用于检测疟疾的组合物和方法与流程

本公开涉及体外诊断领域。在该领域内，本发明涉及使用引物和探针对可能存在于样品中的靶核酸的扩增和检测，并且特别是对疟疾寄生虫的包括序列变异和/或个体突变的靶核酸的扩增、检测和定量。本发明进一步提供了含有用于疟疾的扩增和检测的引物和探针的反应混合物和试剂盒。

背景技术：

1、疟疾是一种通过蚊子传播的传染性疾病，其会影响人类和其他动物。疟疾是一种由单细胞微生物疟原虫(plasmodium)寄生虫引起的疾病，其在被受感染的雌性按蚊(anopheles mosquitoe)叮咬后传播给人类。疟疾的最初症状包括发热、头痛和寒战，并且可以使用现有的抗疟疾药物进行治疗。如果不加以治疗，可能会发展成严重的疟疾，其症状包括贫血、脑型疟疾和呼吸窘迫，此可能最终导致死亡。

2、根据2018年世界卫生组织(who)报告，在87个国家/地区中大约有32亿人处于患有疟疾的风险，这些国家主要位于热带和亚热带地区。每年大约有2.19亿例疟疾病例，其中这些病例中有92％来自非洲，5％位于东南亚，并且2％位于东地中海国家。美国每年出现约1,700例病例。疟疾每年还导致435,000人死亡，其中这些死亡人数中有266,000人为五岁以下的儿童。正在努力根除和预防疟疾，其包括经杀虫剂处理的蚊帐、增加患者获得医疗保健服务的机会、药物开发疫苗和转基因蚊子(gmo)。尽管美国不被视为疟疾的流行国家，但往返美国的全球旅行可能导致输入性疟疾病例的增加。

3、已知有至少五种疟原虫物种会感染人类：恶性疟原虫(p.falciparum)、间日疟原虫(p.vivax)、卵形疟原虫(p.ovale)、三日疟原虫(p.malariae)和诺氏疟原虫(p.knowlesi)。取决于疟原虫的物种，临床表现可能会有所不同。恶性疟原虫是最致命的物种，已知其会导致受感染的红细胞快速细胞分裂，此会导致贫血并阻塞通向脑部的血管。疟原虫的生命周期较复杂，该寄生虫在两种状态之间交替变化，即在蚊子体内进行有性繁殖和在人类宿主体内进行无性繁殖。症状由寄生虫在红内期(blood stage)期间引起，并且可在蚊虫叮咬后7-30天之间呈现。间日疟原虫和卵形疟原虫可以在红外期(liver stage)时保持休眠状态，几个月或甚至几年后重新活化。

4、在供血和献血方面，在美国南部和东部严重短缺的情况下，维持充足的供血已经存在重大挑战。疟疾给供血和献血带来了额外的问题。例如，虽然美国被认为是非流行国家，但全球旅行可能导致输入性疟疾病例的增加，从而影响美国内的供血情况。在全球范围内，目前对于疟疾采取的维持供血安全的策略包括：(1)选择性检测，和(2)献血者延期，其中美国遵循献血者延期政策。通常，基于对筛查问卷(基于个人经历、居住地和旅行)的回答使献血者延期。在美国，有估计191,000名献血者被暂时延期(1-3年)，其中大部分延期归因于前往流行地区旅行。此外，延期捐献会对供血产生负面影响，这是因为大约仅有1/4的被暂时延期的献血者在延期时段结束后实际返回进行后续献血。由于无论疟疾状况如何而基于问卷回答排除捐献，献血者延期对供血产生负面影响。另一方面，与献血者延期相比，选择性检测减少了对供血库存的影响。献血的选择性检测也基于问卷回答，但选择性检测政策允许根据献血者的疟疾状况缩短延期时间和使献血者恢复献血。在有选择性检测政策的国家，检测通过酶免疫测定法来完成。至少三个国家已在献血中实施了疟疾检测：法国、英国和澳大利亚。在法国，在一年的3百万次捐献中，有约180,000次捐献被检测，而在这180,000次所检测的捐献中，有约3,300次(或1.8％)呈阳性。

