一种硝普钠注射剂氰化物含量的测定方法与流程

本发明涉及药物分析，具体为一种硝普钠注射剂氰化物含量的测定方法。

背景技术：

1、硝普钠注射剂作为血管扩张剂，用于治疗高血压危象、手术期间控制血压以及治疗急性充血性心力衰竭病症，其安全性直接关系到患者的生命健康，然而，硝普钠在人体内代谢过程中会产生氰化物，氰化物进入人体后析出氰离子，与细胞线粒体内氧化型细胞色素氧化酶的三价铁结合，阻止氧化酶中的三价铁还原，妨碍细胞正常呼吸，造成组织缺氧，导致机体陷入内窒息状态，危害患者的健康，因此必须严格控制硝普钠中氰化物的含量，开发专属性强、灵敏度高的氰化物检测方法非常关键，以便在药品生产和临床使用过程中进行严格的质量控制，及时发现氰化物含量超标的问题，并采取相应的措施，从而降低患者因氰化物中毒而发生不良反应的风险；

2、传统的硝普钠注射剂中氰化物含量的测定方法为衍生化分光光度法，但其灵敏度和专属性均较差，无法准确定量氰化物含量，而本技术的硝普钠注射剂中氰化物含量的测定方法采用离子色谱法检测，同时结合对照品外标法计算氰化物含量，可以准确测量和计算硝普钠注射剂中的氰化物含量，从而确保氰化物含量测定方法的高效性。

3、现有的硝普钠注射剂中氰化物含量的测定方法存在的缺陷是：

4、1、专利文件cn107167472b公开了一种含氰矿浆中总氰化物的快速测定方法，该文件主要考虑如何解决目前没有对矿浆中氰化物进行测定的问题，并没有考虑到如何准确测量和计算硝普钠注射剂中的氰化物含量，确保氰化物含量测定方法的高效性，解决目前对硝普钠注射剂中的氰化物含量测定结果偏差的问题；

5、2、专利文件cn107991429b公开了一种含硫化物的含氰废水中易释放氰化物的测定方法，该文件主要考虑如何解决现有含硫化物的含氰废水中易释放氰化物无法测定和测定结果偏低的问题，并没有考虑到如何验证氰化物含量测定方法的专一性和适应性，保证该测量方法测定硝普钠注射剂中氰化物含量的稳定性和可靠性的问题；

6、3、专利文件cn112076431b公开了一种清洁处理金矿尾砂中氰化物的方法，该文件主要考虑如何在低成本情况下完全脱除尾砂中氰化物的问题，并没有考虑到如何确定氰化物含量测定方法对氰化物测量的最低浓度，从而提高氰化物含量测定方法的灵敏度的问题；

7、4、专利文件cn111257494b公开了一种顶空气相色谱检测电铸工艺金制品中氰化物含量的方法，该文件主要考虑如何对电铸工艺黄金制品中氰化物含量进行准确测定的问题，并没有考虑到如何确定氰化物含量测定方法的线性范围，并确保在该范围内硝普钠注射剂中氰化物含量测定是准确的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种硝普钠注射剂氰化物含量的测定方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种硝普钠注射剂氰化物含量的测定方法，采用离子色谱法检测，结合对照品外标法计算氰化物含量，色谱条件包括：色谱柱为2×250mm的ionpacas7、4×250mm的ionpacas7、5um，2.1x150mm的prp-x100、4.6um，2.1x150mm的prp-x100和5×250mm的brf1-a5-250中的一种；

3、流动相为80-120mmol/lnaoh+200-300mmol/lnaoac混合液；

4、流速为0.5-1.5ml/min；

5、柱温为25-35℃；

6、检测池温度为30-40℃；

7、检测器为安培检测器，电极为银电极，参比电极为ag/agcl；

8、进样量为20-50ul；

9、空白溶液为纯净水。

10、优选的，对照品外标法采用的对照品为氰化钾。

11、优选的，色谱柱填料为聚苯乙烯磷酸酯。

12、优选的，离子色谱法中采用的离子色谱仪为瑞士万通metrohm930，包括蠕动高压泵、六通阀、柱温箱、自动进样器、抑制器和安培检测器。

13、优选的，氰化物含量的测定方法包括如下步骤：

14、s1、制备对照品溶液进行专属性实验和适用性实验验证氰化物含量测定方法的专一性和适用性；

15、s2、制备检测限溶液进行灵敏度实验确定氰化物含量测定方法对氰化物测量的最低浓度；

16、s3、制备对照品实验进行线性实验确定氰化物含量测定方法的线性范围；

17、s4、制备对照品溶液、供试品溶液和准确度溶液进行准确度实验验证氰化物含量测定方法的准确性；

18、s5、分别取等量供试品溶液和对照品溶液依次进样，记录色谱图，结合对照品溶液中的氰化钾含量，根据峰面积以外标法计算硝普钠中氰化物杂质的含量。

19、优选的，步骤s1中，还包括如下步骤：

20、步骤s11：首先制备对照品溶液，取氰化钾适量，加纯净水溶解并稀释制成每1ml中约含氰化物80ng的溶液；

21、步骤s12：随后进行专属性实验，分别取对照品溶液和空白溶液各25μl注入液相色谱仪，并记录色谱图；

22、步骤s13：最后进行适用性实验，分别取对照品溶液6份各25μl注入液相色谱仪，并记录色谱图中氰化物峰面积，计算峰面积均值和rsd值。

23、优选的，步骤s2中，还包括如下步骤：

24、步骤s21：首先制备对照品溶液，取氰化钾适量，加纯净水溶解并稀释制成每1ml中约含氰化物80ng的溶液；

25、步骤s22：随后制备检测限溶液，移取对照品溶液1ml置于100ml量瓶中，加纯净水稀释并定容至刻度，摇匀即得；

26、步骤s23：最后进行灵敏度实验，取检测限溶液3份各1针25ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，报告氰化物峰面积和信噪比，计算氰化物检测限浓度，该浓度相当于供试品溶液浓度的百分比。

