治疗卵巢癌的siRNA分子

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种用于抑制nek6基因的sirna分子及其在制备卵巢癌治疗药物中的用途。

背景技术：

1、卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌，列居第三位(gu等人，int j gynecol cancer,2017,27:77-84；kaldawy等人，gynecoloncol,2016,143:433-438.)。卵巢癌中以上皮癌最多见，卵巢上皮癌死亡率却占各类妇科肿瘤的首位，对妇女生命造成严重威胁。由于卵巢的胚胎发育、组织解剖及内分泌功能较复杂，早期症状不典型，术前鉴别卵巢肿瘤的组织类型及良恶性相当困难，卵巢上皮癌极易发生转移和侵袭，患者术中发现肿瘤局限于卵巢的仅占30％，早期诊断是一大难题(weidle等人，cancer genomics proteomics,2016,13:407-423；sulaiman等人，front pharmacol,2016,7:271)。卵巢恶性肿瘤尤其是上皮癌难以早期发现，病因不明，除遗传性卵巢癌外，没有一级预防措施，目前主张早诊早治，争取早期发现病变。因此，发现卵巢癌的早期诊断的生物学标记物和找到新的分子治疗靶标是攻克卵巢癌的首要任务，也是目前卵巢癌分子病理机制研究的热点。

2、nima相关激酶(never in mitosis gene a-related expressed kinase，nek)由11个成员组成，分别位于不同的细胞区域，参与细胞周期、细胞周期限制点、纤毛生物学、衰老、端粒维持和化学抗性等细胞生物学过程(kristensen等人，nat rev genet,2019,20(11):675-691)。nek激酶在细胞周期的g1期表达较低，s期和g2期表达增加，细胞进入有丝分裂后表达减少。与其他期相比，nek活性在s期和g2期达到高峰，并在g2/m期协助中心体分离。因此，nek的过表达导致癌细胞的染色体不稳定和非整倍体。此外，nek的过表达激活了几种致癌途径，使正常细胞通过获得增殖、侵袭和耐药能力转化为癌细胞(li等人，celldeath dis,2020,11(5):399)。由于nek激酶家族是研究较少的激酶家族之一，肿瘤发生的精确分子机制尚不清楚(liang等人，onco targets ther,2020,13:6279-6288)。最近的研究显示，nek家族在多种肿瘤中表达异常，如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、结直肠癌、肝细胞癌。然而，除了在乳腺癌(yan等人，front oncol,2021,11:1-13)中进行过较深入的研究之外，nek家族在促进其他恶性肿瘤生长的分子机制还未见报道。nima相关激酶6(nek6)是新近发现的一种能够调节细胞周期，并对多种信号通路激酶和转录因子有重要调控作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，属于nek家族的重要成员之一(cao等人，med(us),2018,97:1-5)。研究者发现nek6在133例乳腺癌标本中的表达均高于癌旁瘤组织，且nek6的高表达与乳腺癌的组织学分级、肿瘤大小和tnm分期有关，表明nek6表达是乳腺癌的独立预后预测因子，提示其可能成为乳腺癌的潜在治疗靶点(sabir等人，plos one,2015,10:1-19)。另外，研究者还发现nek6在前列腺癌中高表达，nek6过表达刺激了细胞骨架、分化和免疫信号通路(zhang等人，oncol rep,2018,39:1023-1033)，nek6在肝细胞肝癌、结肠癌、胃癌也有高表达。研究提示，nek6可以作为抑制肿瘤的靶向分子之一。

技术实现思路

1、发明人在临床医学研究中，意外地发现卵巢癌患者体内nek6基因高表达，并且与其他女性生殖器官恶性肿瘤比如子宫颈癌和子宫体癌患者相比，nek6基因表达水平更加显著，提示nek6不仅可以用作诊断卵巢癌的生物标志物之一，而且有可能作为卵巢癌治疗的标靶。

2、鉴于rna干扰技术已经成为一种新的基因治疗方法，并且已经有sirna获得fda批准上市，我们尝试了以nek6基因为靶点，设计并筛选出数百种sirna分子，发现其中一些能够特异性地抑制nek6表达，其中有两组sirna分子能有效地抑制nek6基因。因此，本发明的第一个目的在于提供一种用于抑制nek6基因的sirna分子，其由如下序列的正义链和反义链组成：

3、正义链：5’-cagaugaucaaguacuuuann-3’，

4、反义链：5’-uaaaguacuugaucaucugnn-3’，或者

5、正义链：5’-cggagaggacaguauggaann-3’，

6、反义链：5’-uuccauacuguccucuccgnn-3’。

7、其中，正义链和反义链中的n相同或者不同，并且各自独立地是胞嘧啶c、尿嘧啶u、鸟嘌呤g、腺嘌呤a、脱氧胞嘧啶dc、脱氧鸟嘌呤dg、脱氧腺嘌呤da或脱氧胸腺嘧啶dt；n代表n的个数，n是0、1或2。

8、在一种实施方式中，所述n为0，即

9、正义链：5’-cagaugaucaaguacuuua-3’(seq id no:1)，

10、反义链：5’-uaaaguacuugaucaucug-3’(seq id no:2)，或者

11、正义链：5’-cggagaggacaguauggaa-3’(seq id no:3)，

12、反义链：5’-uuccauacuguccucuccg-3’(seq id no:4)。

13、该sirna分子是该组sirna分子的主干序列。

14、在另一种优选的实施方式中，所述n为dt，n为2，即

15、正义链：5’-cagaugaucaaguacuuuadtdt-3’(seq id no:5)，

16、反义链：5’-uaaaguacuugaucaucugdtdt-3’(seq id no:6)，或者

17、正义链：5’-cggagaggacaguauggaadtdt-3’(seq id no:7)，

18、反义链：5’-uuccauacuguccucuccgdtdt-3’(seq id no:8)。

19、本发明的第二个目的在于提供上述任一sirna分子或二者的混合物在制备用于抑制nek6表达的药物中的用途。

20、可选地，上述药物是抗肿瘤药物。

21、优选地，所述药物是治疗卵巢癌药物。

22、其中sirna分子可以作为有效成分用于抑制卵巢癌细胞的生长、转移，或者促进卵巢癌细胞的凋亡。

23、本发明的第三个方面提供了一种治疗卵巢癌的药物，其包含上述的sirna分子作为药物活性成分。

24、可选地，上述药物是药物组合物，除了包含治疗有效量的上述sirna分子作为活性成分外，还包含药学上可接受的载体。

25、在一种实施方式中，上述药物是药物组合物，除了包含治疗有效量的上述sirna分子外，还包含一种以上其他用于抑制nek6表达的药物成分。

26、在另一种实施方式中，上述药物是药物组合物，除了包含治疗有效量的上述sirna分子外，还包含一种以上其他治疗卵巢癌的药物成分。

27、在一种实施方式中，上述药物是注射剂型或凝胶剂。所述注射剂型适用于皮下注射、肌内注射、静脉注射或者静脉滴注。

28、体外实验证明，本发明提供的sirna分子可特异性地下调nek6基因表达，达到抑制卵巢癌细胞生长、转移以及促进癌细胞凋亡的技术效果。