一种蛋白质电泳用PAGE凝胶试剂盒及其制备方法与流程

本发明涉及蛋白质检测，具体涉及一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒及其制备方法。

背景技术：

1、page凝胶，即聚丙烯酰胺凝胶，是以丙烯酰胺为基质的一种常用电泳技术，主要用于蛋白质的分离。传统的page凝胶由丙烯酰胺和n,n'-亚甲基双丙烯酰胺在过硫酸铵和促凝剂四甲基乙二胺的作用下聚合交联而成。在聚合过程中，四甲基乙二胺催化过硫酸铵产生自由基，自由基引发丙烯酰胺单体聚合，同时n,n'-亚甲基双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，进而形成三维网状结构，制成page凝胶。page凝胶电泳具有分辨率高、重复性好、操作简便等优点，因此被广泛应用于生物学、生物化学和分子生物学等领域。page凝胶试剂盒则是一种专门用于制备page凝胶的试剂套装。page凝胶试剂盒的主要优点在于它极大简化了page凝胶的制备过程，节省了实验人员的时间和精力。此外，试剂盒中的试剂经过优化和配比，可以制备出性能稳定、分离效果好的page凝胶，从而提高电泳实验的准确性和可重复性。然而传统的page凝胶试剂盒在制备page凝胶的过程中需要等下层胶凝固后才能注入上层胶，下层胶凝固需要30-60min，等待耗费时间长。且传统的page凝胶试剂盒在制备page凝胶的过程中容易产生气泡，从而导致page凝胶内部结构不均一，从而影响page凝胶的准确性。

技术实现思路

1、鉴于此，本发明提出一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒及其制备方法以解决上述问题。

2、本发明的技术方案是这样实现的：一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒，包括下层胶、上层胶、促凝剂。其中，下层胶包括下层胶a1、下层胶a2，上层胶包括上层胶b1、上层胶b2，促凝剂包括维生素c、溴化钙、硫酸铵。

3、进一步的，促凝剂由质量比为(5.0-6.0):(2.0-3.0):(0.5-1.0)的硫酸铵、溴化钙、维生素c组成。且硫酸铵、溴化钙、维生素c分别过100-200目筛网，按质量称重，以100-200r/min混合2-4min即得所述促凝剂。

4、进一步的，下层胶a1由质量体积比g/ml为(10-15):(20-25):(60-70)的丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、纯净水组成。且三羟甲基氨基甲烷盐酸盐浓度为1.3-17m，ph浓度为8.6-9.0。将称量好的丙烯酰胺与纯净水在100-200r/min条件下混合3-5min，形成均匀的溶液，然后向溶液中加入三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，以50-100r/min搅拌3-5min，得到下层胶a1。

5、进一步的，下层胶a2由质量体积比g/ml为(1.0-2.0):(0.4-0.8):(6.0-9.0):(3.0-5.0)的过硫酸铵、椰油醇硫酸钠、纯净水、甘油组成。将称量好的过硫酸铵加入到纯净水中，以100-200r/min搅拌3-5min，然后加入椰油醇硫酸钠，以100-200r/min搅拌3-5min，最后加入甘油，以100-150r/min搅拌3-5min，得到下层胶a2。

6、进一步的，上层胶b1由质量体积比g/ml为(2.0-4.0):(0.002-0.004):(4.0-6.0):(90.0-95.0)的丙烯酰胺、染料、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、纯净水组成。且三羟甲基氨基甲烷盐酸盐浓度为0.4-0.6m，ph浓度为6.6-7.0。将称量好的丙烯酰胺与纯净水在100-200r/min条件下混合3-5min，形成均匀的溶液，然后向溶液中加入三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、染料，以50-100r/min搅拌3-5min，得到上层胶b1。

7、进一步的，上层胶b2由质量体积比g/ml为(0.4-0.6):(0.1-0.3):(5.0-8.0):(2.0-3.0)的过硫酸铵、椰油醇硫酸钠、纯净水、甘油组成。将称量好的过硫酸铵加入到纯净水中，以100-200r/min搅拌3-5min，然后加入椰油醇硫酸钠，以100-200r/min搅拌3-5min，最后加入甘油，以100-150r/min搅拌3-5min，得到上层胶b2。

8、进一步的，染料为β-胡萝卜素、姜黄素、辣椒红素、叶绿素、红曲米色素其中的一种。

9、进一步的，一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

10、s1、取等体积下层胶a1与下层胶a2，混合均匀，得到混合液1，备用；

11、s2、取等体积上层胶b1与上层胶b2，混合均匀，得到混合液2，备用；

12、s3、向混合液1中加入促凝剂，涡旋混匀，得到混合液3，将混合液3注入制胶玻璃板中；

13、s4、向混合液2中加入促凝剂，涡旋混匀，得到混合液4，将混合液4缓慢加入到s3所述的制胶玻璃板中，插入梳齿，静置10-30min待胶凝固，即得一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒。

14、进一步的，s1、s2中混合的转速为500-1000r/min、混合时间为30-60s，s3、s4中涡旋转速为2000-3000r/min、涡旋时间为15-30s。

