一种高产修复肝损伤富硒灵芝三萜和多糖的灵芝发酵物及其发酵方法与流程

本发明属于发酵，具体涉及一种高产修复肝损伤富硒灵芝三萜和多糖的灵芝发酵物及其发酵方法。

背景技术：

1、灵芝自古以来就是中国的名贵中药，在中国具有数千年的应用历史，它是一种隶属于真菌门、担子菌纲、多孔菌科、灵芝属的药用真菌。现代的很多研究表明，从灵芝中提取的灵芝三萜具有抗病毒、镇静止痛、抑制肿瘤细胞、抑制组织胺释放等多种功能。近年来，国内外的专家学者对灵芝三萜、灵芝酸a、多糖等的分离纯化、结构、生物活性进行了大量的研究，在高产灵芝活性物质种质资源的创制方面也开展了大量的研究工作。

2、专利cn 108251490 a公开了一种提高液体发酵灵芝菌丝体中灵芝酸a的发酵培养基及发酵方法，该发明中所用发酵培养基的组成包括一定质量的玉米粉、黄豆粉、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素b、茉莉酸甲酯和水。灵芝菌丝体在该发酵培养基中发酵，能够延长发酵时间，得到高含量灵芝酸a的发酵灵芝菌丝体产物。

3、专利cn 108864319 a公开了一种灵芝固态发酵生产活性多糖的方法及所用基质，该基质原料包括一定质量份的碳源、麸皮、玉米粉、白糖、石膏粉和石灰。发酵步骤为：将所述的基质装入料袋中灭菌，然后接入灵芝菌种进行培养，培养完成得灵芝固态发酵菌棒，再从所述的灵芝固态发酵菌棒中提取得到多糖。该发明的灵芝固态发酵培养基质配方，适合生产灵芝多糖，多糖提取率高，抗氧化活性强，生产周期短、不受栽培季节限制、生产成本低，适合大规模的工厂化生产和推广。

4、但以上专利中仅是通过调控灵芝发酵时所用的培养基配方来提高灵芝活性成分，但这只能通过外在调控促进灵芝三萜的增长，且具有一定的局限性，目标产物的提高幅度有限，与实际应用需求差距较大。因此，研发一种成本低、易操作的发酵工艺来提高灵芝发酵物中目标活性成分的含量具有重要意义。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的不足，本发明提供了一种高产修复肝损伤富硒灵芝三萜和多糖的灵芝发酵物及其发酵方法，该发酵工艺简单易操作、成本低，得到的灵芝发酵物中具有高含量的硒、灵芝总三萜和多糖，且具有较好的提高免疫力、抗炎、修复肝损伤的效果。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、本发明第一方面提供了一种高产修复肝损伤富硒灵芝三萜和多糖的灵芝发酵物的发酵工艺，包括以下步骤：

4、(1)将玉米、黄精、西洋参蒸熟后，干燥、粉碎，加入30-45wt％的纯水，得到混合料；

5、(2)向步骤(1)中得到的混合料中加入蛋白胨、低聚果糖、柠檬酸三铵、磷酸二氢钾、硫酸镁和维生素b1，灭菌后得到发酵基料；

6、(3)向步骤(2)中得到发酵基料中加入14-甲基十六烷酸后，接种赤芝菌种子液，在有氧环境中进行10-30天的发酵，得到发酵培养物；

7、(4)将步骤(3)中得到的发酵培养物烘干至恒重、膨化熟制、粉碎，得到灵芝发酵物。

8、本发明选择高邮红菌作为发酵菌种，并调配一种固体发酵基料，向其中加入一定量的14-甲基十六烷酸后，在特定的发酵环境下对玉米、黄精和西洋参进行发酵，得到一种高含量的硒、灵芝总三萜和多糖的灵芝发酵物。

9、在一些实施方式中，所述玉米、黄精、西洋参的质量比为(5-9)：(2-3)：1。

10、优选地，所述玉米、黄精、西洋参的质量比为7：2.5：1。

11、黄精在药性上味甘性平，含有多糖、皂苷、黄酮、木脂素、氨基酸、醌类化合物、维生素、生物碱及多种微量元素等多种成分，西洋参是一种性质偏寒的参类药材，其主要成分为人参皂苷，具有增强免疫力、降血压等功效。本发明中选择黄精和西洋参搭配玉米作为发酵底物，通过赤芝菌对其进行发酵，将原料中的大分子活性物质转化为易被生物体吸收的小分子物质，并促进更多的有益成分的产生来增强灵芝发酵物的综合效果。

