RNA分子的制作方法

背景技术：

1、水痘带状疱疹病毒(vzv)(也称为人类疱疹病毒3(hhv-3))是在儿童中引起水痘或鸡痘且以后复发为带状疱疹(herpes zoster)或带状疱疹(shingles)的人类病原体。在各个国家中已研发及许可两种用以预防带状疱疹的疫苗。第一种疫苗为(merck&co.,inc.,kenilworth,nj,usa)，一种减毒活vzv疫苗。us fda在2006年审批通过然而截至2020年11月，不再在美国出售。第二种疫苗为(glaxosmithkline,rockville,md,usa)，一种as01b作为佐剂的vzv ge次单元蛋白疫苗。us fda在2017年审批通过

2、在美国，每年出现大约一百万个带状疱疹病例，且感染过鸡痘的所有人中大约有30％以后会出现带状疱疹。全球带状疱疹的发病率持续增加。因此，鉴于带状疱疹的高盛行率，仍需要用于预防带状疱疹的改良疫苗。

技术实现思路

1、本公开内容提供用于治疗受试者的免疫原性组合物及方法，所述方法包括施用rna分子(例如免疫原性rna多核苷酸)，所述rna分子编码包含水痘带状疱疹病毒(vzv)蛋白质、其免疫原性变异体、或vzv蛋白质的免疫原性片段或其免疫原性变异体(例如抗原肽或蛋白质)的氨基酸序列(例如免疫原性抗原)。因此，免疫原性抗原包含vzv蛋白质的用于在受试者中诱导针对vzv的免疫反应的表位。施用编码免疫原性抗原的rna多核苷酸以(在通过适当目标细胞表达多核苷酸之后)提供用于诱导(例如刺激、初免和/或扩增)免疫反应(例如抗体和/或免疫效应细胞)的抗原。在一个方面中，待根据本公开内容诱导的免疫反应为b细胞介导的免疫反应，例如抗体介导的免疫反应。另外或可替代地，待根据本公开内容诱导的免疫反应可为t细胞介导的免疫反应。在一个方面中，免疫反应为抗vzv免疫反应。

2、本文所描述的免疫原性组合物包含rna分子，所述rna分子包含可在接受者细胞中翻译成蛋白质的rna(作为活性成分)。除编码抗原序列的野生型或密码子优化序列以外，rna分子可含有一个或多个针对rna关于稳定性及翻译效率的最大效力而优化的结构组件(5'端帽、5'utr、3'utr、多聚腺苷酸尾)。在一个方面中，rna分子含有所有这些组件。在一些方面中，rna分子的各尿苷经n1-甲基假尿苷(ψ)置换(例如经修饰的rna；modrna)。本文所描述的rna分子可与脂质和/或蛋白质一起调配、包封于脂质和/或蛋白质中或与脂质和/或蛋白质复合以产生用于施用的rna-颗粒(例如脂质纳米颗粒(lnp))。在一个方面中，本文所描述的rna分子与脂质一起调配、包封于脂质中或与脂质复合以产生用于施用的rna-脂质纳米颗粒(例如rna-lnp)。在一个方面中，本文所描述的rna分子与蛋白质一起调配、包封于蛋白质中或与蛋白质复合以用于施用。在一个方面中，本文所描述的rna分子与脂质及蛋白质一起调配、包封于脂质及蛋白质中、与脂质及蛋白质复合以用于施用。若使用不同rna分子的组合，则rna分子可一同与脂质和/或蛋白质一起调配或分开与脂质和/或蛋白质一起调配以产生用于施用的rna-颗粒。

3、本公开内容提供rna分子及rna-lnp，其包括至少一个编码vzv抗原的开放阅读框(orf)。在一些方面中，vzv抗原为vzv多肽。在一些方面中，vzv多肽为vzv糖蛋白。在一些方面中，vzv糖蛋白为vzv gk、gn、gc、gb、gh、gm、gl、gi或ge。在一些方面中，vzv糖蛋白为vzvge。在一些方面中，vzv多肽为全长vzv多肽、经截短的vzv多肽、vzv多肽的片段或vzv多肽的变异体。在一些方面中，vzv多肽包含至少一个突变。

