一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法与流程

本发明涉及干细胞培养，具体为一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法。

背景技术：

1、脐带间充质干细胞作为一种具有广泛分化潜能的多功能干细胞，在医学领域具有巨大的应用潜力。然而，传统的干细胞培养方法往往存在细胞增殖速度慢、细胞活性下降等问题，限制了其临床应用。因此，开发一种高效、稳定的脐带间充质干细胞扩增培养方法，并维持细胞活性，具有重要的实际意义。

技术实现思路

1、鉴于现有技术中所存在的问题，本发明公开了一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法，采用的技术方案是，包括以下步骤：

2、s1：细胞来源，选取健康的新生儿脐带组织作为脐带间充质干细胞的来源；

3、s2：组织处理，将脐带组织用无菌pbs缓冲液冲洗干净，去除血管和结缔组织，保留富含干细胞的华氏胶组织；

4、s3：组织剪碎，将处理后的华氏胶组织剪碎至1mm3大小，以便后续培养；

5、s4：培养基配制，使用mscbm-np培养基作为基础培养基，并向其中加入适量的生长因子和细胞因子，以及特定的添加剂，配制成完全培养基；

6、s5：细胞接种，将剪碎的脐带组织块接种于预先准备好的细胞培养皿中，加入完全培养基；

7、s6：细胞培养，将培养皿置恒温恒湿培养箱中进行培养；

8、s7：培养过程，每天观察细胞生长情况，根据细胞密度和生长状态适时更换培养基，在细胞增殖过程中，可通过细胞传代进一步扩增细胞数量；

9、s8：细胞鉴定，通过流式细胞仪检测细胞的免疫表型，确保培养的细胞为脐带间充质干细胞。

10、作为本发明的一种优选技术方案，所述s4中的生长因子和细胞因子为fgf-2、egf、pdgf的其中一种。

11、作为本发明的一种优选技术方案，所述s4中特定的添加剂为elitegrotm-advanced。

12、作为本发明的一种优选技术方案，所述s4将mscbm-np培养基作为基础培养基，按照体积比1.5～2.5:100的比例加入elitegrotm-advanced添加剂，充分混合均匀。

13、作为本发明的一种优选技术方案，所述s5中培养环境温度为37℃，co2浓度为5％。

14、作为本发明的一种优选技术方案，所述s7中传代时，选择活力强、形态好的细胞进行传代，避免使用老化或受损的细胞。

15、作为本发明的一种优选技术方案，所述s7在培养过程中，根据细胞的生长情况，适时向培养基中添加生长因子和细胞因子，以维持细胞的活性和促进细胞的增殖。

16、本发明的有益效果：本发明通过优化培养基配方和培养条件，显著提高了细胞的增殖速率，缩短了培养周期，通过维持细胞活性的具体步骤，培养的细胞具有较高的活性和分化潜能，可广泛应用于临床研究和治疗，采用无血清培养基和特定的添加剂，避免了动物血清带来的病毒和病原体污染风险，提高了细胞培养的安全性。

技术特征：

1.一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法，其特征在于：所述s4中的生长因子和细胞因子为fgf-2、egf、pdgf的其中一种。

3.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法，其特征在于：所述s4中特定的添加剂为elitegrotm-advanced。

4.根据权利要求3所述的一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法，其特征在于：所述s4将mscbm-np培养基作为基础培养基，按照体积比1.5～2.5:100的比例加入elitegrotm-advanced添加剂，充分混合均匀。

5.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法，其特征在于：所述s5中培养环境温度为37℃，co2浓度为5％。

6.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法，其特征在于：所述s7中传代时，选择活力强、形态好的细胞进行传代，避免使用老化或受损的细胞。

7.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法，其特征在于：所述s7在培养过程中，根据细胞的生长情况，适时向培养基中添加生长因子和细胞因子，以维持细胞的活性和促进细胞的增殖。

技术总结本发明公开了一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法，包括以下步骤：S1：细胞来源，S2：组织处理，S3：组织剪碎，S4：培养基配制，S5：细胞接种，S6：细胞培养，S7：培养过程，S8：细胞鉴定，本一种脐带间充质干细胞扩增培养的方法，通过优化培养基配方和培养条件，显著提高了细胞的增殖速率，缩短了培养周期，通过维持细胞活性的具体步骤，培养的细胞具有较高的活性和分化潜能，可广泛应用于临床研究和治疗，采用无血清培养基和特定的添加剂，避免了动物血清带来的病毒和病原体污染风险，提高了细胞培养的安全性。技术研发人员：王开聚,王端贺,杨程,杨怀军受保护的技术使用者：上海循源生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/10