27、优选的，步骤s3中，还包括如下步骤：

28、步骤s31：首先制备对照品溶液，取氰化钾适量，加纯净水溶解并稀释制成每1ml中约含氰化物800ng的溶液5份，配置对照品溶液的容量瓶均为10ml，相当于标准浓度百分比依次为10％、50％、100％、150％和200％，吸取体积依次为0.1ml、0.5ml、1ml、1.5ml和2ml；

29、步骤s32：随后取步骤s31中制备好的溶液5份各1针25ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，报告氰化物峰面积，以氰化物峰面积与浓度计算线性回归方程，分别报告线性方程和相关系数。

30、优选的，步骤s4中，还包括如下步骤：

31、步骤s41：首先制备对照品溶液，取氰化钾适量，加纯净水溶解并稀释制成每1ml中约含氰化物80ng的溶液；

32、步骤s42：随后制备供试品溶液，精密取硝普钠注射剂适量，加纯净水溶解并稀释制成每1ml中约含10mg的溶液；

33、步骤s43：精密称取供试品溶液约100mg9份，分别置10ml量瓶中，平分为3组，第一组分别精密加入对照品储备溶液0.1ml，第二组分别精密加入1ml，第三组分别精密加入2ml，依次相当于加入标准浓度的10％、100％和200％，分别加纯净水溶解并定容至刻度，摇匀即得；

34、步骤s44：依次精密移取上述各溶液1针25ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，报告氰化物峰面积，计算9份中氰化物回收率。

35、优选的，步骤s5中，还包括如下步骤：

36、步骤s51：采用对照品外标法计算氰化物含量的计算公式为：

37、

38、其中：ax为供试品中测得的氰化物峰面积；

39、as为对照品中测得的氰化物峰面积；

40、mx为供试品的称样质量mg；

41、ms为对照品溶液中氰化物的质量ng；

42、vx为供试品溶液的稀释倍数；

43、vs为对照品溶液的稀释倍数。

44、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

45、1、本发明通过采用离子色谱法检测，结合对照品外标法计算硝普钠注射剂中的氰化物含量，同时进行准确度实验验证氰化物含量测定方法的准确性，选用离子色谱法，采用适宜的色谱条件，依次分离硝普钠与杂质氰根离子，采用安培检测器，电极为银电极，参比电极为ag/agcl，通过氰根离子与银电极发生氧化还原反应产生电化学信号被准确检测出，避免硝普钠注射剂中中其他杂质带来的基质干扰，测定条件稳定，简化了衍生化反应带来的不确定性，提高检测氰化物的灵敏度和专属性，同时以氰化钾作为对照品，以外标法进行计算，使得对硝普钠注射剂质量的监控更加准确和全面，可以解决如何准确测量和计算硝普钠注射剂中的氰化物含量，确保氰化物含量测定方法的高效性，解决目前对硝普钠注射剂中的氰化物含量测定结果偏差的问题。

46、2、本发明通过进行专属性实验和适用性实验验证氰化物含量测定方法的专一性和适用性，专属性实验结果表明，氰化物色谱峰保留时间约为8.6min，空白溶液未检测出峰，这表明该方法对于氰化物的检测具有良好的专属性，色谱系统没有检测到空白溶液的干扰，即它能够区分氰化物和空白溶液在样品中存在的物质，适用性实验结果表明，对照品溶液连续进样6针氰化物峰面积rsd％为1.46％，小于标准值2％，符合要求，适用性符合检测要求，该氰化物含量的测定方法适用于硝普钠注射剂中氰化物含量的测定及定量分析，可以提供准确可靠的结果，专属性实验和适用性实验可以验证氰化物含量测定方法的专一性和适应性，保证该测量方法测定硝普钠注射剂中氰化物含量的稳定性和可靠性。

47、3、本发明通过进行灵敏度实验确定氰化物含量测定方法对氰化物测量的最低浓度，灵敏度实验结果表明，检测限溶液连续进样3针氰化物峰信噪比最小为3.1，符合规定要求≥3，同时，检测限溶液的浓度转换为供试品溶液的浓度为0.08ppm，远低于规定的限度要求≤8ppm，说明该氰化物含量的测定方法具有较高的灵敏度，适合用于硝普钠注射剂中氰化物含量的测定，灵敏度实验可以解决如何确定氰化物含量测定方法对氰化物测量的最低浓度，从而提高氰化物含量测定方法的灵敏度的问题。

48、4、本发明通过进行线性实验确定氰化物含量测定方法的线性范围，线性实验结果和氰化物线性关系图表明，在该浓度下氰化物线性关系方程为：y＝722.65x+224.99，相关系数为0.9999，相关系数是衡量线性关系紧密程度的指标，其值范围从-1到1，接近1或-1表示线性关系很强，接近0表示几乎没有线性关系，因此在该浓度范围内，氰化物的峰面积与浓度之间存在良好的线性关系，线性实验可以解决如何确定氰化物含量测定方法的线性范围，并确保在该范围内硝普钠注射剂中氰化物含量测定是准确的问题。