一种质粒依赖型噬菌体及其用途

本发明涉及微生物领域，尤其涉及一种质粒依赖型噬菌体及其用途。

背景技术：

1、噬菌体是一种感染原核生物的病毒，是迄今为止地球上最为丰富的生物实体，能够以溶原或裂解或两者兼而有之的方式特异性感染细菌宿主。抗生素的过度使用加速多重耐药(multi-drug resistance，mdr)细菌的出现，据联合国预测，到2050年，每年将有一千万人由于mdr细菌感染死亡，对社会和经济造成严重威胁1。由于噬菌体疗法在体外模型和人体研究中具有良好的疗效和安全性，噬菌体作为抗生素的替代品备受关注2。与抗生素不同，噬菌体的开发成本较低、可持续再生，且可以通过对噬菌体基因组的筛查排除抗生素耐药基因(antibiotic resistance genes，args)、毒力因子和溶原相关基因等来保证噬菌体的生物安全性3。此外，噬菌体可以特异性地裂解易感细菌，而不影响非宿主细菌，在致病宿主细菌被灭活后，噬菌体也会减少，从而保持微生物的稳定性和多样性4。因此，噬菌体疗法可以被用于治疗由细菌(包括由mdr病原菌)感染引起的疾病5。

2、噬菌体疗法除了用于疾病治疗，在食品检测、食品病原菌防治等食品安全方面，也具有巨大的潜力。研究表明，噬菌体添加可以降低番茄种植体系的病原菌密度，提高土壤细菌多样性，并将疾病发病率降低80％6。考虑到强裂解性噬菌体具备感染并快速杀死细菌的能力，通过裂解性噬菌体的分离筛选并评估噬菌体作为生物防控技术控制土壤抗生素耐药细菌(antibiotic resistant bacteria，arb)污染的能力，可以为噬菌体的环境应用提供理论支撑和技术保障。

技术实现思路

1、本发明利用多重耐药细菌e.coli k12(rp4)从环境中分离出强裂解性噬菌体，通过分析噬菌体的生物学特性、基因组和系统发育关系评估噬菌体的裂解能力和生物安全性。此外，通过建立纯种噬菌体-土壤微宇宙模型，探究单一种类噬菌体技术防控土壤arb污染的效果。

2、本发明的目的在于提供一种质粒依赖型的强裂解性噬菌体。其具有对e.coli k12(rp4)污染土壤的生物防治效果。

3、为实现上述目的，本发明提供一种质粒依赖型噬菌体，其特征在于，所述质粒依赖型噬菌体的保藏号为cgmcc no.45976，于2024年5月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为大肠埃希氏菌escherichiaphage vb_ecop_lhp，和/或

4、所述质粒依赖型噬菌体的保藏号为cgmcc no.45977，于2024年5月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为大肠埃希氏菌escherichiaphage vb_ecop_iue。

5、本发明还提供所述质粒依赖型噬菌体用于防治土壤污染的用途。

6、进一步，所述土壤污染是土壤被e.coli k12(rp4)污染。

7、本发明还提供一种污染土壤的生物防治方法，其特征在于，使用了这所述的质粒依赖型噬菌体vb_ecop_lhp，和/或质粒依赖型噬菌体vb_ecop_iue。

8、进一步，将权利要求1所述的质粒依赖型噬菌体加入到被污染土壤中拌匀，再添加无菌水使其湿度为田间持水量的70±5％，随后置于30±5℃的恒温培养箱中培养2-10天，并在第0、1、2、3、5和7天进行碳源补充，碳源的添加量均按照2-3mol/l葡萄糖来添加。

9、进一步，所述碳源的添加量均按照2.8mol/l葡萄糖来添加。

10、进一步，所述质粒依赖型噬菌体的添加量与被污染土壤的耐药细菌含量比例为1pfu：1cfu。

11、进一步，所述培养的时间为2-7天。

技术特征：

1.一种质粒依赖型噬菌体，其特征在于，所述质粒依赖型噬菌体的保藏号为cgmccno.45976，于2024年5月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为大肠埃希氏菌escherichiaphage vb_ecop_lhp，和/或

2.权利要求1所述质粒依赖型噬菌体用于防治土壤污染的用途。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述土壤污染是土壤被e.coli k12(rp4)污染。

4.一种污染土壤的生物防治方法，其特征在于，使用了权利要求1所述的质粒依赖型噬菌体vb_ecop_lhp，和/或质粒依赖型噬菌体vb_ecop_iue。

5.如权利要求4所述污染土壤的生物防治方法，其特征在于，将权利要求1所述的质粒依赖型噬菌体加入到被污染土壤中拌匀，再添加无菌水使其湿度为田间持水量的70±5％，随后置于30±5℃的恒温培养箱中培养2-10天，并在第0、1、2、3、5和7天进行碳源补充，碳源的添加量均按照2-3mol/l葡萄糖来添加。

6.如权利要求5所述污染土壤的生物防治方法，其特征在于，所述碳源的添加量均按照2.8mol/l葡萄糖来添加。

7.如权利要求5所述污染土壤的生物防治方法，其特征在于，所述质粒依赖型噬菌体的添加量与被污染土壤的耐药细菌含量比例为1pfu：1cfu。

8.如权利要求5所述污染土壤的生物防治方法，其特征在于，所述培养的时间为2-7天。

技术总结本发明公开了一种质粒依赖型噬菌体及其用途。所述质粒依赖型噬菌体的保藏号为CGMCC No.45976，于2024年5月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为大肠埃希氏菌Escherichiaphage vB_EcoP_LHP，和/或所述质粒依赖型噬菌体的保藏号为CGMCC No.45977，于2024年5月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为大肠埃希氏菌Escherichiaphage vB_EcoP_IUE。所述质粒依赖型噬菌体可用于防治土壤污染。技术研发人员：苏建强,王言仔,赵沙,胡仕林,赵彩霞受保护的技术使用者：中国科学院城市环境研究所技术研发日：技术公布日：2024/9/29