12、在一些实施方式中，所述步骤(2)中蛋白胨、低聚果糖、柠檬酸三铵、磷酸二氢钾、硫酸镁和维生素b1分别为混合料的1-1.5wt％、0.5-1wt％、0.01-0.1wt％、0.2-0.3wt％、0.1-0.2wt％、0.01-0.05wt％。

13、优选地，所述步骤(2)中蛋白胨、低聚果糖、柠檬酸三铵、磷酸二氢钾、硫酸镁和维生素b1分别为混合料的1.2wt％、0.8wt％、0.05wt％、0.24wt％、0.16wt％、0.03wt％。

14、申请人发现通过向培养基中加入蛋白胨、低聚果糖、柠檬酸三铵、磷酸二氢钾、硫酸镁和维生素b1，调节培养基料中碳源、氮源、维生素等营养元素的含量，有利于高邮红芝菌丝的生长和其对玉米、黄精、西洋参的发酵，进而提高发酵产物中生物多糖、灵芝三萜合其它功能物质的含量。

15、在一些实施方式中，所述步骤(3)中14-甲基十六烷酸在发酵基料中的浓度为0.1-0.2g/kg。

16、优选地，所述步骤(3)中14-甲基十六烷酸在发酵基料中的浓度为0.15g/kg。

17、申请人发现在发酵基料中加入一定量的14-甲基十六烷酸能够提高发酵物中灵芝三萜和多糖的含量。这是因为14-甲基十六烷酸能够调控赤芝菌的代谢通路，诱导赤芝菌细胞中与灵芝三萜、多糖合成相关的细胞色素p450单加氧酶基因、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a还原酶基因和角鲨烯合成酶基因的表达，显著促进赤芝菌中灵芝三萜和多糖的分泌。

18、在一些实施方式中，所述步骤(3)中赤芝菌种子液的接种量为发酵基料的10-20wt％；所述赤芝菌种子液的浓度为(1-10)×107cfu/ml。

19、优选地，所述步骤(3)中赤芝菌种子液的接种量为发酵基料的15wt％；所述赤芝菌种子液的浓度为(4-7)×107cfu/ml。

20、在一些实施方式中，所述赤芝菌种子液为高邮红芝菌种子液；所述高邮红芝菌购自高邮市科学食用菌研究所。

21、申请人意外发现采用的高邮红芝菌的生物学特性优异，对发酵环境具有较强的适应能力。在发酵基料中接种一定量的高邮红芝菌，它能够在一定的温度、湿度环境下迅速繁殖生长，并且对原料有很好的发酵效果，使得到的发酵物中有效成分含量较高。

22、在一些实施方式中，所述步骤(3)中发酵的温度为25-35℃、ph为6-7。

23、优选地，所述步骤(3)中发酵的温度为30℃、ph为6.8。

24、在一些实施方式中，所述步骤(4)中烘干的温度为55-65℃。

25、优选地，所述步骤(4)中烘干的温度为60℃。

26、申请人发现严格控制发酵工艺的温度、ph和发酵时间有利于提高灵芝发酵物中粗多糖、灵芝总三萜和硒的含量，提高其调节免疫力、抗炎的效果。

27、本发明第二方面提供了一种高产修复肝损伤富硒灵芝三萜和多糖的灵芝发酵物的发酵工艺得到的灵芝发酵物。

28、在一些实施方式中，所述灵芝发酵物的粗多糖(以葡萄糖计)含量≥6.4×103mg/100g、灵芝总三萜含量≥2.37g/100g、硒含量≥0.03mg/kg。

29、与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

30、1、本发明通过简单易操作、成本低的微生物发酵工艺，使得到的灵芝发酵物中具有高含量的硒、灵芝总三萜和多糖，该灵芝发酵物具有较好的调节免疫力、抗炎和修复肝损伤的效果。

31、2、本发明选择高邮红菌作为发酵菌种，并调配一种固体发酵基料，在特定的发酵环境下对玉米、黄精和西洋参进行发酵，能够促进大分子活性物质转化为易被生物体吸收的小分子物质，增强灵芝发酵物的综合效果。

32、3、本发明在发酵过程中加入一定量的14-甲基十六烷酸，该物质能够调控赤芝菌的代谢通路，诱导赤芝菌细胞中与灵芝三萜、多糖合成相关的功能酶基因的表达，显著提高发酵物中灵芝三萜和多糖的含量。