5、存在多种针对疟疾的诊断和筛查方法。通过对吉姆萨(giemsa)染色的血涂片进行显微镜检查来检测疟疾允许进行物种鉴别，价格低廉，并且仍然是金标准。然而，显微镜检查不能够进行高通量筛查/检测。采用免疫层析方法检测疟疾抗原的快速诊断测试(rdt)速度快且价格低廉，但表现出低灵敏度(200-5,000p/μl)，并且仍需要通过显微镜检查进行确认。检测血清中抗疟原虫抗体的酶免疫测定法(eia)被广泛使用，但也表现出低灵敏度。相比之下，核酸测试(nat)适用于高通量筛查/检测，并且高度灵敏(<1p/μl)。因此，由于其高灵敏度和高通量能力，核酸测试代表了用以针对疟疾检测和筛查血液样品的最佳方法。然而，目前还没有可用于筛查献血的体外诊断核酸测试。由此，本领域需要一种快速、可靠、特异性且灵敏的方法以检测和定量生物学样品(如血液)中疟疾的存在情况。

6、在分子诊断领域，核酸的扩增和检测具有相当重要的意义。此类方法可用于检测任何数量的微生物，例如病毒和细菌。最突出和广泛使用的扩增技术是聚合酶链式反应(pcr)。其他扩增技术包括连接酶链反应、聚合酶连接酶链反应、gap-lcr、修复链反应、3sr、nasba、链置换扩增(sda)、转录介导扩增(tma)和qβ-扩增。用于基于pcr的分析的自动化系统通常应用在同一反应容器中的pcr过程中实时检测产物扩增。这种方法的关键是使用带有报告基团或标记的修饰寡核苷酸。

7、缺乏用于检测疟疾的可靠、快速、价格低廉且灵敏的方法威胁着献血者供应的安全。因此，本领域需要一种快速、可靠、特异性且灵敏的方法以检测和定量生物学样品(如血液)中疟疾的存在情况。本公开涉及一种基于聚合酶链式反应(pcr)的测定法，其用于检测和筛选血液样品和捐献物中的所有疟原虫属(恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、诺氏疟原虫和三日疟原虫)。

技术实现思路

1、本公开中的某些实施方案涉及用于例如通过单个试管或容器中的实时聚合酶链式反应(pcr)进行疟疾寄生虫(诸如疟原虫)的多重检测和定量来快速检测生物学样品或非生物学样品中疟疾寄生虫(诸如疟原虫)的存在或不存在的方法。实施方案包括检测疟疾寄生虫(诸如疟原虫)的方法，其包括执行至少一个循环步骤，该至少一个循环步骤可以包括扩增步骤和杂交步骤。此外，实施方案包括经设计用于检测单个试管或容器中的疟疾寄生虫(诸如疟原虫)的引物、探针和试剂盒。

