一株中华根瘤菌96-4及其微生物菌肥、微生物菌肥的制备方法与应用

本发明涉及一株中华根瘤菌96-4微生物菌肥及其应用，属于微生物。

背景技术：

1、随着恶劣气候的加剧和过渡放牧，草地土壤退化、草地生产力骤降是我国草原生态系统面临的严重问题；施肥可以迅速给草地补充营养物质，改善土壤养分状况，促进植被恢复，增加植物群落盖度和高度，是提高草地生产力的主要方式。

2、化肥是目前用于提高草地生产力方面常见的肥料，然而，过量施用化肥会导致土地板结、土壤养分比例失调，在提高草地生产力的同时也造成土壤环境日益恶化，生态平衡破坏等问题。因此，亟需寻找可代替或部分代替化肥的肥料。微生物肥料既可以保证植物生长不可或缺的养分，还可以改土、促生、抗病和增产。

3、土壤中常见的微生物包括细菌（如假单胞菌、鞘氨醇单胞菌、芽孢杆菌、放线菌）和真菌（如担子菌、子囊菌和木霉菌），这些微生物在土壤生物地球化学过程中各司其职，对提高土壤生态功能极为重要。目前，大部分微生物肥料的制备添加较多的是细菌中的芽孢杆菌和真菌中的里氏木霉，现有的研究表明这两类微生物可以显著提高地上部分和地下部分生物量，提高土壤养分含量。然而，大部分研究均是将微生物与秸秆、木屑混合，大大增加了财力、物力和人力成本；因此，当务之急是找到一种既可提质增效，又可节约成本的微生物菌及肥料。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明提供一株中华根瘤菌96-4，从土壤中分离得到，其保藏号为cctcc no:m 2024318，保藏日期为：2024年02月26日，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心（地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号）； 中华根瘤菌96-4的16s rdna序列如seq id no:1所示；分类命名为中华根瘤菌（sinorhizobium sp.）。

2、而且，所述中华根瘤菌96-4同时具有多种功能，包括：解磷、解钾、固氮、产多糖和吲哚乙酸。

3、而且，所述中华根瘤菌96-4属革兰氏阴性，在有氧及厌氧环境下皆会生长。

4、而且，中华根瘤菌96-4的制备方法如下：

5、a）称取围封处理下的土壤样品5 g，置于盛有50 ml无菌水的100 ml三角瓶中，震荡30 min，充分混匀，得到土壤悬浊液，浓度为1/10；

6、b）吸取0.5 ml上述土壤悬浊液于放入盛有4.5 ml无菌水的无菌离心管中，混匀，使溶液浓度为1/100，重复以上步骤将溶液稀释至终浓度为1/1000000；

7、c）吸取100 μl稀释后的土壤悬浊液，涂布于pko固体培养基中，25℃纯化培养7d，得到中华根瘤菌96-4。

8、另一方面，本发明提供一种利用中华根瘤菌96-4制备的中华根瘤菌微生物菌肥。

9、而且，所述中华根瘤菌微生物菌肥的制备方法如下：将中华根瘤菌96-4在r2a培养基中扩大培养，之后离心去除培养基成分，得到的菌体用无菌生理盐水稀释，得到中华根瘤菌微生物菌肥。

10、而且，所述r2a培养基中扩大培养的培养温度为28±0.5℃、ph值为7.2±0.2。

11、另一方面，本发明提供一种中华根瘤菌微生物菌肥的应用；

12、而且，用于制备种子包衣。

13、而且，用于促生草种。

14、而且，用于提高土壤养分含量。

15、有益效果：

16、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

17、1、本发明提供的中华根瘤菌96-4及其微生物菌肥，兼具多种功能，仅使用单一菌剂就可达到解磷、解钾、固氮、产吲哚乙酸的作用，一种菌剂可代替多种化肥发挥相同的作用，既可以保证植物生长不可或缺的养分，促进植物生长，还可以提高土壤养分含量，保护土壤环境。

18、2、本发明提供的中华根瘤菌96-4及其微生物菌肥，从土壤中便可获取，取材简单广泛，无需与其他肥料联用，使用方便，效果显著。

技术特征：

1.一株中华根瘤菌96-4，其特征在于，从土壤中分离得到，其保藏号为cctcc no:m2024318，16s rdna序列如seq id no:1所示,分类命名为中华根瘤菌（sinorhizobiumsp.）。

2.如权利要求1所述的一株中华根瘤菌96-4，其特征在于，所述中华根瘤菌96-4属革兰氏阴性，在有氧及厌氧环境下皆会生长；所述中华根瘤菌96-4具有解磷、解钾、固氮、产吲哚乙酸的作用。

3.利用权利要求1-2任一项所述的中华根瘤菌96-4制备的中华根瘤菌微生物菌肥。

4.如权利要求3所述的中华根瘤菌微生物菌肥，其特征在于，所述中华根瘤菌微生物菌肥的制备方法如下：将中华根瘤菌96-4在r2a培养基中扩大培养，之后离心去除培养基成分，得到的菌体用无菌生理盐水洗涤，得到中华根瘤菌微生物菌肥。

5.如权利要求4所述的中华根瘤菌微生物菌肥，其特征在于，所述r2a培养基中扩大培养的培养温度为28±0.5℃、ph值为7.2±0.2。

6.如权利要求5所述的中华根瘤菌微生物菌肥的应用。

7.如权利要求6所述的中华根瘤菌微生物菌肥的应用，其特征在于，用于制备种子包衣。

8.如权利要求6所述的中华根瘤菌微生物菌肥的应用，其特征在于，用于促生草种。

9.如权利要求6所述的中华根瘤菌微生物菌肥的应用，其特征在于，用于提高土壤养分含量。

技术总结本发明提供一株中华根瘤菌96‑4及其微生物菌肥、微生物菌肥的制备方法与应用，中华根瘤菌96‑4从土壤中分离得到，其保藏号为CCTCC NO:M 2024318，本发明提供的中华根瘤菌96‑4及其微生物菌肥，兼具多种功能，仅使用单一菌剂就可达到解磷、解钾、固氮、产吲哚乙酸的作用，一种菌剂可代替多种化肥发挥相同的作用，既可以保证植物生长不可或缺的养分，促进植物生长，还可以提高土壤养分含量，保护土壤环境。技术研发人员：王珍,贾丽娟,金轲,屠详建,姜沈毅受保护的技术使用者：中国农业科学院草原研究所技术研发日：技术公布日：2024/9/9