4、本公开内容提供rna分子及rna-lnp，其包括至少一个编码表1的vzv多肽的orf。在一些方面中，vzv多肽与表1的氨基酸序列中的任一个，例如与seq id no:1至11中的任一个具有、具有至少、或具有至多90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性。在一些方面中，vzv多肽包含选自seq id no:1至11的氨基酸序列。在一些方面中，vzv多肽由表1的氨基酸序列中的任一个，例如由seq id no:1至11中的任一个组成。

5、本公开内容提供rna分子及rna-lnp，其包含至少一个由表2的至少一个dna核酸转录的orf。在一些方面中，rna分子包含由核酸序列转录的orf，该核酸序列与表2的核酸序列中的任一个，例如与seq id no:12至145中的任一个具有、具有至少、或具有至多90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性。在一些方面中，rna分子由选自seq id no:12至145的核酸序列转录。在一些方面中，rna分子包含由核酸序列转录的orf，该核酸序列由表2的核酸序列中的任一个，例如由seq id no:12至145中的任一个组成。

6、本公开内容进一步提供rna分子及rna-lnp，其包含至少一个包含表3的rna核酸序列的orf。在一些方面中，rna分子包含与表3的核酸序列中的任一个，例如与seq id no:146至279中的任一个具有、具有至少、或具有至多90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核酸序列。在一些方面中，rna分子包含选自seq idno:146至279的核酸序列。在一些方面中，rna分子包含由表3的核酸序列中的任一个，例如由seq id no:146至279中的任一个组成的核酸序列。在一些方面中，seq id no:146至279中的任一个的各尿苷经n1-甲基假尿苷(ψ)置换(例如经修饰的rna；modrna)。

7、本公开内容进一步提供rna分子及rna-lnp，其包括5'非翻译区(5'-utr)和/或3'非翻译区(3'-utr)。在一些方面中，rna分子包括5'非翻译区(5'-utr)。在一些方面中，5'utr包含选自seq id no:281(seq id no:280-dna；seq id no:282-具有ψ的rna)及312至313中的任一个的序列。在一些方面中，5'utr包含与seq id no:281及312至313中的任一个具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的序列。在一些方面中，5'utr包含选自seq id no:281及312至313中的任一个的序列。在一些方面中，5'utr包含由seq id no:281及312至313中的任一个组成的序列。

8、在一些方面中，rna分子及rna-lnp包括3'非翻译区(3'-utr)。在一些方面中，3'utr包含选自seq id no:284(seq id no:283-dna；seq id no:285-具有ψ的rna)、314及317(seq id no:318-具有ψ的rna)中的任一个的序列。在一些方面中，3'utr包含与seq idno:284、314及317中的任一个具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的序列。在一些方面中，3'utr包含选自seq id no:284、314及317中的任一个的序列。在一些方面中，3'utr包含由seq id no:284、314及317中的任一个组成的序列。

9、本公开内容进一步提供rna分子及rna-lnp，其包括5'端帽部分。在一些方面中，5'端帽部分为(3'ome)-m27,3'-ogppp(m12'-o)apg。本公开内容进一步提供rna分子及rna-lnp，其包括3'多聚腺苷酸尾。在一些方面中，多聚腺苷酸尾包含选自seq id no:287(seq id no:286-dna；seq id no:288-具有ψ的rna)及315(seq id no:316-具有ψ的rna)中的任一个的序列。在一些方面中，多聚腺苷酸尾包含选自seq id no:287及315中的任一个的序列+/-1个腺苷(a)或+/-2个腺苷(a)。

10、在一些方面中，rna分子包括5'utr及3'utr。在一些方面中，rna分子包括5'端帽、5'utr及3'utr。在一些方面中，rna分子包括5'端帽、5'utr、3'utr及多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包括5'utr、3'utr及多聚腺苷酸尾。在一些方面中，5'utr、3'utr及多聚腺苷酸尾中的任一个的各尿苷经n1-甲基假尿苷(ψ)置换(例如经修饰的rna；modrna)。