2、一个实施方案涉及一种用于检测样品中的一种或多种疟疾寄生虫物种的方法，该方法包括：(a)执行扩增步骤，该扩增步骤包括使该样品与一组或多组寡核苷酸引物接触以产生扩增产物，如果该一种或多种疟疾寄生虫物种的靶核酸存在于该样品的话；(b)执行杂交步骤，该杂交步骤包括使一种或多种寡核苷酸探针与该扩增产物接触，如果该一种或多种疟疾寄生虫物种的靶核酸存在于该样品的话；以及(c)检测该扩增产物的存在或不存在，其中该扩增产物的存在指示该样品中该一种或多种疟疾寄生虫物种的存在，并且其中该扩增产物的不存在指示该样品中该一种或多种疟疾寄生虫物种的不存在；并且其中该一组或多组寡核苷酸引物和该一种或多种寡核苷酸探针包括：(1)一组寡核苷酸引物，该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:1和2的核酸序列或其互补序列；以及含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸探针：seq id no:3的核酸序列或其互补序列；和/或(2)一组寡核苷酸引物，该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:13和14的核酸序列或其互补序列；以及含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸探针：seq id no:15的核酸序列或其互补序列。在另一个实施方案中，一种或多种疟疾寄生虫物种属于疟原虫属。在另一个实施方案中，属于疟原虫属的一种或多种疟疾寄生虫物种为恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫和/或诺氏疟原虫。在另一个实施方案中，样品是生物学样品。在另一个实施方案中，生物学样品为全血、呼吸道样本、尿液、粪便样本、血液样本、血浆、皮肤拭子、鼻拭子、伤口拭子、血培养物、皮肤、或软组织感染。在另一个实施方案中，生物学样品为全血。在另一个实施方案中，一种或多种寡核苷酸探针中的至少一者是经标记的。在另一个实施方案中，一种或多种寡核苷酸探针中的至少一者用供体荧光部分和对应的受体部分进行标记。在另一个实施方案中，步骤(c)进一步包括检测一种或多种寡核苷酸探针的供体荧光部分与受体部分之间荧光共振能量转移(fret)的存在或不存在，其中荧光的存在或不存在指示样品中一种或多种疟疾寄生虫物种的存在或不存在。

3、另一实施方案涉及一种用于检测样品中一种或多种疟疾寄生虫物种的第一靶核酸和/或第二靶核酸的方法，该方法包括：(a)执行扩增步骤，该扩增步骤包括使该样品与一组或多组寡核苷酸引物接触以产生扩增产物，如果该一种或多种疟疾寄生虫物种的该第一靶核酸和/或该第二靶核酸存在于该样品的话；(b)执行杂交步骤，该杂交步骤包括使一种或多种寡核苷酸探针与该扩增产物接触，如果该一种或多种疟疾寄生虫物种的该第一靶核酸和/或该第二靶核酸存在于该样品的话；以及(c)检测该扩增产物的存在或不存在，其中该扩增产物的存在指示该样品中该一种或多种疟疾寄生虫物种的存在，并且其中该扩增产物的不存在指示该样品中该一种或多种疟疾寄生虫物种的不存在；并且其中该一组或多组寡核苷酸引物和该一种或多种寡核苷酸探针包括：(1)用于该一种或多种疟疾寄生虫物种的第一靶核酸的一组寡核苷酸引物以及寡核苷酸探针，其中该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:1和2的核酸序列或其互补序列；并且其中该寡核苷酸探针含有以下项或由以下项组成：seq id no:3的核酸序列或其互补序列；以及(2)用于该一种或多种疟疾寄生虫物种的该第二靶核酸的一组寡核苷酸引物以及寡核苷酸探针，其中该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seqid no:13和14的核酸序列或其互补序列；并且其中该寡核苷酸探针含有以下项或由以下项组成：seq id no:15的核酸序列或其互补序列。另一实施方案涉及一种用于检测样品中一种或多种疟疾寄生虫物种的方法，该方法包括：(a)执行扩增步骤，该扩增步骤包括使该样品与一组或多组寡核苷酸引物接触以产生扩增产物，如果该一种或多种疟疾寄生虫物种的靶核酸存在于该样品的话；(b)执行杂交步骤，该杂交步骤包括使一种或多种寡核苷酸探针与该扩增产物接触，如果该一种或多种疟疾寄生虫物种的该靶核酸存在于该样品的话；以及(c)检测该扩增产物的存在或不存在，其中该扩增产物的存在指示该样品中该一种或多种疟疾寄生虫物种的存在，并且其中该扩增产物的不存在指示该样品中该一种或多种疟疾寄生虫物种的不存在；并且其中该一组或多组寡核苷酸引物和该一种或多种寡核苷酸探针包括：一组寡核苷酸引物，该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:1和2的核酸序列或其互补序列；以及含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸探针：seq id no:3的核酸序列或其互补序列。另一相关实施方案涉及一种用于检测样品中一种或多种疟疾寄生虫物种的方法，该方法包括：(a)执行扩增步骤，该扩增步骤包括使该样品与一组或多组寡核苷酸引物接触以产生扩增产物，如果该一种或多种疟疾寄生虫物种的靶核酸存在于该样品的话；(b)执行杂交步骤，该杂交步骤包括使一种或多种寡核苷酸探针与该扩增产物接触，如果该一种或多种疟疾寄生虫物种的该靶核酸存在于该样品的话；以及(c)检测该扩增产物的存在或不存在，其中该扩增产物的存在指示该样品中该一种或多种疟疾寄生虫物种的存在，并且其中该扩增产物的不存在指示该样品中该一种或多种疟疾寄生虫物种的不存在；并且其中该一组或多组寡核苷酸引物和该一种或多种寡核苷酸探针包括：一组寡核苷酸引物，该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:13和14的核酸序列或其互补序列；以及含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸探针：seq id no:15的核酸序列或其互补序列。在另一个实施方案中，一种或多种疟疾寄生虫物种属于疟原虫属。在另一个实施方案中，属于疟原虫属的一种或多种疟疾寄生虫物种为恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫和/或诺氏疟原虫。在另一个实施方案中，样品是生物学样品。在另一个实施方案中，生物学样品为全血、呼吸道样本、尿液、粪便样本、血液样本、血浆、皮肤拭子、鼻拭子、伤口拭子、血培养物、皮肤、或软组织感染。在另一个实施方案中，生物学样品为全血。在另一个实施方案中，一种或多种寡核苷酸探针中的至少一者是经标记的。在另一个实施方案中，一种或多种寡核苷酸探针中的至少一者用供体荧光部分和对应的受体部分进行标记。

