一种利用KLF5遗传标记检测牛胴体和肉质性状的方法

本发明公开了一种利用klf5基因遗传标记检测牛胴体肉质性状的方法，尤其涉及一种通过klf5的snps作为牛肉质和胴体性状分子标记的检测方法，属于选育预测和选育牛胴体和肉质性状。

背景技术：

1、随着饮食偏好的不断演变和健康意识的增强，人们对于牛肉的数量的需求逐年增加，牛肉的质量也得到了前所未有的关注。分子育种方法之一的标记辅助选择（marker-assisted selection，mas）的出现，为探索遗传多态性与肉质性状之间的联系开辟了新的可能性，是提高牛肉整体品质的首选工具。单核苷酸多态性（snps）则作为最常用的遗传标记形式之一在肉牛的遗传改良研究中被广泛应用。

2、kruppel样因子5 （klf5）是一个以锌指结构为特征的转录因子。牛klf5基因位于12号染色体上，由4个外显子组成（基因id：535702）。在脂肪细胞分化早期，ccaat/增强子结合蛋白β基因（c/ebp β）和ccaat/增强子结合蛋白δ基因（c/ebp δ）首先表达。这些基因各自的产物直接结合到牛klf5基因的启动子序列上，启动klf5基因的转录。由此产生的klf5蛋白结合过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因（ppar γ）的启动子序列，激活其转录并促进脂肪细胞的分化。此外，klf5可以与甾醇调节元件结合蛋白（srebp1）相互作用，增强srebp1介导的脂肪酸合成酶基因（fasn）的表达。这种相互作用可进一步促进脂肪细胞分化，影响细胞内脂肪酸代谢。

技术实现思路

1、本发明提供了一种klf5基因标记检测牛胴体和肉质性状的方法，利用klf5基因标记作为预测和选育肉牛胴体及肉质性状的方法，为遗传工作者的早期选育及改善肉品质从而进一步提高肉牛养殖的经济效益奠定基础。

2、本发明提供一种klf5基因分子标记在制备检测牛肉质和胴体性状试剂中的用途，所述的分子标记为牛klf5基因的snp1：g.47,816,704 g > cg，snp2：g.47,816,926 g > a，snp3：g.47,816,927 c > t，snp4：g.47,816,938 t > c，snp5：g.47,817,373 g > c，snp6：g.47,817,402 c > g。

3、本发明所述的klf5基因snp1-6作为检测牛肉质性状分子标记的方法，包括以下步骤：

4、第一步：用抗凝剂处理过的试管从需要检测的牛的颈静脉采集血样，并进行基因组dna提取；

5、第二步：根据已公开的牛klf5基因序列设计的一对引物如下：

6、klf5-f：５’gcacatccttgttcgttaccta３’；

7、klf5-r：５’cccaacggacttgtttgctaaa３’；

8、第三步：用牛基因组dna 1.4 μl、正、反向引物0.3 μl、ddh2o 8.0 μl、pcr mix10.0 μl共20.0 μl的混合物进行pcr。pcr混合物先在95℃预变性5 min，然后在95℃变性30s、55℃退火30 s、72℃延伸1 min，进行35次循环，最后在72℃孵育10 min，4℃保存。pcr产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳检测，4℃暂时保存；

9、第四步：采用sanger测序即一代测序技术对pcr产物进行测序，使用序列分析软件查找混池dna测序结果中klf5基因snp位点的位置，以单个牛的血液基因组dna为模板针对该片段再次进行pcr扩增，使用引物为该片段所对应的引物，扩增体系与混池dna扩增体系一致。最后根据分子标记snp1-6，对检测的牛个体样品进行基因型分析，并最后通过基因型评估和预测牛的胴体和肉质性状。

10、klf5基因可作为mas改良牛肉品质的重要候选基因之一，探究klf5基因多态性与牛胴体性状及肉质性状的相关性将有助于肉牛的遗传改良研究工作的开展。

11、本发明的积极效果在于：

12、获得并公开牛胴体、肉质和脂肪性状相关的klf5基因g.47,816,704 g > cg，g.47,816,926 g > a，g.47,816,927 c > t，g.47,816,938 t > c，g.47,817,373 g > c和g.47,817,402 c > g的6个snp作为分子遗传标记，检测方法快捷有效，可应用于牛肉用性能的早期选育，为肉牛的遗传育种研究和生产饲养早期选育奠定基础。

技术特征：

1.一种klf5基因分子标记在制备检测牛肉质和胴体性状制剂中的用途，其特征在于：

2.一种klf5基因单核苷酸多态性作为牛肉质性状分子标记的检测方法,其特征在于：

3.根据权利要求2所述的klf5基因snp1-6作为检测牛肉质性状分子标记的方法，包括以下步骤：

技术总结本发明公开一种利用KLF5基因标记辅助检测肉牛胴体和肉质性状的方法，利用PCR技术和DNA测序技术相结合，筛查和检测牛群体中KLF5基因突变位点和突变位点基因型。此方法仅通过扩增KLF5基因部分片段根据基因型早期评估肉牛胴体和肉质性状，效率高，成本低，为标记辅助选择提供了多个新的遗传分子标记，进一步加快肉牛性能的选育。技术研发人员：房希碧,杨润军,刘月,李康,卢鑫受保护的技术使用者：吉林大学技术研发日：技术公布日：2024/9/9