11、本公开内容提供如表5中所描述的rna分子。在一些方面中，rna分子包含seq idno:281或312的5'utr、seq id no:146的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seqid no:287或315的多聚腺苷酸尾(ge wt)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:147的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ge wt co1)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:148的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ge wt co2)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seqid no:149的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms3co1)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:150的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms3co2)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:151的vzvorf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms4 co1)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:152的vzv orf、seqid no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms4 co2)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:153的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms5 co1)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:154的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms5 co2)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:155的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms5 co2 v2)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:156的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms6 co1)。在一些方面中，rna分子包含seq idno:281或312的5'utr、seq id no:157的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seqid no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms6 co2)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:158的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms8co1)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:159的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms9 co1)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seqid no:160的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms9 co2)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:161的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms10co1)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:162的vzvorf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms10 co2)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:163的vzv orf、seqid no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms10 co3)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:164的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms11 co1)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:165的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms11co2)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:166的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms12 co1)。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:167的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾(ms12 co2)。在一些方面中，rna分子包含seq idno:281或312的5'utr、seq id no:168的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seqid no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:169的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:170的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:171的vzv orf、seq idno:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:172的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:173的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq idno:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:174的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:175至238中的任一个的vzv orf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:239的vzvorf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:240至254中的任一个的vzvorf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:255至267中的任一个的vzvorf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，rna分子包含seq id no:281或312的5'utr、seq id no:268至279中的任一个的vzvorf、seq id no:284或317的3'utr和/或seq id no:287或315的多聚腺苷酸尾。在一些方面中，vzv orf进一步包含本文所描述的终止密码子。在一些方面中，多聚腺苷酸尾长度可含有+1/-1a或+2/-2a。在一些方面中，rna分子的各尿苷经n1-甲基假尿苷(ψ)置换(例如经修饰的rna；modrna)。

12、本公开内容进一步提供rna分子，其包括至少一个由密码子优化dna产生的开放阅读框。在一些方面中，开放阅读框包含至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、约50％至75％、或约55％至70％的g/c含量。在一些方面中，g/c含量为约58％，为约66％或约62％。本公开内容进一步提供rna分子，其编码vzv多肽，所述vzv多肽位于细胞膜中、位于高尔基体中和/或锚定在膜中且分泌。本公开内容进一步提供rna分子，其包含经稳定化的rna。本公开内容进一步提供rna分子，其包括具有至少一个经修饰的核苷酸的rna(例如经修饰的rna；modrna)。在一些方面中，经修饰的核苷酸为假尿苷、n1-甲基假尿苷、n1-乙基假尿苷、2-硫代尿苷、4'-硫代尿苷、5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿苷、2-硫代-1-甲基-1-去氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-假尿苷、2-硫代-5-氮杂-尿苷、2-硫代-二氢假尿苷、2-硫代-二氢尿苷、2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、4-硫代-假尿苷、5-氮杂-尿苷、二氢假尿苷、5-甲氧基尿苷或2'-o-甲基尿苷。在一些方面中，经修饰的核苷酸为n1-甲基假尿苷(ψ)。

13、本公开内容进一步提供rna分子，其为信使rna(mrna)或自复制rna。在一些方面中，rna为mrna。

14、本公开内容进一步提供免疫原性组合物，其包括本文所描述的rna分子。在此类免疫原性组合物中，rna分子可调配于脂质纳米颗粒(lnp)中、包封于lnp中、与lnp复合、结合至lnp或吸附在lnp上(例如vzv rna-lnp)。在一些方面中，脂质纳米颗粒包括阳离子脂质、聚乙二醇化(pegylated)脂质及至少一种结构性脂质(例如中性脂质和类固醇或类固醇类似物)中的至少一种。

15、在一些方面中，脂质纳米颗粒包括阳离子脂质。在一些方面中，阳离子脂质为(4-羟丁基)氮杂二烷基(azanediyl))双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)(alc-0315)。