4、另一实施方案涉及一种用于检测可能存在于样品中的一种或多种疟疾寄生虫物种的试剂盒，该试剂盒包括扩增试剂，该扩增试剂包含dna聚合酶和核苷酸单体中的至少一者，以及一组或多组寡核苷酸引物和一种或多种寡核苷酸探针，其中该一组或多组寡核苷酸引物和该一种或多种寡核苷酸探针包括：(1)一组寡核苷酸引物，该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:1和2的核酸序列或其互补序列；以及含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸探针：seq id no:3的核酸序列或其互补序列；和/或(2)一组寡核苷酸引物，该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:13和14的核酸序列或其互补序列；以及含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸探针：seq id no:15的核酸序列或其互补序列。在另一个实施方案中，该一组或多组寡核苷酸引物和该一种或多种寡核苷酸探针包括：(1)一组寡核苷酸引物，该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:1和2的核酸序列或其互补序列；以及含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸探针：seq id no:3的核酸序列或其互补序列；以及(2)一组寡核苷酸引物，该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:13和14的核酸序列或其互补序列；以及含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸探针：seq id no:15的核酸序列或其互补序列。在另一个实施方案中，一种或多种疟疾寄生虫物种属于疟原虫属。在另一个实施方案中，属于疟原虫属的一种或多种疟疾寄生虫物种为恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫和/或诺氏疟原虫。在另一个实施方案中，样品是生物学样品。在另一个实施方案中，生物学样品为全血、呼吸道样本、尿液、粪便样本、血液样本、血浆、皮肤拭子、鼻拭子、伤口拭子、血培养物、皮肤、或软组织感染。在另一个实施方案中，生物学样品为全血。在另一个实施方案中，一种或多种寡核苷酸探针中的至少一者是经标记的。在另一个实施方案中，至少一种或多种寡核苷酸探针用供体荧光部分和对应的受体部分进行标记。

