一种促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽DG-10及其应用

本发明属于多肽，更具体地是涉及一种促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10及其应用。

背景技术：

1、骨骼是人体的支架，为肌肉，内脏和其他人体组织提供重要支撑，健康的骨骼能够保护重要的内脏器官，预防外部冲击造成的损伤。青少年期是人体骨骼发育的关键时期，对促进青少年骨骼健康及人体智力发展具有重要意义。明代医药典籍《食物本草》曾记载：“鱼汤，平补五脏，益筋骨，和肠胃，安胎，治水气，食之宜人”。这说明长期食用鱼汤有助于人体的骨骼发育和成长，鱼汤可能含有促骨细胞生长发育的重要功能因子。促成骨肽是一类能够有效提升细胞ⅰ型胶原mrna的表达水平，促进骨钙素与碱性磷酸酶的合成从而发挥骨细胞增殖分化功能的活性肽。促成骨活性肽与化学药物相比安全性和生物利用率更高，使之成为当前促骨细胞生长的研究热点。

2、金枪鱼，被誉为“无公害、绿色、健康海鲜珍品、海洋黄金”的深海瑰宝，已被世界卫生组织(who)列为三大滋补鱼种之一。据《中国渔业统计年鉴》数据显示，2022年中国远洋渔业产量232.98万吨，金枪鱼产量为34.55万吨，所占比重约14.83％。金枪鱼在加工成鱼柳、罐头等深加工产品过程中，会产生大量的蒸煮汤汁，富含大量蛋白质及矿质元素，是挖掘促成骨活性肽的优质原料。目前，企业通常经简单的油水分离处理后直接排放，易导致蛋白质资源浪费并带来严重环保压力。因此，开发金枪鱼蒸煮液优势蛋白资源，挖掘并鉴定促成骨活性肽段序列对后续开发促成骨细胞增殖活性产品，促进金枪鱼副产物高值化利用具有重要意义。

技术实现思路

1、鉴于上述技术问题，本发明提供了一种促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10及其应用，以期为市场提供具有较高的促成骨细胞增殖活性的多肽小分子产品，并进一步为其在促成骨细胞增殖药物、食品行业、保健品行业及功能配料研发及应用方面奠定基础。

2、为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10，所述金枪鱼多肽dg-10的氨基酸序列为asp-gly-asp-ala-gly-ala-hyp-gly-pro-ser，分子量为859.341da。

3、第二方面，本发明提供了如下a1)-a8)中的任一种应用：

4、a1)如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10在制备骨折愈合药物中的应用：

5、a2)如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10在制备骨质疏松治疗药物中的应用；

6、a3)如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10在制备骨关节炎治疗药物中的应用；

7、a4)如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10在制备牙科药物中的应用；

8、a5)如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10在制备骨再生和修复药物中的应用；

9、a6)如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10在制备促进骨骼生长的组合物中的应用；

10、a7)如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10在制备促进骨骼生长的功能食品中的应用；

11、a8)如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10在制备促进骨骼生长的保健食品中的应用。

12、第三方面，本发明提供了一种骨折愈合药物，其有效成分包含如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10，可选地，其有效成分为第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10。

13、第四方面，本发明提供了一种骨质疏松治疗药物，其有效成分包含如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10，可选地，其有效成分为第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10。

14、第五方面，本发明提供了一种骨关节炎治疗药物，其有效成分包含如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10，可选地，其有效成分为第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10。

15、第六方面，本发明提供了一种牙科药物，其有效成分包含如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10，可选地，其有效成分为第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10。

16、第七方面，本发明提供了一种骨再生和修复药物，其有效成分包含如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10，可选地，其有效成分为第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10。

17、第八方面，本发明提供了一种促进骨骼生长的组合物，其有效成分包含如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10，可选地，其有效成分为第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10。

18、第九方面，本发明提供了一种促进骨骼生长的功能食品和/或保健食品，其有效成分包含如第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10，可选地，其有效成分为第一方面所述的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10。

19、再一方面，本发明提供了一种促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10的制备方法，包括以下步骤：

20、采用胰蛋白酶酶解金枪鱼蒸煮液蛋白，底物浓度3g/100ml-5g/100ml，酶解温度为45℃-55℃，ph值为7.5-9.0，酶解时间为1h-6h，酶比活为10000u/g-12000u/g：

21、沸水浴下灭活胰蛋白酶0.5h，离心分离，收集上清液，获得酶解液；

22、超滤膜收集分子量小于1000da分离液，再通过透析袋收集分子量小于500da分离液，减压浓缩，得到具有促成骨细胞增殖活性的肽液组分；

23、采用hplc-maldi-tof液质联用色谱分析，通过计算机分子对接模拟筛选技术，获得活性预测值较高的分子量为859.341da的肽段，即为金枪鱼多肽dg-10。

24、金枪鱼蒸煮液蛋白为直接市售采购商品或采用如下常规方法制取：

25、材料准备：选择新鲜的金枪鱼作为原料，确保其品质良好，无异味。

26、金枪鱼蒸煮：将金枪鱼放入蒸煮设备中，加入适量的水，控制蒸煮温度和时间。

27、过滤：蒸煮完成后，将蒸煮液通过卧式离心机进行离心过滤，去除其中的杂质和固体颗粒。

28、脱油分离：将过滤后的蒸煮液放入蝶式离心机中进行离心分离。在离心力的作用下，蒸煮液中的蛋白质会逐渐聚集并沉淀到离心管底部，蒸煮液中的鱼油和蛋白质将从上下出口分别流出，最后通过管式离心机获得较为干净的蒸煮液蛋白质溶液。

29、干燥：将离心分离得到的蛋白质进行干燥处理，以去除其中的水分。干燥方法可以采用喷雾干燥、真空干燥等，即得到干燥后的金枪鱼蒸煮液蛋白。

30、区别于现有技术，上述技术方案提供的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10由10个氨基酸组成，分子量为859.341da，氨基酸序列中含有一个羟脯氨酸，具有水溶性好、长度短、易合成、成骨细胞增殖活性强的特点。上述技术方案提供的促成骨细胞增殖的金枪鱼多肽dg-10的细胞增殖活性高，骨细胞最大增殖率高达132.75％，在促骨细胞增殖相关的骨科、牙科的医药、保健品、功能性食品等领域具有较好的应用前景。

31、上述技术实现要素：相关记载仅是本技术技术方案的概述，为了让本领域普通技术人员能够更清楚地了解本技术的技术方案，进而可以依据说明书的文字及附图记载的内容予以实施，并且为了让本技术的上述目的及其它目的、特征和优点能够更易于理解，以下结合本技术的具体实施方式及附图进行说明。