建宇,何瑜林,高雅,王业富受保护的技术使用者：武汉真福创新生物制药有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/2