抗菌肽及其应用的制作方法

本发明属于生物医药，具体涉及抗菌肽及其应用。

背景技术：

1、抗生素耐药已成为21世纪主要的公共卫生威胁之一。据柳叶刀杂志报道，2019年估算有495万人的死亡与抗生素耐药相关。由英国政府委托进行的调查认为，到2050年，抗生素耐药每年可大约导致1000万人死亡，超过癌症导致的死亡数。抗生素耐药已成为全球紧迫问题，而可供临床选择治疗的抗生素面临越来越少的困境，亟待研发新型抗生素来解决。

2、抗菌肽是一类具有抗细菌作用的含有5-50个氨基酸的多肽，最初分离自昆虫，后来陆续从其他动植物和人体中均有分离得到，是生物在长期进化过程中为顺应环境、寻求生存而产生的免疫活性分子，是自然免疫的重要介质，在宿主对病原体入侵的免疫防御中起着极为重要的作用，被形象地称为“天然抗菌剂”。迄今已有3940个不同结构的抗菌肽(2024年1月9日获取数据自抗菌肽数据库apd3(https://aps.unmc.edu/ap/)。相比传统小分子抗生素，抗菌肽具有杀菌速度快、不易产生耐药性和具有多种抗感染机制等优点，在新型抗生素研发方面有着广阔的应用前景。

3、痤疮(acne vulgaris)又叫“青春痘”，是一种累及毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤病，好发于面部及前胸、后背，临床上主要表现为粉刺、丘疹、脓疱、囊肿或结节，常伴有毛孔粗大和皮脂溢出。

4、痤疮好发于青春期男女，青少年发病率高达93％，已成为全球第八大慢性疾病，易出现炎症后红斑和色素沉着。据统计，31.8％寻常痤疮可继发敏感性皮肤，3％～7％可遗留瘢痕，严重影响患者容貌和身心健康。

5、目前认为痤疮发病主要与雄激素诱导皮脂腺肥大过度分泌皮脂、毛囊导管口异常角化、痤疮丙酸杆菌等微生物增殖及免疫炎症反应有关。抑制痤疮丙酸杆菌的增殖及其引起的免疫炎症反应是治疗痤疮的核心策略之一，其中针对痤疮丙酸杆菌的抗菌药物包括四环素类米诺环素和多西环素，大环内酯类如红霉素。此外夫西地酸和克林霉素也是临床常用治疗药物。

6、目前抗痤疮丙酸杆菌的抗菌肽有少量报道，专利文献cn111184855a公开了抗菌肽sph12-38的mic为7μm(21μg/ml)。专利文献cn114106103a公开了抗菌肽p-amp108的mic大于20μm(33μg/ml)。相比临床常用的针对痤疮丙酸杆菌的抗菌药物，这些专利文献公开的抗菌肽的抗痤疮丙酸杆菌活性还有待进一步增强。

技术实现思路

1、本发明第一方面的目的，在于提供抗菌肽sk18或其盐。

2、本发明第二方面的目的，在于提供一种缀合物。

3、本发明第三方面的目的，在于提供一种融合蛋白。

4、本发明第四方面的目的，在于提供与本发明第一方面的抗菌肽sk18、本发明第二方面的缀合物、和/或本发明第三方面的融合蛋白相关的生物材料。

5、本发明第五方面的目的，在于提供一种组合物。

6、本发明第六方面的目的，在于提供本发明第一方面的抗菌肽或其盐、第二方面的缀合物、第三方面的融合蛋白、第四方面的生物材料、第五方面的组合物的应用。

7、本发明第七方面的目的，在于提供一种产品。

8、为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

9、本发明的第一个方面，提供抗菌肽sk18或其盐，所述抗菌肽sk18的氨基酸序列为：

10、a1)seq id no.1；或

11、a2)将seq id no.1经过一个或几个氨基酸的取代和/或缺失和/或添加且与seqid no.1具有相同功能的氨基酸序列；或

12、a3)与seq id no.1具有99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％或92％的同源性且与seq id no.1具有相同功能的氨基酸序列。

