甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物及其制备方法和其在制备抗肿瘤化疗药物增敏剂中的应用

：本发明涉及甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物及其制备方法和其在制备抗肿瘤化疗药物增敏剂中的应用。

背景技术

0、背景技术：

1、恶性肿瘤一直是威胁人类健康的重要杀手。尽管针对肿瘤治疗的研究在不断进步和深入，但目前临床治疗恶性肿瘤的方法仍主要是通过使用化疗药物诱导肿瘤细胞dna损伤从而杀伤肿瘤细胞。拓扑异构酶1(top1)抑制剂常作为治疗肺癌、结肠癌和膀胱癌等肿瘤化疗药物在临床上广泛使用，如拓扑替康(tpt)、伊立替康(irt)和羟基喜树碱(hcpt)等。这些药物在治疗初期通常可取得明显的疗效，但随着治疗时间的延长，肿瘤细胞对该类药物容易产生耐药，从而大大降低了药物的治疗效果。有研究表明，tpt给药治疗后会导致dna修复酶—酪氨酸-dna磷酸二酯酶1(tdp1)表达上升，导致在治疗一段时间后机体对相同剂量的药物产生耐受。海洋真菌由于具有高度的物种多样性，已逐渐成为重要的药源分子补给站。从海洋真菌中寻找具有高效、低毒、可与肿瘤化疗药物协同起效的tdp1抑制剂，有望成为克服肿瘤耐药性的重要策略，为肿瘤的治疗提供更多可能性。

技术实现思路

0、技术实现要素：

1、本发明的目的是提供一种甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物及其制备方法和其在制备抗肿瘤化疗药物增敏剂中的应用。

2、本发明是通过以下技术方案予以实现的：

3、甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物，其结构式如下：

4、

5、所述的甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物的制备方法，是从保藏编号为gdmcc60476的海洋软珊瑚曲霉属真菌aspergillus sp.egf 15-0-3的大米培养基中制备得到，具体步骤如下：

6、1)菌株活化：将菌种接种到含有pda培养基的平板上，置恒温培养箱中28℃培养2-3天，待平板长出单菌落后用接种环挑取单菌落转移至装有pdb培养基的三角瓶中，在28℃的全温摇瓶柜中165r/min培养2-3天，获得活化的aspergillus sp.egf15-0-3的种子培养液；

7、2)菌株发酵：吸取该活化的种子液加入装有大米培养基的三角烧瓶中，在28℃下静置培养35天，与空白培养基对比观察是否有明显的菌株生长，成长完毕便停止发酵，用etoac灭活后摇床振摇提取然后减压浓缩得到etoac相浸膏；

8、3)将步骤2)得到的etoac相浸膏经硅胶柱层析，以vpe:vetoac＝50:1～1：1的石油醚-乙酸乙酯体系梯度洗脱后用乙酸乙酯和纯甲醇体系冲柱，tlc薄层跟踪，结合nmr和lc-ms共同分析后得到8个流份fr.1-fr.8，其中fr.6根据nmr和lc-ms分析为甾体类吲哚二酮哌嗪杂合物富集部位，选择进行进一步的mci柱层析，以v甲醇:v水＝40％-100％甲醇-水体系为洗脱剂进行粗分离得到8个亚流份：fr.6-1-fr.6-8，其中fr.6-8进行凝胶柱层析，以v甲醇:v二氯甲烷＝7：3的甲醇-二氯甲烷体系为洗脱液，再进行硅胶柱层析，以vpe:vetoac＝50:1～10：1的石油醚-乙酸乙酯体系为洗脱剂得到fr.6-8-1-fr.6-8-10，其中fr.6-8-9经反复hplc液相制备，得到化合物1-4。