16、在一些方面中，脂质纳米颗粒包括聚合物缀合脂质。在一些方面中，脂质纳米颗粒包括聚乙二醇化脂质，也被称为peg-脂质。在一些方面中，聚乙二醇化脂质为经peg修饰的磷脂酰乙醇胺、经peg修饰的磷脂酸、经peg修饰的神经酰胺(例如peg-cerc14或peg-cerc20)、经peg修饰的二烷基胺、经peg修饰的二酰基甘油、经peg修饰的二烷基甘油、2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-二(十四烷基)乙酰胺、二醇脂质(包括peg-c-domg、peg-c-dma、peg-s-dmg、n-[(甲氧基聚乙二醇)2000)氨甲酰基]-1,2-二肉豆蔻酰氧基丙-3-氨(peg-c-dma)及peg-2000-dmg)、聚乙二醇化二酰基甘油(peg-dag)(诸如1-(单甲氧基-聚乙二醇)-2,3-二肉豆蔻酰基甘油(peg-dmg))、聚乙二醇化磷脂酰乙醇胺(peg-pe)、peg丁二酸酯二酰基甘油(peg-s-dag)(诸如4-o-(2',3'-二(十四酰氧基)丙基-1-o-((邻甲氧基(聚乙氧基)乙基)丁二酸酯(peg-s-dmg))、聚乙二醇化神经酰胺(peg-cer)或peg二烷氧基丙基氨基甲酸酯(诸如共聚-甲氧基(聚乙氧基)乙基-n-(2,3二(十四烷氧基)丙基)氨基甲酸酯或2,3-二(十四烷氧基)丙基-n-(u>-甲氧基(聚乙氧基)乙基)氨基甲酸酯)。在一些方面中，聚乙二醇化脂质为2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-二(十四烷基)乙酰胺(alc-0159)。

17、在一些方面中，脂质纳米颗粒包括至少一种结构性脂质，诸如中性脂质。在一些方面中，中性脂质是选自1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(dspc)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)、二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(dppc)、二油酰基磷脂酰甘油(dopg)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(dppg)、二油酰基-磷脂酰乙醇胺(dope)、棕榈酰油酰基磷脂酰胆碱(popc)、棕榈酰油酰基-磷脂酰乙醇胺(pope)及二油酰基-磷脂酰乙醇胺4-(n-顺丁烯二酰亚氨基甲基)-环己烷-1甲酸酯(dope-mal)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(dppe)、二肉豆蔻酰基磷酸乙醇胺(dmpe)、二硬脂酰基-磷脂酰乙醇胺(dspe)、16-o-单甲基pe、16-o-二甲基pe、18-1-反式pe、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(sope)和/或1,2-二反油酰基(dielaidoyl)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(反式dope)。在一些方面中，中性脂质为1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(dspc)。

18、在一些方面中，脂质纳米颗粒包括第二结构性脂质，诸如类固醇或类固醇类似物。在一些方面中，类固醇或类固醇类似物为胆固醇。

19、在一些方面中，脂质纳米颗粒具有约1至约500nm的平均直径。

20、在一些方面中，rna-lnp免疫原性组合物为液体rna-lnp组合物，其包含编码如本文所公开的vzv多肽的rna分子/多核苷酸，该rna分子/多核苷酸的浓度为至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90mg/ml或其中任何两者之间的浓度，优选为约0.01至0.09mg/ml，该rna分子/多核苷酸包封于具有包含以下的脂质组成的lnp中：约0.8至0.95mg/ml的浓度的阳离子脂质、约0.05至0.15mg/ml的浓度的聚乙二醇化脂质、约0.1至0.25mg/ml的浓度的第一结构性脂质及约0.3至0.45mg/ml的浓度的第二结构性脂质。在一些方面中，液体组合物进一步包含缓冲液组合物，其包含约0.15至0.3mg/ml的浓度的第一缓冲液、约1.25至1.4mg/ml的浓度的第二缓冲液及约95至110mg/ml的浓度的稳定剂。

21、在特定方面中，液体rna-lnp免疫原性组合物包含编码如本文所公开的vzv多肽的rna分子/多核苷酸，该rna分子/多核苷酸的浓度为至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90mg/ml或其中任何两者之间的浓度，优选为约0.01至0.09mg/ml，该rna分子/多核苷酸包封于具有包含以下的脂质组成的lnp中：约0.8至0.95mg/ml的浓度的((4-羟丁基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)(alc-0315)、约0.05至0.15mg/ml的浓度的2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-二(十四烷基)乙酰胺(alc-0159)、约0.1至0.25mg/ml的浓度的1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(dspc)及约0.3至0.45mg/ml的浓度的胆固醇。在一些方面中，液体组合物进一步包含含有约0.1至0.3mg/ml的浓度的氨丁三醇及约1.25至1.4mg/ml的浓度的tris盐酸(hcl)的tris缓冲液组合物及约95至110mg/ml的浓度的蔗糖。