13、本发明的第二个方面，提供一种缀合物，包含修饰部分和本发明第一个方面的抗菌肽sk18。

14、优选地，所述修饰部分位于所述抗菌肽sk18的n端和/或c端；进一步位于所述抗菌肽sk18的c端。

15、优选地，所述修饰部分包含化学修饰、靶向部分、荧光染料和蛋白标签中的至少一种；进一步包含化学修饰。

16、优选地，所述化学修饰包含酰胺化、乙酰化、氨基化、甲基化、磷酸化、糖基化、泛素化中的至少一种；进一步包含酰胺化。

17、优选地，所述靶向部分包含配体、受体、抗体中的至少一种。

18、优选地，所述荧光染料包含fitc。

19、优选地，所述蛋白标签包含his、flag、gst、mbp、ha、myc、gfp、生物素中的至少一种。

20、本发明的第三个方面，提供一种融合蛋白，包含其他多肽和本发明第一个方面的抗菌肽sk18。

21、优选地，所述其他多肽位于所述抗菌肽sk18的n端和/或c端。

22、优选地，所述其他多肽和本发明第一个方面的抗菌肽sk18通过接头连接至所述抗菌肽sk18的n端和/或c端。

23、本发明的第四个方面，提供与本发明第一个方面的抗菌肽sk18、本发明第二个方面的缀合物、或本发明第三个方面的融合蛋白相关的生物材料，所述生物材料包含b1)～b8)中至少一种：

24、b1)编码本发明第一个方面的抗菌肽sk18、本发明第二个方面的缀合物、或本发明第三个方面的融合蛋白的核酸分子；

25、b2)包含b1)所述核酸分子的表达盒；

26、b3)包含b1)所述核酸分子的载体；

27、b4)包含b2)所述表达盒的载体；

28、b5)包含b1)所述核酸分子的转基因细胞系；

29、b6)包含b2)所述表达盒的转基因细胞系；

30、b7)包含b3)所述载体的转基因细胞系；

31、b8)包含b4)所述载体的转基因细胞系。

32、优选地，所述转基因细胞系不包含繁殖材料。

33、本发明的第五个方面，提供一种组合物，包含c1)～c3)中至少一种：

34、c1)本发明第一个方面的抗菌肽sk18或其盐；

35、c2)本发明第二个方面的缀合物；

36、c3)本发明第三个方面的融合蛋白。

37、优选地，所述组合物还包含其他活性抗菌成分。

38、优选地，所述其他活性抗菌成分包含青霉素类抗生素(如氨苄西林、苯唑西林等)、头孢类抗生素(如头孢拉定、头孢呋辛、头孢哌酮等)、碳青霉烯类抗生素(如亚胺培南，美罗培南等)、脂(糖)肽类抗生素(如多粘菌素类和万古霉素等)、氨基糖苷类抗生素、四环素类抗生素(如多西环素、米诺环素、土霉素等)、林可酰胺类抗生素(林可霉素，克林霉素)、大环内酯类抗生素(如阿奇霉素、罗红霉素、红霉素等)、氟喹诺酮类抗生素(如环丙沙星、洛美沙星等)和夫西地酸中的至少一种。

39、优选地，所述其他活性抗菌成分包含四环素类抗生素(如多西环素、米诺环素、土霉素等)、林可酰胺类抗生素(林可霉素，克林霉素)、大环内酯类抗生素(如阿奇霉素、罗红霉素、红霉素等)和夫西地酸中的至少一种。

40、优选地，所述菌包含细菌、真菌中的至少一种；进一步包含细菌；更进一步包含粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、痤疮丙酸杆菌中的至少一种；再进一步包含痤疮丙酸杆菌。