5、另一实施方案涉及一种用于检测可能存在于样品中的一种或多种疟疾寄生虫物种的第一靶核酸和/或第二靶核酸的试剂盒，该试剂盒包括扩增试剂，该扩增试剂包含dna聚合酶和核苷酸单体中的至少一者，以及一组或多组寡核苷酸引物和一种或多种寡核苷酸探针，其中该一组或多组寡核苷酸引物和该一种或多种寡核苷酸探针包括：(1)用于该一种或多种疟疾寄生虫物种的第一靶核酸的一组寡核苷酸引物以及寡核苷酸探针，其中该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:1和2的核酸序列或其互补序列；并且其中该寡核苷酸探针含有以下项或由以下项组成：seq id no:3的核酸序列或其互补序列；以及(2)用于该一种或多种疟疾寄生虫物种的该第二靶核酸的一组寡核苷酸引物以及寡核苷酸探针，其中该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:13和14的核酸序列或其互补序列；并且其中该寡核苷酸探针含有seq id no:15的核酸序列或其互补序列。另一实施方案涉及一种用于检测可能存在于样品中的一种或多种疟疾寄生虫物种的试剂盒，该试剂盒包括扩增试剂，该扩增试剂包含dna聚合酶和核苷酸单体中的至少一者，以及一组或多组寡核苷酸引物和一种或多种寡核苷酸探针，其中该一组或多组寡核苷酸引物和该一种或多种寡核苷酸探针包括：一组寡核苷酸引物，该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seqid no:1和2的核酸序列或其互补序列；以及含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸探针：seq id no:3的核酸序列或其互补序列。另一实施方案涉及一种用于检测可能存在于样品中的一种或多种疟疾寄生虫物种的试剂盒，该试剂盒包括扩增试剂，该扩增试剂包含dna聚合酶和核苷酸单体中的至少一者，以及一组或多组寡核苷酸引物和一种或多种寡核苷酸探针，其中该一组或多组寡核苷酸引物和该一种或多种寡核苷酸探针包括：一组寡核苷酸引物，该一组寡核苷酸引物包括含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸引物：seq id no:13和14的核酸序列或其互补序列；以及含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸探针：seq idno:15的核酸序列或其互补序列。在另一个实施方案中，一种或多种疟疾寄生虫物种属于疟原虫属。在另一个实施方案中，属于疟原虫属的一种或多种疟疾寄生虫物种为恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫和/或诺氏疟原虫。在另一个实施方案中，样品是生物学样品。在另一个实施方案中，生物学样品为全血、呼吸道样本、尿液、粪便样本、血液样本、血浆、皮肤拭子、鼻拭子、伤口拭子、血培养物、皮肤、或软组织感染。在另一个实施方案中，生物学样品为全血。在另一个实施方案中，一种或多种寡核苷酸探针中的至少一者是经标记的。在另一个实施方案中，一种或多种寡核苷酸探针中的至少一者用供体荧光部分和对应的受体部分进行标记。

6、进一步提供了含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸：选自seq id no:1-39的核苷酸序列，特别是含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸：seq id no:1至3和13至15的核酸序列或其互补序列，该寡核苷酸具有100个或更少的核苷酸。本公开还提供了一种寡核苷酸，其包括与seq id no:1-39中的一者具有至少70％(例如，至少75％、80％、85％、90％或95％等)序列同一性的核酸，特别是含有以下项或由以下项组成的寡核苷酸：seq id no:1至3和13至15的核酸序列或其互补序列，该寡核苷酸具有100个或更少的核苷酸。一般来讲，本文公开的这些寡核苷酸可以为寡核苷酸引物核酸、寡核苷酸探针核酸等。在某些方面，寡核苷酸具有40个或更少的核苷酸(例如，35个或更少的核苷酸、30个或更少的核苷酸、25个或更少的核苷酸、20个或更少的核苷酸、15个或更少的核苷酸等)。在一些方面，寡核苷酸包含至少一种修饰的核苷酸，例如以相对于未修饰的核苷酸改变核酸杂交稳定性。任选地，寡核苷酸包含至少一个标记和任选地至少一个猝灭剂部分。在一些实施方案中，寡核苷酸包括至少一种保守修饰的变异。特定核酸序列的“保守修饰的变异”或简称为“保守变异”是指编码相同或基本上相同的氨基酸序列的那些核酸，或者在核酸不编码氨基酸序列的情况下，是指基本上相同的序列。本领域技术人员将认识到，在编码的序列中改变、添加或缺失单个核苷酸或小百分比的核苷酸(通常小于5％，更通常小于4％、2％或1％)的各个取代、缺失或添加是“保守修饰的变异”，其中所述改变导致氨基酸的缺失、氨基酸的添加或氨基酸被化学上相似的氨基酸取代。

