一种缓解西瓜连作障碍的复合生防菌剂的制备方法及应用

本发明属于植物保护，具体涉及一种缓解西瓜连作障碍的复合生防菌剂的制备方法及应用。

背景技术：

1、西瓜是世界十大水果之一，是人们在夏季必备的消暑佳品。我国西瓜的产出量和消费量位居世界第一，但是由连作障碍导致西瓜减产的问题也日益突出。长期连作会引起土壤理化性状恶化和土壤微生物区系异常，造成土传病害加剧、植株生长发育迟缓、果实变小和品质变差等问题。hatsuda等人(1961)在西瓜残体和根系分泌物中也检测到的苯甲酸、肉桂酸、香豆酸和阿魏酸，是化感作用研究中报道比较多的酚酸，对西瓜根系生长具有毒害作用，长期积累在土壤中会造成连作障碍。西瓜枯萎病菌(fusarium oxysporumf.sp.niveum，fon)和西瓜根系分泌的自毒物质是导致西瓜连作障碍发生的主要诱因。在发生严重的时期，该障碍可引起80％以上的损失，甚至造成绝收。

2、目前，缓解西瓜连作障碍的有效措施主要以轮作和间套作、物理和化学防治为主，但都存在着不同程度的缺陷。如采用轮作和间套作、嫁接等费工费时，不利于机械化操作。大量化学农药的使用会造成环境污染，病原菌耐药性增强。也有部分采用生防菌缓解连作障碍，但单一生防菌定殖能力差、菌株稳定性不强，防治也十分困难。因此，研究和开发低毒、高效和稳定的复合生防菌剂用于缓解西瓜连作障碍，对控制农残量、提高西瓜产量和保持西瓜产业持续健康发展具有十分重要的意义。

3、芽孢杆菌属和微小杆菌属是两种常见的细菌，目前常用于有机废物降解及污水处理。例如，201711130671.x公开了一株生物降解蛋白质功能菌sl-10(bacillus subtilis)属于芽孢杆菌属，具有降解包括羽毛、鳞片及人发中角蛋白的功能，降解效果明显。202010302332.0公开了一株微小杆菌菌属菌zj-s001-12，该菌株综合性能突出，具有良好的环境耐受性，能高效分解污染水体的总磷、氨氮和cod。目前尚未见解淀粉芽孢杆菌和乙酰微小杆菌复配具有缓解西瓜连作障碍的相关报道。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的不足，本发明目的在于提供一种用于缓解西瓜连作障碍的复合生防菌剂(ewn23+pnc25)及其制备方法，所述复合生防菌剂作用于西瓜根际，能够有效降解自毒物质，抑制西瓜枯萎病菌的生长，对缓解西瓜连作障碍具有显著效果。

2、本发明可通过如下技术方案实现：

3、一种微生物组合，由保藏号为gdmcc no.60111的解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)ewn23和保藏号为gdmcc no.60108的乙酰微小杆菌(exiguobacteriumacetylicum)pnc25组成。

4、本发明提供了一种用于缓解西瓜连作障碍的复合生防菌剂，菌种组分为解淀粉芽孢杆菌ewn23，保藏编号为gdmcc no.60111，以及乙酰微小杆菌pnc25，保藏编号为gdmccno.60108，均保藏于广东省微生物菌种保藏中心。

5、所述的复合生防菌剂，其特征在于，由菌株ewn23和pnc25的发酵液1:(0.8-1.2)复配而成，其中所述的解淀粉芽孢杆菌ewn23和乙酰微小杆菌pnc25的活菌浓度均为1×108～109cfu/ml。

6、所述的复合生防菌剂，其制备方法为，将保存于-80℃的ewn23和pnc25两种菌株分别接种到lb固体培养基活化，培养时间24h；将培养后的两种菌株，分别接种至lb液体培养基中，然后置于恒温振荡器内，培养12h，制成种子液；将两种菌株的种子液按接种量5％，培养24h，获得单一生防菌剂；按照解淀粉芽孢杆菌ewn23和乙酰微小杆菌pnc25的体积比为1:1复配，制成复合生防菌剂。所述的培养温度优选28～30℃，振荡速率为180～200r/min。