22、在一些方面中，液体rna-lnp免疫原性组合物包含编码如本文所公开的vzv多肽的rna分子/多核苷酸，该rna分子/多核苷酸的浓度为至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90mg/ml或其中任何两者之间的浓度，优选为约0.01至0.09mg/ml，该rna分子/多核苷酸包封于lnp中；且该液体rna-lnp免疫原性组合物进一步包含约5至15mm tris缓冲液、ph约7.0至8.0的200至400mm蔗糖。

23、在一些方面中，rna-lnp免疫原性组合物为冻干(复原)rna-lnp组合物，其包含编码如本文所公开的vzv多肽的rna分子/多核苷酸，该rna分子/多核苷酸的浓度为至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90mg/ml或其中任何两者之间的浓度，优选为约0.01至0.09mg/ml，该rna分子/多核苷酸包封于具有包含以下的脂质组成的lnp中：约0.8至0.95mg/ml的浓度的阳离子脂质、约0.05至0.15mg/ml的浓度的聚乙二醇化脂质、约0.1至0.25mg/ml的浓度的第一结构性脂质及约0.3至0.45mg/ml的浓度的第二结构性脂质。在一些方面中，冻干组合物进一步包含约0.01与0.15mg/ml的浓度的第一缓冲液、约0.5与0.65mg/ml的浓度的第二缓冲液、约35至50mg/ml的浓度的稳定剂及约5至15mg/ml的浓度的用于复原的盐稀释剂。在特定方面中，冻干组合物在约0.6至0.75ml的盐稀释剂中复原。冻干rna-lnp组合物中的浓度是在复原后测定。

24、在特定方面中，冻干(复原)rna-lnp组合物包含编码如本文所公开的vzv多肽的rna多核苷酸，该rna多核苷酸的浓度为至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90mg/ml或其中任何两者之间的浓度，优选为约0.01至0.09mg/ml，该rna多核苷酸包封于具有以下脂质组成的lnp中：约0.8至0.95mg/ml的浓度的alc-0315、约0.05至0.15mg/ml的浓度的alc-0159、约0.1至0.25mg/ml的浓度的dspc及约0.3至0.45mg/ml的浓度的胆固醇；且该冻干(复原)rna-lnp组合物进一步包含含有约0.01与0.15mg/ml的浓度的氨丁三醇及约0.5与0.65mg/ml的浓度的tris hcl的tris缓冲液组合物、约35至50mg/ml的浓度的蔗糖及约5至15mg/ml的浓度的用于复原的氯化钠(nacl)稀释剂。在特定方面中，冻干组合物在约0.6至0.75ml的氯化钠中复原。冻干rna-lnp组合物中的浓度是在复原后测定。

25、本公开内容提供rna分子、rna-lnp及免疫原性组合物，其可以每次施用至少、至多、恰好以下剂量或其中任何两者之间的剂量向受试者施用：1μg、15μg、30μg、45μg、60μg、75μg、90μg、100μg或更高剂量的包封于lnp中的vzv rna。

26、本公开内容提供rna分子、rna-lnp及免疫原性组合物，其可以单次剂量施用。本公开内容进一步提供rna分子、rna-lnp及免疫原性组合物，其可施用两次(例如第0天及约第7天、第0天及约第14天、第0天及约第21天、第0天及约第28天、第0天及约第60天、第0天及约第90天、第0天及约第120天、第0天及约第150天、第0天及约第180天、第0天及约1个月后、第0天及约2个月后、第0天及约3个月后、第0天及约6个月后、第0天及约9个月后、第0天及约12个月后、第0天及约18个月后、第0天及约2年后、第0天及约5年后、或第0天及约10年后)。本公开内容进一步提供rna分子、rna-lnp及免疫原性组合物，其可在第0天及约2个月后施用两次。本公开内容进一步提供rna分子、rna-lnp及免疫原性组合物，其可在第0天及约6个月后施用两次。本公开内容进一步提供rna分子、rna-lnp及免疫原性组合物，其可施用三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次或更多次施用。在一些方面中，可能需要以1至5年之间隔周期性加强免疫来维持抗体的保护性水平。本公开内容进一步提供至少一次加强剂量的施用。

