一种全血样本核酸快速提取的试剂及提取方法

本发明涉及全血样本提取，具体涉及一种全血样本核酸快速提取的试剂及提取方法。

背景技术：

1、分子诊断是利用通过检测靶基因核酸物质来进行辅助诊断的方法，目前使用最广泛的是基于荧光定量pcr技术的核酸检测试剂盒。该方法是主要利用dna聚合酶介导的pcr反应来进行检测的。从流程上来看，大致可以分为待检测样本的采集、样本的处理、上机检测和结果分析四个流程。

2、在分子诊断中，样本的处理主要是指对样本进行核酸提取。这主要是因为大部分临床样本组分是很复杂的，例如粪便样本中含有大量的复合多糖、胆汁、盐、脂类和尿酸盐等；痰液样本中含有大量的粘蛋白、细胞碎片等。这些物质不仅可以干扰荧光信号的采集，甚至可以直接抑制扩增反应，影响检测结果。随着自动化设备的普及，目前大部分样本的提取都是通过磁珠法进行自动化或者半自动提取。这种依赖于设备的提取方法虽然带来了自动化的便利，但是并不利于poct检测的发展。而随着快速检测需求的发展，一些简单的样本，例如口腔拭子、鼻咽拭子等也可以利用直扩等方式进行分子诊断，主要是这些样本中反应的物质较少或含量基本没有影响，同时，病毒裂解很容易，靶基因可以轻易的释放到反应体系中。因此，即便是复杂的样本，如果可以做到上述两点，也可以实现样本的快速处理。

3、全血样本也是一种常见的、复杂的样本，特别是在急诊科室。在急诊科室，对于突发性高热等患者往往需要进行血液样本分子辅助诊断以检测是否存在细菌感染、脓毒症等情况。在进行血液样本核酸提取时，往往要预先进行“去除红细胞”。因为血红细胞破碎释放的大量血红蛋白、血红素不仅是pcr反应的强烈干扰物；同时大量的红细胞细胞膜也会导致磁珠的聚集，导致提取的失败。除了提前“去除红细胞外”，一些研究者也通过利用酸碱、高盐或高温加热等方法使得血红蛋白变性沉淀，从而去除血红蛋白对提取核酸的影响。然而，这些方法依然是需要复杂的操作，并不适合急诊人员使用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种全血样本核酸快速提取的试剂及提取方法，解决现有技术中全血样本核酸提取存的耗时长、操作复杂、设备依赖等技术问题。

2、本发明公开了一种全血样本核酸快速提取的试剂，包括裂解纯化液a，所述裂解纯化液a为含有0.2-0.4mol/l硫酸铵[(nh4)2so4]的dmso(二甲基亚砜)溶液，所述dmso溶液体积浓度为30％-90％。

3、进一步的，所述裂解纯化液a中dmso溶液体积浓度为80％-90％(二甲基亚砜)。

4、进一步的，所述硫酸铵为过饱和状态。

5、一种全血样本核酸快速提取试剂的制备方法，使用无核酸酶水和dmso(二甲基亚砜)配制成dmso溶液，随后向该溶液中加入硫酸铵直到析出，形成饱和硫酸铵[(nh4)2so4]溶液。

6、一种全血样本核酸快速提取的方法，向裂解纯化液a中加入全血样本，充分振荡后静置，然后离心，所得上清即为核酸提取产物。

7、进一步的，所述静置的时间为10-15分钟。

8、进一步的，所述离心条件为在7000g以上离心至少1分钟。

9、进一步的，所述离心条件为12000g离心2分钟。

10、进一步的，所述裂解纯化液a与全血样本体积比为2：1。

11、与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：

12、1.传统的提取方式为硅胶膜或磁珠法。需要进行去除红细胞后再进行裂解、吸附和洗脱等多步骤操作，这些操作步骤不仅繁琐耗时，容易出错，且多次开盖，依赖于设备。本发明方法将所有操作合在一管中进行，仅需加一次试剂，避免了多次操作。该改进不仅节约了时间，降低了出错概率，还进一步降低了提取过程中污染的风险，实现了全血样本的快速提取。

技术特征：

1.一种全血样本核酸快速提取的试剂，其特征在于：包括裂解纯化液a，所述裂解纯化液a为含有0.2-0.4mol/l硫酸铵的dmso溶液，所述dmso溶液体积浓度为30％-90％。

2.根据权利要求1所述的一种全血样本核酸快速提取的试剂，其特征在于：所述裂解纯化液a中dmso溶液体积浓度为80％-90％。

3.根据权利要求1所述的一种全血样本核酸快速提取的试剂，其特征在于：所述硫酸铵为过饱和状态。

4.一种全血样本核酸快速提取试剂的制备方法，其特征在于：使用无核酸酶水和dmso配制成dmso溶液，随后向该溶液中加入硫酸铵即得。

5.根据权利要求4所述的一种全血样本核酸快速提取试剂的制备方法，其特征在于：所述硫酸铵加入到过饱和状态。

6.一种全血样本核酸快速提取的方法，其特征在于：使用权利要求1-3任一项所述的一种全血样本核酸快速提取的试剂或权利要求4-5任一项所述的一种全血样本核酸快速提取试剂的制备方法制得的提取试剂对全血样本核酸进行提取。

7.根据权利要求6所述的一种全血样本核酸快速提取的方法，其特征在于：具体步骤为向裂解纯化液a中加入全血样本，充分振荡后静置，然后离心，所得上清即为核酸提取产物。

8.根据权利要求7所述的一种全血样本核酸快速提取的方法，其特征在于：所述静置的时间为10-15分钟。

9.根据权利要求7所述的一种全血样本核酸快速提取的方法，其特征在于：所述离心条件为在7000g以上离心至少1分钟；优选的所述离心条件为12000g离心2分钟。

10.根据权利要求7所述的一种全血样本核酸快速提取的方法，其特征在于：所述裂解纯化液a与全血样本体积比为2：1。

技术总结本发明涉及全血样本提取技术领域，具体涉及一种全血样本核酸快速提取的试剂及提取方法，包括裂解纯化液A，所述裂解纯化液A为含有0.2‑0.4mol/L硫酸铵[(NH<subgt;4</subgt;)<subgt;2</subgt;SO<subgt;4</subgt;]的DMSO(二甲基亚砜)溶液，所述DMSO体积浓度为30％‑90％。本发明方法将所有操作合在一管中进行，仅需加一次试剂，避免了多次操作。该改进不仅节约了时间，降低了出错概率，还进一步降低了提取过程中污染的风险，实现了全血样本的快速提取。技术研发人员：黄坚,苏景和,金雅康受保护的技术使用者：苏州大学附属第一医院技术研发日：技术公布日：2024/10/10