7、本发明所述的解淀粉芽孢杆菌(保藏号gdmcc no.60111)与乙酰微小杆菌pnc25(保藏号gdmcc no.60108)的在降解西瓜自毒物质中的应用。

8、本发明所述的复合生防菌剂在防治西瓜枯萎病中的应用。

9、所述的复合生防菌剂在防治西瓜枯萎病时可在田间西瓜苗期时使用，将复合生防菌剂灌入根部即可。

10、本发明所述的复合生防菌剂在西瓜促生壮苗中的应用

11、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

12、(1)本发明提供的复合生防菌剂结合了解淀粉芽孢杆菌ewn23和乙酰微小杆菌pnc25的生防特性，两种菌株能够发挥抑制西瓜枯萎病菌生长的协同作用，在实验条件下表现出优异的防治西瓜枯萎病菌的生防作用，对缓解西瓜连作障碍具有显著效果。

13、(2)本发明提供的复合生防菌剂能够有效利用西瓜根际土壤中的自毒物质，通过降解自毒物质，提高复合菌剂生长繁殖量，达到抑菌解毒的双重功能，同时也提高了植株抗病能力，最终实现增产增质。

14、(3)本发明提供的复合生防菌剂培养条件简单、使用方便、见效快、对环境无毒害、兼容性强，具有良好的应用前景，对于生物防治缓解西瓜连作障碍具有重要意义。

技术特征：

1.一种微生物组合，其特征在于由保藏号为gdmcc no.60111的解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)ewn23和保藏号为gdmcc no.60108的乙酰微小杆菌(exiguobacterium acetylicum)pnc25组成。

2.权利要求1所述的微生物组合在制备防治西瓜枯萎病的复合生防菌剂中的应用。

3.一种用于缓解西瓜连作障碍的复合生防菌剂，其特征在于由保藏编号为gdmccno.60111的解淀粉芽孢杆菌ewn23发酵液和保藏编号为gdmcc no.60108的乙酰微小杆菌pnc25发酵液组成。

4.权利要求3所述的复合生防菌剂的制备方法，其特征在于，由保藏编号为gdmccno.60111的解淀粉芽孢杆菌ewn23发酵液或菌悬液和保藏编号为gdmcc no.60108的乙酰微小杆菌pnc25发酵液或菌悬液按照体积比1：(0.8-1.2)复配而成，其中解淀粉芽孢杆菌ewn23和乙酰微小杆菌pnc25的活菌浓度均为1×108～109cfu/ml。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的发酵液由解淀粉芽孢杆菌ewn23和乙酰微小杆菌pnc25分别接种至lb液体培养基中培养，即可获得所述发酵液。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述培养指在ph值7.0～7.2的lb液体培养基中，培养温度28～30℃，摇床振荡速率180～200rpm培养24h。

7.权利要求3所述的复合生防菌剂在西瓜促生壮苗中的应用。

8.权利要求3所述的复合生防菌剂在防治西瓜枯萎病中的应用。

9.权利要求3所述的复合生防菌剂在缓解西瓜连作障碍中的应用。

10.权利要求3所述的复合生防菌剂在降解西瓜自毒物质中的应用；所述的自毒物质为阿魏酸。

技术总结本发明公开了一种缓解西瓜连作障碍的复合生防菌剂的制备方法及其应用。菌种组分为解淀粉芽孢杆菌EWN23，保藏编号为GDMCCNO.60111，以及乙酰微小杆菌PNC25，保藏编号为GDMCCNO.60108，均保藏于广东省微生物菌种保藏中心。本发明提供的复合生防菌剂作用于西瓜根际，能够有效降解自毒物质，抑制西瓜枯萎病菌的生长，表现出良好的抑菌解毒双重功能，对缓解西瓜连作障碍具有显著效果。同时，本发明所述的复合生防菌对西瓜具有良好的促生壮苗作用，可用于制备西瓜壮苗剂。技术研发人员：郑丽,李观盛,黄杰豪,黄石连,喻国辉,刘青,吴健雄受保护的技术使用者：仲恺农业工程学院技术研发日：技术公布日：2024/8/20