27、本公开内容提供一种在受试者中诱导针对vzv的免疫反应的方法，其包括向该受试者施用有效量的本文所描述的rna分子、rna-lnp和/或免疫原性组合物。本公开内容进一步提供本文所描述的rna分子、rna-lnp和/或免疫原性组合物的用途，其用于制备用于在受试者中诱导针对vzv的免疫反应的药剂。

28、本公开内容提供一种在受试者中诱导针对vzv的免疫反应的方法，其包括向该受试者施用有效量的包括至少一个编码vzv多肽的开放阅读框的rna分子和/或rna-lnp或本文所描述的组合物。本公开内容进一步提供包括至少一个编码vzv多肽的开放阅读框的rna分子和/或rna-lnp或本文所描述的组合物的用途，其用于制备用于在受试者中诱导针对vzv的免疫反应的药剂。

29、本公开内容提供一种在受试者中诱导针对vzv的免疫反应的方法，其包括向该受试者施用有效量的包括至少一个编码所关注基因的多肽的开放阅读框的rna分子和/或rna-lnp或本文所描述的组合物。本公开内容进一步提供包括至少一个编码所关注基因的多肽的开放阅读框的rna分子和/或rna-lnp或本文所描述的组合物的用途，其用于制备用于在受试者中诱导针对vzv的免疫反应的药剂。

30、本公开内容提供一种预防、治疗或改善受试者的感染、疾病或病况的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的rna分子、rna-lnp和/或免疫原性组合物。本公开内容进一步提供本文所描述的rna分子、rna-lnp和/或免疫原性组合物的用途，其用于制备用于预防、治疗或改善受试者的感染、疾病或病况的药剂。在一些方面中，该感染、疾病或病况与vzv相关。在一些方面中，该感染、疾病或病况为带状疱疹(herpes zoster)(带状疱疹(shingles))。在一些方面中，该感染、疾病或病况为疱疹后神经痛。

31、本公开内容提供一种预防、治疗或改善受试者的感染、疾病或病况的方法，其包括向受试者施用有效量的包括至少一个编码vzv多肽的开放阅读框的rna分子和/或rna-lnp或本文所描述的免疫原性组合物。本公开内容进一步提供包括至少一个编码vzv多肽的开放阅读框的rna分子和/或rna-lnp或本文所描述的免疫原性组合物的用途，其用于制备用于预防、治疗或改善受试者的感染、疾病或病况的药剂。在一些方面中，该感染、疾病或病况与vzv相关。在一些方面中，该感染、疾病或病况为带状疱疹(herpes zoster)或带状疱疹(shingles)。在一些方面中，该感染、疾病或病况为疱疹后神经痛。

32、本公开内容进一步提供一种预防、治疗或改善受试者的感染、疾病或病况的方法，其包括向受试者施用有效量的包括至少一个编码所关注基因的多肽的开放阅读框的rna分子和/或rna-lnp或本文所描述的免疫原性组合物。本公开内容进一步提供包括至少一个编码所关注基因的多肽的开放阅读框的rna分子和/或rna-lnp或本文所描述的免疫原性组合物的用途，其用于制备用于预防、治疗或改善受试者的感染、疾病或病况的药剂。在一些方面中，该感染、疾病或病况与所关注基因相关。

33、在一些方面中，受试者为、至少为或至多为小于约1岁、约1岁或更大、约5岁或更大、约10岁或更大、约20岁或更大、约30岁或更大、约40岁或更大、约50岁或更大、约60岁或更大、约70岁或更大、或更大。在一些方面中，受试者为约50岁或更大。

34、在一些方面中，受试者具有免疫能力。在一些方面中，受试者免疫功能不全。

35、本公开内容提供本文所描述的方法或用途，其中rna分子、rna-lnp和/或免疫原性组合物作为疫苗施用。

36、本公开内容提供本文所描述的方法或用途，其中rna分子、rna-lnp和/或免疫原性组合物通过皮内或肌肉内注射施用。

37、经考虑，本说明书中所论述的任何方面可关于本公开内容的任何方法或组合物实施，且反之亦然。此外，本公开内容的组合物可用于实现本公开内容的方法。

38、本公开内容的其他目标、特征及优势将自以下详细描述而变得显而易见。然而，应理解，详细描述和特定实例尽管指示本公开内容的特定方面，但仅以说明方式给出，因为在本公开内容的精神及范围内的各种变化及修改将由此详细描述而变得对本领域技术人员显而易见。