一种木霉发酵剂组合及其应用的制作方法

本发明涉及发酵工程，更具体的说是涉及一种木霉发酵剂组合及其应用。

背景技术：

1、木霉(trichoderma spp.)是自然界中分布广泛的一类重要农业病害生防菌。该类真菌对植物病原真菌具有显著抑制作用，对防治植物真菌性病害，促进农业生产具有重要意义。工业生产常用液体发酵大量获得木霉活菌体及其次代谢产物制备木霉生防制剂，但木霉在发酵过程中易产生大量泡沫，会影响木霉发酵进程并降低产品质量。微生物发酵工艺中常用消泡剂去除发酵培养过程中产生的泡沫，但适用于木霉发酵消泡的消泡剂研究较少。

2、市售消泡剂种类繁多，存在添加成分与目标发酵物之间的兼容性问题，且不同消泡剂的适用条件和消泡效果也有差异。不兼容的消泡剂不但会影响目标微生物的发酵生长，还会降低最终目标产物的获得率，例如：kochv等研究发现，无硅消泡剂对氧气传递没有太大影响，而含硅消泡剂在发酵初始阶段对氧气传递有着显著影响，但随着发酵的持续影响逐渐减弱，直至60～100min后完全消失。在酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)发酵中添加0.25％(v/v)的消泡剂，体积溶氧传递系数kla增加90％；而当消泡剂添加量低于0.25％(v/v)时，kla反而有所降低。anderssone等研究了不同浓度的聚乙二醇peg 3350和peg 600作为消泡剂对枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)和解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)合成α-淀粉酶的影响，发现在添加5％peg 3350及8％peg 600的发酵培养条件下，枯草芽孢杆菌合成α-淀粉酶的速度增加1倍。仅添加9％peg 3350时则抑制α-淀粉酶合成，而仅添加20％(v/v)的peg 600能够促进枯草芽孢杆菌合成α-淀粉酶，但抑制解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶的合成。holmesw等研究发现，酿酒酵母和巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)在摇瓶培养基中表达重组fc融合蛋白会受到消泡剂类型、浓度以及所用培养基的影响。

3、同时，木霉属下有绿色木霉、长枝木霉、康宁木霉等多个种，其各自也有着不同的发酵环境，且消泡剂的添加种类和添加量常属于机密，目前尚未见通用消泡剂的报道。

4、此外，在实际生产中，为增强生防菌发酵产物抑菌效果，可以在发酵体系中加入发酵助剂。然而，适用于木霉发酵生产的发酵助剂研究也较少。

5、因此，选择何种具体的消泡剂与发酵助剂优化木霉发酵方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种木霉发酵剂组合及其应用

2、研究不同消泡剂、发酵助剂对生防木霉菌代谢产物抑菌效果的影响，筛选合适的消泡剂及添加剂量，确定最佳添加发酵助剂及对应添加量，对提高木霉菌发酵生产效率，降低生防木霉菌生产成本具有重要的意义。

3、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

4、一种木霉发酵剂组合，包括消泡剂和发酵助剂。

5、优选的：消泡剂：b-404；发酵助剂：陈皮精油。

6、本发明还提供了上述木霉发酵剂组合在木霉发酵生产中的应用。

7、优选的：用于生产生防菌剂。

8、优选的：包括：培养基中添加体积占比0.01～0.1％的b-404用于木霉发酵培养；发酵得物添加体积占比3～11％的陈皮精油。

9、优选的：包括：培养基中添加体积占比0.1％的b-404用于木霉发酵培养；

10、防治辣椒白绢病时，发酵得物添加体积占比3％、5％、7％、9％或11％的陈皮精油；

11、防治辣椒枯萎病菌时，发酵得物添加体积占比5％、9％或11％；

12、防治猕猴桃软腐病菌时，发酵得物添加体积占比7％、9％或11％。

13、本发明还提供了基于上述任一应用制备得到的生防菌剂。

14、优选的：生防菌剂抑制以下病菌：辣椒白绢病菌、辣椒枯萎病菌和猕猴桃软腐病菌。

15、本发明还提供了上述木霉发酵剂组合，或上述任一应用，或上述生防菌剂在农业生产中的应用。

16、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种木霉发酵剂组合及其应用，取得的有益效果在于：

17、本发明以对病菌的抑菌效果作为对木霉发酵产物影响的评价指标，初步筛选出适合木霉(mht1134菌株)发酵的消泡剂。结果表明，最适合发酵的消泡剂为0.1％(v/v)为b-404，添加此消泡剂后的发酵产物对辣椒白绢病菌(sclerotium rolfsii)、辣椒枯萎病菌(fusarium oxysporum)和猕猴桃软腐病菌(phomopsis sp.)三种菌的抑制效果最好。

18、此外发现，培养液中添加3％、5％和7％(v/v)的陈皮精油显著增强了发酵产物对上述三种病原真菌的抑菌效果。而腐殖酸的加入则降低了发酵液对辣椒白绢病菌和猕猴桃软腐病菌的抑制能力，小幅提升了对辣椒枯萎病菌的抑制效果。综上，在木霉(mht1134菌株)发酵生产中，0.1％的b-404消泡剂与3％、5％和7％陈皮精油组合可以作为增益发酵助剂进行添加。

技术特征：

1.一种木霉发酵剂组合，其特征在于，包括消泡剂和发酵助剂。

2.如权利要求1所述的木霉发酵剂组合，其特征在于，所述消泡剂：b-404；所述发酵助剂：陈皮精油。

3.权利要求2所述木霉发酵剂组合在木霉发酵生产中的应用。

4.如权利要3所述的应用，其特征在于，用于生产生防菌剂。

5.如权利要4所述的应用，其特征在于，包括：培养基中添加体积占比0.01～0.1％的b-404用于木霉发酵培养；发酵得物添加体积占比3～11％的陈皮精油。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，包括：培养基中添加体积占比0.1％的b-404用于木霉发酵培养；

7.基于权利要求4～6任一应用制备得到的生防菌剂。

8.如权利要求7所述的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂抑制以下病菌：辣椒白绢病菌、辣椒枯萎病菌和猕猴桃软腐病菌。

9.权利要求1或2所述木霉发酵剂组合，或权利要求3～6所述任一应用，或权利要求7或8所述生防菌剂在农业生产中的应用。

技术总结本发明公开了一种木霉发酵剂组合及其应用。涉及发酵工程技术领域。本发明提供了木霉发酵剂组合以及相关应用。本发明筛选出适合木霉发酵的消泡剂。结果表明，最适合发酵的消泡剂为0.1％(V/V)为B‑404，添加此消泡剂后的发酵产物对辣椒白绢病菌、辣椒枯萎病菌和猕猴桃软腐病菌三种菌的抑制效果最好。此外发现，培养液中添加3％、5％或7％(V/V)的陈皮精油显著增强了发酵产物对上述三种病原真菌的抑菌效果。综上，在木霉发酵生产中，0.1％的B‑404消泡剂与3％、5％或7％陈皮精油组合可以作为增益发酵助剂进行添加。技术研发人员：卯婷婷,章行远,刘少兰,班菲雪,乔飞受保护的技术使用者：贵州省植物保护研究所技术研发日：技术公布日：2024/9/12