41、本发明的第六个方面，提供本发明第一个方面的抗菌肽sk18或其盐、本发明第二个方面的缀合物、本发明第三个方面的融合蛋白、本发明第四个方面的生物材料、和/或本发明第五个方面的组合物在e1)～e2)中任意一种中的应用：

42、e1)制备抗菌的产品；

43、e2)制备防治痤疮的产品。

44、优选地，e1)中所述产品包含药物、饲料、饲料添加剂、防腐剂、日化用品、织物、纸制品、医用材料、细胞培养基中的至少一种。

45、优选地，所述日化用品包含洗面奶、洗手液、沐浴液、洗发香波、漱口水、牙膏、香皂、化妆品、女性护理洗液、洗衣皂、洗衣液、洗衣粉、洗涤灵、消毒液、洁厕液中的至少一种。

46、优选地，所述织物包含衣物、床上用品、消毒纸巾、辅料、绷带中的至少一种。

47、优选地，所述纸制品包含卫生巾、卫生护垫、尿不湿、尿垫中的至少一种。

48、优选地，所述医用材料包含组织再生材料、组织修复材料、医用水凝胶材料、医用抗菌材料中的至少一种。

49、优选地，所述药物的剂型包含注射剂、口服剂、外用剂中的至少一种。

50、优选地，e1)中所述菌包含细菌、真菌中的至少一种；进一步包含细菌；更进一步包含粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、痤疮丙酸杆菌中的至少一种；再进一步包含痤疮丙酸杆菌。

51、优选地，e2)中所述产品包含药物、日化用品、医疗器械、保健品中的至少一种。

52、优选地，所述日化用品包含洗面奶、沐浴液、香皂、化妆品中的至少一种。

53、优选地，所述药物的剂型包含注射剂、口服剂、外用剂中的至少一种。

54、本发明的第七个方面，提供一种产品，包含d1)～d4)中至少一种：

55、d1)本发明第一个方面的抗菌肽sk18或其盐；

56、d2)本发明第二个方面的缀合物；

57、d3)本发明第三个方面的融合蛋白；

58、d4)本发明第五个方面的组合物。

59、优选地，所述产品为f1)～f2)中任意一种：

60、f1)抗菌的产品；

61、f2)防治痤疮的产品。

62、优选地，f1)中所述产品包含药物、饲料、饲料添加剂、防腐剂、日化用品、织物、纸制品、医用材料、细胞培养基中的至少一种。

63、优选地，所述日化用品包含洗面奶、洗手液、沐浴液、洗发香波、漱口水、牙膏、香皂、化妆品、女性护理洗液、洗衣皂、洗衣液、洗衣粉、洗涤灵、消毒液、洁厕液中的至少一种。

64、优选地，所述织物包含衣物、床上用品、消毒纸巾、辅料、绷带中的至少一种。

65、优选地，所述纸制品包含卫生巾、卫生护垫、尿不湿、尿垫中的至少一种。

66、优选地，所述医用材料包含组织再生材料、组织修复材料、医用水凝胶材料、医用抗菌材料中的至少一种。

67、优选地，所述药物的剂型包含注射剂、口服剂、外用剂中的至少一种。

68、优选地，f1)中所述菌包含细菌、真菌中的至少一种；进一步包含细菌；更进一步包含粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、痤疮丙酸杆菌中的至少一种；再进一步包含痤疮丙酸杆菌。

69、优选地，f2)中所述产品包含药物、日化用品、医疗器械、保健品中的至少一种。

70、优选地，所述日化用品包含洗面奶、沐浴液、香皂、化妆品中的至少一种。

71、优选地，所述药物的剂型包含注射剂、口服剂、外用剂中的至少一种。

72、本发明的有益效果是：

73、本发明首次公开了抗菌肽sk18或其盐，该抗菌肽sk18对标准菌株具有较好的抗菌活性，并且细胞毒性较小；该抗菌肽与apd数据库比对的最大相似度为50％，blastp比对的最小e值为0.88(e值大于0.0001代表没有同源序列)。