15、进一步的，s1中下层胶a1、a2与s2中上层胶b1、b2加入的体积比为(3-4):1，s3中促凝剂与混合液1体积比为(0.10-0.11):1，s4中促凝剂与混合液2体积比为(0.0040-0.0050):1。

16、与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明在试剂盒凝胶过程中，加入的促凝剂实现一步法凝胶，试剂盒中注入下层胶后即可注入下层胶，无需等下层胶凝固，便捷高效，节约实验人员等待时间。本发明促凝剂中维生素c、溴化钙和硫酸铵在凝胶形成过程中起到协同催化的作用。其中，维生素c利用其还原性促进化学反应的进行，溴化钙通过离子效应和催化作用加速聚合，而硫酸铵则通过盐效应和结构稳定作用来增强凝胶的稳定性。这三种成分共同作用，加速了丙烯酰胺单体之间的聚合反应，使得凝胶网络能够更快速地形成，并且结构更加稳定。同时，维生素c的还原性有助于丙烯酰胺单体之间更均匀的聚合，使得凝胶网络更加规整，减少因聚合不均而产生的气泡。溴化钙提供的正电荷，与凝胶体系中的负电荷基团相互作用，有助于电荷平衡，可以减少因静电排斥而产生的气泡。硫酸铵则可以降低丙烯酰胺单体的溶解度，促使其更均匀地析出并参与到聚合反应中，减少因溶解度差异产生的气泡。

17、本发明page凝胶试剂盒中的上层胶b1中加入天然染料，方便后续点样时看清胶孔，减少点错胶孔的概率，从而减少对样品的污染。且上述染料不随电泳迁移，不影响电泳效果。本发明page凝胶试剂盒中下层胶a2和上层胶b2中添加了甘油，增加凝胶的韧性和弹性，有助于在电泳过程中保持凝胶的稳定。本发明page凝胶试剂盒中下层胶a2和上层胶b2中添加了椰油醇硫酸钠，有助于提高凝胶的稳定性，减少page凝胶制备过程中出现的分层或沉淀现象。

技术特征：

1.一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒，其特征在于，包括下层胶、上层胶、促凝剂；所述下层胶包括下层胶a1、下层胶a2；所述上层胶包括上层胶b1、上层胶b2；所述促凝剂包括维生素c、溴化钙、硫酸铵。

2.如权利要求1所述的一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒，其特征在于，所述促凝剂由质量比为(5.0-6.0):(2.0-3.0):(0.5-1.0)的硫酸铵、溴化钙、维生素c组成。

3.如权利要求1所述的一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒，其特征在于，所述下层胶a1由质量体积比g/ml为(10-15):(20-25):(60-70)的丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、纯净水组成；所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐浓度为1.3-17m，ph浓度为8.6-9.0。

4.如权利要求1所述的一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒，其特征在于，所述下层胶a2由质量体积比g/ml为(1.0-2.0):(0.4-0.8):(6.0-9.0):(3.0-5.0)的过硫酸铵、椰油醇硫酸钠、纯净水、甘油组成。

5.如权利要求1所述的一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒，其特征在于，所述上层胶b1由质量体积比g/ml为(2.0-4.0):(0.002-0.004):(4.0-6.0):(90.0-95.0)的丙烯酰胺、染料、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、纯净水组成；所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐浓度为0.4-0.6m，ph浓度为6.6-7.0。

6.如权利要求1所述的一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒，其特征在于，所述上层胶b2由质量体积比g/ml为(0.4-0.6):(0.1-0.3):(5.0-8.0):(2.0-3.0)的过硫酸铵、椰油醇硫酸钠、纯净水、甘油组成。

7.如权利要求5所述的一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒，其特征在于，所述染料为β-胡萝卜素、姜黄素、辣椒红素、叶绿素、红曲米色素其中的一种。

8.如权利要求1所述的一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.如权利要求8所述的一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒的制备方法，其特征在于，所述s1、s2中混合的转速为500-1000r/min、混合时间为30-60s，所述s3、s4中涡旋转速为2000-3000r/min、涡旋时间为15-30s。

10.如权利要求8所述的一种蛋白质电泳用page凝胶试剂盒的制备方法，其特征在于，所述s1中下层胶a1、a2与所述s2中上层胶b1、b2加入的体积比为(3-4):1，所述s3中促凝剂与混合液1体积比为(0.10-0.11):1，所述s4中促凝剂与混合液2体积比为(0.0040-0.0050):1。

技术总结本发明提供了一种蛋白质电泳用PAGE凝胶试剂盒及其制备方法，本发明的PAGE凝胶试剂盒包括下层胶、上层胶、促凝剂。下层胶包括下层胶A1、下层胶A2。上层胶包括上层胶B1、上层胶B2。促凝剂包括维生素C、溴化钙、硫酸铵。本发明的试剂盒凝胶过程中，在上层胶、下层胶中加入促凝剂实现一步法凝胶，试剂盒中注入下层胶后即可注入上层胶，无需等下层胶凝固，极大节约试剂盒制备时间。本发明促凝剂中维生素C、溴化钙、硫酸铵通过不同机制共同作用，加速了丙烯酰胺单体之间的交联反应，使得凝胶网络能够更快速地形成。技术研发人员：马晓璇,严广华受保护的技术使用者：广州松鼠生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/29