9、pda培养基：葡萄糖2.0％、土豆汁200g/l、琼脂10％、土豆汁用陈海水作溶剂配制，盐度3.5％，ph自然。

10、pdb为pda中不加琼脂的培养基。

11、大米培养基：大米100g、蛋白胨0.3％、盐海水100ml。

12、发明人首次从真菌aspergillus sp.egf15-0-3大米培养基中制备得到甾体类吲哚二酮哌嗪生物碱杂合类化合物，化合物1-4为自然界中首次发现的新骨架化合物。也首次发现该类杂合物具有tdp1抑制活性。因此本发明还保护所述化合物作为酪氨酸-dna磷酸二酯酶1(tdp1)抑制剂的应用。

13、本发明首次发现了该类杂合物对肿瘤化疗药物的化疗增敏活性。

14、因此本发明还保护所述化合物在制备抗肿瘤化疗药物增敏剂中的应用。

15、所述肿瘤包括包括人肺癌、人乳腺癌和人宫颈癌。

16、抗肿瘤化疗药物包括拓扑替康(tpt)、伊立替康(irt)和羟基喜树碱(hcpt)。

17、本发明还保护一种组合物，包含所述甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物与肿瘤化疗药物tpt。

18、本发明的有益效果如下：

19、1)首次从真菌aspergillus sp.egf15-0-3大米培养基中制备得到甾体类吲哚二酮哌嗪生物碱杂合类化合物，该化合物为自然界中首次发现的新骨架化合物。

20、2)首次发现该类杂合物具有酪氨酸-dna磷酸二酯酶1(tdp1)抑制活性，可作为tdp1抑制剂应用。

21、3)首次发现了该类杂合物对肿瘤化疗药物拓扑替康tpt的化疗增敏活性，为开发新型天然抗肿瘤联用抑制剂提供药源分子和数据支撑，对海洋曲霉属真菌资源的开发利用具有重要意义。

22、本发明的保藏编号为gdmcc 60476的海洋软珊瑚曲霉属真菌aspergillus sp.egf15-0-3已公开于cn 111139185 b，曲霉属真菌及其应用。

技术特征：

1.甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物，其特征在于，其结构式如下：

2.权利要求1所述甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物的制备方法，其特征在于，从保藏编号为gdmcc 60476的海洋软珊瑚曲霉属真菌aspergillus sp.egf 15-0-3的大米培养基中制备得到，具体步骤如下：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，pda培养基：葡萄糖2.0％、土豆汁200g/l、琼脂10％、土豆汁用陈海水作溶剂配制，盐度3.5％，ph自然。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，pdb为pda中不加琼脂的培养基。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，大米培养基：大米100g、蛋白胨0.3％、盐海水100ml。

6.权利要求1所述甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物作为酪氨酸-dna磷酸二酯酶1抑制剂的应用。

7.权利要求1所述甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物在制备抗肿瘤化疗药物增敏剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括包括人肺癌、人乳腺癌和人宫颈癌。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，抗肿瘤化疗药物为拓扑替康、伊立替康和羟基喜树碱。

10.一种组合物，包含权利要求1所述甾体-吲哚生物碱杂合二聚体类化合物与肿瘤化疗药物拓扑替康。

技术总结本发明公开了一种甾体‑吲哚生物碱杂合二聚体类化合物及其制备方法和其在制备抗肿瘤化疗药物增敏剂中的应用，首次从真菌Aspergillus sp.EGF15‑0‑3大米培养基中制备得到甾体类吲哚二酮哌嗪生物碱杂合类化合物，该化合物为自然界中首次发现的新骨架化合物。首次发现该类杂合物具有Tdp1抑制活性，可作为酪氨酸‑DNA磷酸二酯酶1(Tdp1)抑制剂应用。首次发现了该类杂合物对肿瘤化疗药物拓扑替康TPT的化疗增敏活性，为开发新型天然抗肿瘤联用抑制剂提供药源分子和数据支撑，对海洋曲霉属真菌资源的开发利用具有重要意义。技术研发人员：韦霞,张翠仙,张泽坤,林彦安受保护的技术使用者：广西医科大学技术研发日：技术公布日：2025/1/6