7、一方面，扩增可以使用具有5'至3'核酸酶活性的聚合酶。因此，供体荧光部分和受体部分，例如猝灭剂，沿着寡核苷酸探针的长度可以彼此相距不超过5至20个核苷酸(例如，在7或10个核苷酸内)。在另一方面，寡核苷酸探针包括允许形成二级结构的核酸序列。这种二级结构的形成可使得第一和第二荧光部分之间的空间临近。根据该方法，寡核苷酸探针上的第二荧光部分可以是猝灭剂。

8、本公开还提供了用于检测来自个体的生物学样品中疟疾寄生虫(诸如疟原虫)或疟疾寄生虫(诸如疟原虫)核酸的存在或不存在的方法。这些方法可用于检测血浆中疟疾寄生虫(诸如疟原虫)核酸的存在或不存在，用于血液筛查和诊断测试。此外，本领域技术人员可使用相同的测试来评定尿液和其他样品类型，以检测疟疾寄生虫(诸如疟原虫)核酸和/或对其进行定量。此类方法通常包括进行至少一个循环步骤，该循环步骤包括扩增步骤和染料结合步骤。通常，扩增步骤包括使样品与多对寡核苷酸引物接触以产生一种或多种扩增产物，如果核酸分子存在于样品的话，并且染料结合步骤包括使扩增产物与双链dna结合染料接触。此类方法还包括检测存在或不存在双链dna结合染料结合到扩增产物中，其中存在结合指示样品中存在疟疾寄生虫(诸如疟原虫)核酸，并且其中不存在结合指示样品中不存在疟疾寄生虫核酸。代表性的双链dna结合染料是溴化乙锭。其他核酸结合染料包括dapi、hoechst染料、和花青染料，例如和green。此外，此类方法还可包括确定扩增产物和双链dna结合染料之间的解链温度，其中解链温度确认疟疾寄生虫(包括疟原虫)核酸的存在或不存在。

9、还提供了一种用于对疟疾寄生虫(诸如疟原虫)的一种或多种核酸进行检测和/或定量的试剂盒。该试剂盒可包括：对扩增基因靶标具有特异性的一组或多组寡核苷酸引物；和对检测扩增产物具有特异性的一种或多种可检测寡核苷酸探针。

10、在一个方面，该试剂盒可以包括已经用供体和相应的受体部分(例如，另一种荧光部分或黑暗猝灭剂)标记的寡核苷酸探针，或者可以包括用于标记探针的荧光部分。该试剂盒还可包括核苷三磷酸、核酸聚合酶、和核酸聚合酶功能所需的缓冲液。该试剂盒还可以包括使用寡核苷酸引物、寡核苷酸探针和荧光部分来检测样品中疟疾寄生虫(诸如疟原虫)核酸的存在或不存在的包装插页和说明。

11、除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语所具有的含义与本发明所属领域普通技术人员通常理解的含义相同。尽管在本主题的实践或测试中，可使用与本文所述的那些方法和材料类似或等同的方法和材料，但下文描述了合适的方法和材料。此外，材料、方法和实例仅是说明性的，而不旨在限制。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用以其全文合并于本文。如有歧义，以本专利说明书(包括定义)为准。

12、本发明的一个或多个实施方案的细节在附图和下面的说明书中阐述。本发明的其他特征、目的和优点将从附图和详细描述以及权利要求中显而易见。