一种检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接ELISA试剂盒及其sigmaB蛋白的应用的制作方法

本发明属于免疫检测，具体涉及一种检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa试剂盒及其sigmab蛋白的应用。

背景技术：

1、新型鸭呼肠孤病毒病(new-type duck reovirus disease，ndrvd)是由新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus，ndrv)引起的一种以肝脏出血坏死、脾脏肿大坏死为特征的新疫病。临床上主要表现为雏鸭岀雏率降低、免疫抑制、病鸭耐过后成为僵鸭、生长发育迟缓和生产性能下降等。该病的发生没有明显的季节性，但在寒冷的环境下，鸭子的抵抗力较弱，此时感染的可能性会大幅度增加，发病率和死亡率也会有随之提高。

2、ndrv为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属成员，其在血清学和基因组序列上与mdrv(muscovy duck reovirus，mdrv)和禽呼肠孤病毒(avian reovirus，arv)差异很大。ndrv可以感染番鸭、半番鸭、肉鸭和鹅等多种水禽。目前，没有商品化的疫苗预防该病。ndrvd作为一个可以引起垂直传播与水平传播的传染病，且引起该病的病毒基因组为多节段rna，容易因基因突变和重组进而导致新的变异毒株出现，如若防控不严，很容易造成水禽大面积感染，所以对ndrv的监测显得尤为重要。

3、目前，用于检测新型鸭呼肠孤病毒感染的方法常见于采用荧光定量pcr的方法进行检测(cn108611441a、cn116397052a、cn111235321a)。而基于免疫学检测新型鸭呼肠孤病毒感染的报道相对较少，例如公开号cn108982847a的专利公开了一种检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa检测试剂盒，其中公开了以σc蛋白作为包被抗原，能够对新型鸭呼肠孤病毒抗体进行检测，从而监测鸭群中新型鸭呼肠孤病毒的流行情况。但该检测试剂盒仅是保藏编号为cctccno：v2018的新型鸭呼肠孤病毒n-drv-xt18株感染情况的检测。新型鸭呼肠孤病毒属于rna病毒，其存在频繁变异的情况，并且临床上因不同病毒毒株、毒力或感染宿主的不同而有差异。因此，急需开发多种针对不同新型鸭呼肠孤病毒毒株的检测产品。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白在制备新型鸭呼肠孤病毒抗体的试剂或试剂盒中的应用，使制备的试剂或试剂盒能够为新型鸭呼肠孤病毒的早期诊断以及大规模检测提供了物质保障。

2、本发明提供了新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白在制备检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的试剂或试剂盒中的应用。

3、优选的，所述新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。

4、优选的，所述试剂盒采用以下免疫检测技术制备得到：酶联免疫检测技术、放射免疫技术、荧光免疫技术、免疫层析技术、免疫印迹和免疫沉淀技术。

5、本发明提供了一种检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa试剂盒，包括包被有新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的检测板和酶标二抗。

6、优选的，所述新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。

7、优选的，所述新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的包被浓度为3.8～4.2μg/ml。

8、优选的，所述新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的包被条件为3～5℃包被过夜。

9、优选的，所述包被有新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的检测板在制备时，将新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白包被于检测板后进行封闭；

10、所述封闭用试剂为含质量浓度为0.8％～1.2％bsa的0.01mph 7.4pbs缓冲液。

11、优选的，所述封闭的时间为110～130min。

12、优选的，还包括以下至少一种试剂：样本稀释液、洗涤液、终止液和显色液。

13、本发明提供了新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白在制备检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的试剂或试剂盒中的应用。本发明通过重组表达的手段制备新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的重组蛋白，将所述重组蛋白包被于检测板中，利用抗原抗体特异性结合作用，检测新型鸭呼肠孤病毒阳性血清及感染家禽的常见病毒的阳性血清，结果表明，所述重组蛋白与鸭细小病毒、坦布苏病毒、鸭瘟病毒的阳性血清均无交叉反应，仅对新型鸭呼肠孤病毒阳性对照血清检测阳性。这表明，所述新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白能够用于新型鸭呼肠孤病毒抗体的检测，且检测结果准确，可靠。

14、本发明提供了一种检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa试剂盒，包括包被有新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的检测板和酶标二抗。本发明采用所述间接elisa试剂盒对新型鸭呼肠孤病毒感染的麻鸭血清进行检测，以与间接免疫荧光检测方法为参照。结果表明，20份血清用该试剂盒检测的s/p值均>0.15，检测结果为阳性，与间接免疫荧光试验结果100％符合。可见，本发明提供的试剂盒为新型鸭呼肠孤病毒的流行病学调查、免疫效果评价以及疫病防控提供了技术支撑。

技术特征：

1.新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白在制备检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的试剂或试剂盒中的应用。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。

3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述试剂盒采用以下免疫检测技术制备得到：酶联免疫检测技术、放射免疫技术、荧光免疫技术、免疫层析技术、免疫印迹和免疫沉淀技术。

4.一种检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa试剂盒，其特征在于，包括包被有新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的检测板和酶标二抗。

5.根据权利要求4所述检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa试剂盒，其特征在于，所述新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。

6.根据权利要求4所述检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa试剂盒，其特征在于，所述新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的包被浓度为3.8～4.2μg/ml。

7.根据权利要求4所述检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa试剂盒，其特征在于，所述新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的包被条件为3～5℃包被过夜。

8.根据权利要求4所述检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa试剂盒，其特征在于，所述包被有新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白的检测板在制备时，将新型鸭呼肠孤病毒sigmab蛋白包被于检测板后进行封闭；

9.根据权利要求8所述检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa试剂盒，其特征在于，所述封闭的时间为110～130min。

10.根据权利要求4～9中任意一项所述检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接elisa试剂盒，其特征在于，还包括以下至少一种试剂：样本稀释液、洗涤液、终止液和显色液。

技术总结本发明提供了一种检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接ELISA试剂盒及其sigmaB蛋白的应用，属于免疫检测技术领域。新型鸭呼肠孤病毒sigmaB蛋白在制备检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的试剂或试剂盒中的应用。本发明提供了一种检测新型鸭呼肠孤病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被有新型鸭呼肠孤病毒sigmaB蛋白的检测板和酶标二抗。本发明为新型鸭呼肠孤病毒的早期诊断以及大规模检测提供了物质保障，对该疫病的流行病学调查、免疫效果评价以及疫病防控具有重要意义。技术研发人员：宋亚芬,杨承槐,张乾义,杨宵玥,张兵,张敏,郭思凡,关飞虎,赵靖玉,严琳杰受保护的技术使用者：中国兽医药品监察所技术研发日：技术公布日：2024/8/20